Electrofisiológico Grabación desde Drosophila Labellar Taste Sensilla

El objetivo general de este procedimiento es medir las respuestas de los sentidos gustativos individuales en el labum de drosophila. Esto se logra construyendo primero una plataforma de electrofisiología y configurando todo el equipo necesario. El segundo paso es preparar la mosca para la grabación.

A continuación, se estimula un lum individual con un compuesto gustativo mientras se registra simultáneamente la respuesta neuronal. En última instancia, el registro electrofisiológico de la punta de la etiqueta individual se utiliza para mostrar las respuestas de la illa gustativa a diferentes compuestos gustativos. La demostración visual de este método es fundamental, ya que los pasos de preparación de la mosca pueden ser técnicamente desafiantes y difíciles de aprender.

En este procedimiento, recoja las moscas ELO recién recibidas de los cultivos de moscas bien mantenidos. Luego envejézcalos de cinco a 10 días en viales de cultivo fresco antes de registrarlos, antes de la preparación de la mosca, enfríe la placa del microscopio en hielo durante 15 a 30 minutos. A continuación, rellene el electrodo de referencia de vidrio con una solución B y e.

Y golpea suavemente las burbujas bajo el microscopio de disección. Use las pinzas para romper una pequeña sección de la punta. Posteriormente, utilice la acción capilar para extraer las burbujas restantes con el tejido.

A continuación, deslice el electrodo de referencia lleno de B y E sobre el cable del portaelectrodos y, para tener cuidado de no introducir burbujas de aire después de eso, aspire una mosca en una punta de pipeta P 200. Colóquelo en una cubeta de hielo y enfríe durante 30 segundos a un minuto. A continuación, retire la placa del microscopio del hielo y colóquela debajo del microscopio después de limpiar la humedad.

A continuación, golpee suavemente la mosca de la punta de la pipeta sobre la placa del microscopio con un aumento bajo. Retire las cuatro patas con un par de pinzas mientras sostiene el Forex estable con el otro par de pinzas. Coloca la mosca sobre su lado ventral con el lado dorsal hacia arriba.

Siempre tenga cuidado de evitar tocar la etiqueta con las pinzas durante el proceso de preparación para minimizar el daño mecánico mientras sostiene la mosca en su lugar con un par de pinzas, inserte el electrodo de referencia en la línea media del tórax dorsal posterior a aproximadamente 45 grados en la dirección de la cabeza. A continuación, fije el portaelectrodos de referencia con arcilla para modelar de forma que la mosca sea visible bajo el microscopio con un gran aumento. Maniobre e incline el electrodo de vidrio en su cuello y cabeza, y deslice la mosca hacia el portaelectrodos de referencia con dos pares de pinzas.

Ahora, extienda suavemente el palco con un par de pinzas y deslice la mosca más abajo del electrodo de referencia de vidrio hasta que la punta del electrodo esté dentro de la etiqueta y el palco esté completamente extendido. En este paso, fije el portaelectrodos de referencia al micromanipulador montado en la mesa de aire. Coloque un lóbulo de labelo en el campo de visión del microscopio con un gran aumento y en línea con la corriente de aire humidificada.

Después de eso, encienda el sistema de adquisición digital de la computadora de flujo de aire humidificado o DAS y el amplificador. A continuación, use una jeringa y un tubo de plástico para extraer una pequeña cantidad de agua ultrapura a través del tubo al menos 10 veces. Para enjuagar el electrodo de registro de vidrio, enjuague posteriormente el electrodo de registro con TAST al menos cinco veces.

A continuación, llene el electrodo de registro aproximadamente de un tercio a la mitad de su capacidad con sabor y retírelo del tubo. Si hay burbujas de aire, toque para liberarlas o simplemente rellene el electrodo. Ahora deslice el electrodo sobre el cable plateado de la etapa principal de forma rápida y suave.

Con el fin de evitar la introducción de burbujas de aire para estimular el envío único, en primer lugar, utilice el micromanipulador para alinear el electrodo de registro con los sentidos de interés. A continuación, presione el pedal para activar el modo de adquisición del amplificador. A continuación, avance el electrodo de registro de sabor y lleno con la perilla de control fino del micro manipulador con cuidado hasta que haga contacto con la punta del sensor y comience a grabar.

Retire el electrodo después de uno o dos segundos. Repita el procedimiento nuevamente con otra illa y espere al menos un minuto entre presentaciones al mismo lum. Si se graba con un solo sabor y durante un período prolongado de tiempo, el sabor y la solución pueden secarse y la solución en la punta puede volverse más concentrada.

Esto se puede remediar contactando suavemente la punta del electrodo de vidrio con papel liso para eliminar una pequeña cantidad de líquido por capilaridad para registrar las respuestas a otro sabor y enjuagar y cargar el electrodo de registro con nuevo sabor y repetir el procedimiento. Guarde periódicamente los archivos de datos con información de identificación como la fecha, el genotipo y el sabor. Esta figura muestra la respuesta de un centum a una sacarosa de azúcar.

El mismo centum no responde a un compuesto amargo como la berberina, y esta figura muestra que un sens de tipo ojo, que contiene una neurona sensible amarga, muestra picos de amplitud más grandes en respuesta a la berberina y picos de amplitud más pequeños en respuesta a la sacarosa. Aquí se muestra un representativo de resultados electrofisiológicos subóptimos. Este rastro representa una falta total de señal.

Este es el ruido de 50 o 60 hercios de fuentes eléctricas externas, y este es el ruido estocástico. Este rastro representa que la neurona sensorial Meno estaba disparando sola mientras que tanto la neurona receptora gustativa amarga como la neurona sensorial Meno estaban disparando. Después de ver este video, debería tener una buena comprensión de cómo registrar las respuestas neuronales de Oph Atory Silla en el labum.