Capsular serotipificación de Streptococcus pneumoniae Uso de la Reacción Quellung

El objetivo general de este procedimiento es realizar la estereotipación capsular del estreptococo pneumoniae o el neumococo mediante la reacción de sofocación. Esto se logra inoculando primero el caldo de infusión cardíaca con un cultivo puro de neumococo fresco durante la noche. En el segundo paso, se transfiere una gota de inóculo a un portaobjetos de microscopio de vidrio.

A continuación, se añade el suero antis en igual volumen sobre el portaobjetos. En el paso final, se mezclan ambas gotas y se coloca un cubreobjetos sobre la suspensión. En última instancia, la suspensión se puede ver bajo contraste de fase para observar la reacción pulmonar de sofocación positiva o negativa.

Este método demuestra el método de referencia para la fiebre neumocócica. El método es simple, fácil de realizar y fácil de interpretar. La demostración visual de este método es importante, ya que las personas nuevas en esta técnica pueden tener dificultades para reconocer cuál es una densidad celular adecuada para realizar la prueba de reparos.

Comience usando un asa estéril desechable de un microlitro para obtener un pequeño barrido de un cultivo puro fresco durante la noche de neumococos cultivado en una placa sólida y no selectiva de agar sangre de caballo para inocular los neumococos en 100 microlitros de caldo de infusión cardíaca. La suspensión debe parecer visiblemente turbia y agitar suavemente el tubo para emulsionar la solución celular. Use un nuevo bucle de un microlitro para transferir una gota del inóculo a un microscopio de vidrio.

A continuación, deslice el dedo, coloque una pequeña cubierta circular sobre la suspensión y compruebe la densidad de la suspensión bajo contraste de fase a veces 400 aumentos. Si el inóculo es demasiado pesado, diluya la suspensión celular con más caldo y vuelva a mezclar suavemente las células si el inóculo es demasiado ligero. Por ejemplo, si hay menos de 50 células visibles, agregue más bacterias a la suspensión celular y vuelva a mezclar suavemente.

Con experiencia. La densidad de la suspensión de la celda se puede juzgar agitando y sosteniendo la suspensión a la luz, donde debería parecer visiblemente turbia. Cuando se observa bajo el microscopio, la solución celular debe ser aproximadamente así de densa.

Una vez que se haya logrado la dilución óptima de las células bacterianas, transfiera aproximadamente un microlitro del inóculo al microscopio de vidrio. Desliza siguiente. Usando un nuevo bucle, agregue un volumen igual de temperatura ambiente.

Antisuero en el portaobjetos y mezclar bien ambas gotas. Con el lazo, coloque inmediatamente un pequeño cubreobjetos en la suspensión, teniendo cuidado de no tocar la caída con las pinzas. A continuación, vea la suspensión bajo contraste de fase como se acaba de demostrar.

Se observa una reacción pulmonar de sofocación negativa cuando se observa poca o ninguna hinchazón de las células neumocócicas. Al igual que el control negativo, una suspensión de células neumocócicas sin antisueros añadidos. Una reacción pulmonar de sofocación positiva se produce cuando el anticuerpo específico del tipo se une a la cápsula del neumococo, lo que provoca un cambio en su índice de refracción.

Cuando se observan bajo contraste de fase, las bacterias parecen hinchadas y más visibles. No olvide que cuando realiza este procedimiento, en realidad está trabajando con microorganismos vivos. Por esa razón, debe tener cuidado de seguir las buenas prácticas de laboratorio, usar ropa protectora, el equipo de laboratorio adecuado y desechar todo el equipo y los reactivos al final del proceso de manera segura.

Una vez dominada, esta técnica se puede realizar en aproximadamente 10 minutos si se realiza correctamente. Después de ver este procedimiento, debería tener una buena idea de cómo serotipar el neumococo utilizando la reacción qua lung. Esta técnica es importante para comprender la epidemiología neumocócica, tanto en el transporte nasofaríngeo como en una enfermedad invasiva.