Traza el condicionamiento del miedo en ratones

El objetivo general del siguiente experimento es evaluar el aprendizaje y la memoria dependientes del hipocampo en ratones mediante el uso del condicionamiento de esferas traza. Esto se logra entrenando primero al animal para que asocie un tono auditivo con un estímulo aversivo. Al día siguiente, el animal se coloca en un contexto nuevo y se registra el comportamiento de congelación en reacción al tono.

Al tercer día, el animal es devuelto al contexto original y se registra el comportamiento de congelación. Los resultados muestran que los ratones entrenados con el emparejamiento de tonos de choque muestran más comportamiento de congelación que los que no reciben el choque. Este método se puede utilizar para proporcionar información sobre el aprendizaje y la memoria dependientes del hipocampo y los ratones, y es especialmente útil cuando se utiliza en el estudio de animales transgénicos y knockout.

El siguiente procedimiento se realiza en una cámara de condicionamiento del miedo alojada dentro de una cámara de atenuación de sonido más grande. Con la puerta de la cámara cerrada, coloque las luces para alcanzar el nivel de iluminación deseado, si se coloca correctamente, la luz indicadora de nivel de luz debe estar apagada. Utilice un medidor de sonido para confirmar un nivel constante de ruido de fondo dentro de cada cámara.

A continuación, calibra el tono utilizado durante el entrenamiento. Utilice un dispositivo de calibración externo para calibrar el nivel de choque. Coloque un cable en una barra y otros tres o cuatro barras encima.

Utilice el generador de choque para administrar el choque y calibrar hasta que se alcance el nivel correcto. Repite este paso para cada cámara de condicionamiento del miedo. Una vez que el aparato esté preparado, transfiera a los sujetos a una sala de espera separada de la sala de pruebas para reducir la manipulación excesiva.

Antes de la prueba, etiquete las colas al menos 30 minutos antes de la prueba o el día anterior. Cuando esté listo para comenzar, transfiera el ratón de prueba a una jaula limpia y etiquetada para transportarlo a la cámara de condicionamiento del miedo. Coloque el mouse en la cámara, cierre la puerta e inicie el programa de software.

El primer día de entrenamiento, los ratones pueden explorar la cámara durante tres minutos. A continuación, el software presenta un 22º tono, seguido de un intervalo de 22º trazado que termina en un leve choque en el pie. Observe al sujeto para confirmar que recibió los estímulos aversivos.

Un intervalo entre juicios de 202 separa cinco ensayos de condicionamiento. Después de las pruebas, permita que el animal permanezca en la cámara de pruebas durante un minuto antes de retirarlo, vuelva a colocar el animal en la jaula de transferencia y regrese a la sala de espera. Si hay ratones adicionales para probar en su jaula doméstica individualmente, aloje al ratón hasta que todos los ratones hayan completado la prueba.

Limpie la cámara de prueba con isopropanol al 30% en preparación para el próximo animal. Repita estos pasos hasta que todos los ratones hayan sido entrenados. Devuelve a todos los ratones a su habitación de colonia.

Una vez que se ha analizado el último ratón de la cohorte al día siguiente, se realiza la prueba con animales. Para el rastro del miedo a la memoria. En este día, reemplace la ropa de cama de las jaulas de transferencia con papel triturado para cambiar su contexto.

También se cambia el contexto de la cámara. Coloque una lámina de espuma debajo de un inserto de acrílico transparente en el piso para alterar su textura y apariencia. Coloque un divisor acrílico dentro del área de prueba.

Cambie el olor colocando extracto de vainilla en un bote de suero debajo del piso. Inserte en este día, limpie la cámara con 70% de etanol en lugar de 30% de isopropanol entre cada ratón. Cuando esté listo, coloque el mouse en la cámara de prueba e inicie el programa.

La sesión comienza con un período de referencia de dos minutos, seguido de tres presentaciones de tono 22. Hay un intervalo entre 222 juicios entre cada presentación de tonos. Una vez finalizada la sesión, regrese a los ratones a su jaula doméstica y continúe hasta que todos los animales hayan sido examinados en preparación para la prueba del día siguiente.

Restaure el mismo contexto que se usó el primer día. Limpie la cámara con un 30% de isopropanol. El condicionamiento contextual se lleva a cabo el tercer día.

Usando las mismas jaulas de transferencia que el primer día, recupere el ratón de prueba de la sala de espera. Coloque el mouse en la cámara de prueba y luego inicie el programa para probar la memoria contextual. Ejecute un programa para registrar el comportamiento de congelación durante ocho minutos.

Después de este tiempo, regrese el ratón a su jaula de origen y continúe con las pruebas como se muestra anteriormente, los resultados representativos muestran un aumento en el comportamiento de congelación en los animales que reciben el emparejamiento de tonos de choque en el transcurso de la sesión de entrenamiento. En un nuevo contexto, los ratones que recibieron el estímulo de choque aversivo tuvieron más congelación en comparación con los ratones que no recibieron el choque durante el rastreo del tono basal y el intervalo entre ensayos. Cuando se devolvió al contexto original, los animales que recibieron el estímulo de choque aversivo mostraron un comportamiento de congelación consistentemente más alto durante el período de ocho minutos.

Después de ver este video, debería tener una buena comprensión de cómo usar el condicionamiento de miedo de rastreo para comprender el aprendizaje y la memoria dependientes del hipocampo y los ratones.