Evaluación del desempeño funcional en el Mdx Modelo de ratón

El objetivo general de estos procedimientos es determinar la funcionalidad muscular mediante varias pruebas funcionales no perjudiciales. La fuerza de las cuatro extremidades se puede evaluar mediante la prueba de fuerza de agarre, la coordinación del equilibrio y la condición muscular se pueden evaluar en las pruebas de dos extremidades y cuatro extremidades colgantes. La varilla del rotor también se utiliza para evaluar el equilibrio, la coordinación y la condición.

La carrera forzada en cinta de correr se puede utilizar para exacerbar la progresión de la enfermedad o antes de una prueba funcional para agotar a los ratones. Estas pruebas funcionales pueden utilizarse para evaluar de forma fiable el papel de la genética y el efecto de los posibles compuestos terapéuticos en el rendimiento muscular. La primera prueba que se muestra es la prueba de fuerza de agarre de cuatro extremidades.

Asegúrese de que la configuración del transductor de fuerza esté en el modo de tensión máxima para tirar y use gramos mientras la unidad restablece el medidor al comienzo de cada grabación. Deje que cada mouse tire tres veces seguidas. Agarra el ratón por la cola y muévelo horizontalmente hacia la cuadrícula.

Compruebe que el ratón agarra la rejilla firmemente con las cuatro patas y tira para romper su agarre. La fuerza más alta aplicada a la rejilla se mostrará en la pantalla de los transductores, que se puede registrar manual o automáticamente. Rechace cualquier ensayo en el que el ratón use solo uno cuatro PA o las extremidades traseras o gire durante el poste o claramente no muestre resistencia al poste.

Después de que el ratón haya tirado tres veces, devuélvalo a la jaula durante un período de descanso de al menos un minuto. A continuación, deje que el ratón realice cuatro series de sondeos, cada una seguida de un breve período de descanso. De esta manera, el ratón tira un total de 15 veces.

El aparato para la prueba de colgar dos extremidades es una percha de ropa metálica de dos milímetros de grosor firmemente asegurada a un estante con cinta adhesiva. Mantenga el hangar a 37 centímetros por encima de una capa de ropa de cama, sosteniendo el mouse a través de la cola. Acércalo al alambre.

Deje que el ratón agarre el cable solo con las dos cuatro patas y baje las extremidades traseras de tal manera que el ratón solo cuelgue con las dos cuatro patas en el alambre. Tan pronto como se suelte el mouse, inicie el temporizador. Después de ser liberado, un ratón fuerte intentará atrapar el cable con las cuatro extremidades y la cola, lo cual está permitido.

Cuando un mouse muestra un comportamiento incorrecto, como balancearse en el cable o saltar deliberadamente del cable, reemplace inmediatamente el mouse en el cable sin detener el temporizador. Cuando los ratones puedan colgarse durante 600 segundos, quítelos del cable y devuélvalos a la jaula. Cuando los ratones se caigan del cable, detenga el temporizador y registre el tiempo de suspensión directamente.

Vuelva a probar estos ratones un máximo de dos veces más. Para la prueba de colgar las cuatro extremidades, coloque la tapa de una jaula de ratas a 25 centímetros por encima de la ropa de cama blanda para evitar que los ratones se lastimen al caer, pero también para disuadir a los ratones de saltar intencionalmente de la rejilla. A continuación, coloque el ratón en la rejilla para que agarre la rejilla con sus cuatro patas.

A continuación, invierta la cuadrícula para que el ratón quede colgado e inicie inmediatamente el temporizador. Si un ratón puede colgarse durante 600 segundos, devuélvalo a su jaula directamente. Vuelva a probar los ratones que se caigan de la red antes de 600 segundos para un máximo de dos veces más para la varilla del rotor.

Prueba, ajuste la velocidad inicial a cinco RPM. Luego, coloque hasta cinco ratones en el tubo mientras gira lentamente. Una vez que todos los ratones estén posicionados, aumente la velocidad del tubo de cinco a 45 RPM durante 15 segundos.

Luego déjelo a 45 RPM durante el resto de la carrera. Continúe supervisando la ejecución durante toda la prueba. El tiempo de funcionamiento es registrado continuamente por el software y se detiene automáticamente cuando un ratón se cae del tubo.

De este modo, se activa la barra de tiempo situada debajo del tubo. Reposicione los ratones que se dan la vuelta mientras corren sin detener el tubo giratorio. Finalice la sesión de prueba para cualquier ratón que pueda correr 500 segundos y devuélvalo a su jaula.

Dale a los ratones que caigan antes. Un máximo de dos intentos más que les permitan mejorar su tiempo de carrera. Para la prueba de ejercicio en la cinta de correr, coloque los ratones en una cinta de correr horizontal.

Ponga en marcha la cinta de correr a una velocidad de carrera de 12 metros por minuto. Durante la primera sesión, anima a los ratones a correr empujándolos suavemente cuando estén cerca del final del cinturón. Después de que los ratones hayan corrido durante 30 minutos, pruébelos inmediatamente en la prueba de colgar dos extremidades o colóquelos nuevamente en su jaula.

La fuerza de agarre de las cuatro extremidades de los ratones MDX hembra de nueve semanas de edad se vio afectada en comparación con los ratones de tipo salvaje, como se muestra aquí. Sin embargo, la fatiga promedio fue inferior al 10% y no varió entre las deformaciones en las dos pruebas de suspensión de extremidades realizadas una vez por semana. Tanto los ratones machos MDX como los ratones de tipo salvaje mostraron una curva de aprendizaje en las primeras semanas de pruebas.

Sin embargo, el rendimiento de los ratones MDX fue peor en todos los puntos temporales en comparación con los ratones de tipo salvaje. El tiempo máximo de suspensión permitido de 600 segundos se indica mediante la línea de puntos. Cuatro. El rendimiento de colgar las extremidades se evaluó una vez por semana en ratones machos MDX y de tipo salvaje.

Con el tiempo, los ratones MDX se colgaron durante menos tiempo que los ratones de tipo salvaje. Los tiempos de funcionamiento de la varilla del rotor no difirieron entre los machos jóvenes MDX y los ratones de tipo salvaje directamente después de correr en una cinta de correr durante 30 minutos. Los ratones hembra se probaron con la prueba de colgar dos extremidades, mientras que todos los ratones de tipo salvaje permanecieron colgados hasta el tiempo máximo permitido.

Todos los ratones MDX se cayeron del cable antes. La presencia de daño en la membrana se determinó evaluando los niveles séricos de creatina quinasa que se fugan de las fibras musculares a través de desgarros en la membrana. Los niveles de creatina quinasa se elevaron en los ratones MDX en comparación con los ratones de tipo salvaje antes del ejercicio y el ejercicio en cinta rodante aumentó los niveles en los ratones MDX, mientras que permanecen bajos en los ratones de tipo salvaje.

Los músculos de los ratones MDX son muy vulnerables al ejercicio en la cinta de correr. Empeorando la patología de la enfermedad de forma extensiva después de unas semanas de correr estas tinciones h y e de los cuádriceps de 16 semanas de edad sin ejercicio y en cinta rodante. Los ratones MDX muestran que se desarrolló una fibrosis y necrosis extensas, los músculos de los ratones de tipo salvaje sometidos al mismo protocolo de carrera no se vieron afectados.

Las diferencias en los antecedentes genéticos influyen en el rendimiento funcional, el rendimiento de la prueba de colgamiento de dos extremidades difirió significativamente entre dos cepas de ratones MDX. Los resultados de la prueba de colgamiento de cuatro extremidades fueron ligeramente más altos en el fondo mixto. Ratones MDX.

Los tiempos de funcionamiento de las bielas del rotor también difieren ligeramente entre las deformaciones. Al intentar este procedimiento, es importante recordar que siempre se deben utilizar grupos suficientemente potenciados de ratones de edad y sexo con los antecedentes genéticos correspondientes. Además, mantenga las condiciones experimentales lo más estandarizadas posible.

Por ejemplo, use la misma hora del día y del día de la semana, la misma habitación y el mismo experimentador.