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DOI: 10.3791/51441-v
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Un protocolo simple para determinar el contenido de lípidos neutros de células de algas utilizando un procedimiento de tinción de Rojo Nilo se describe. Esta técnica de ahorro de tiempo ofrece una alternativa a los protocolos de cuantificación de lípidos basados en gravimétricos tradicionales. Ha sido diseñado para la aplicación específica de la supervisión del rendimiento de bioprocesos.
El objetivo general del siguiente experimento es medir el contenido de lípidos neutros de las células de algas utilizando un tinte fluorescente rojo del Nilo. Esto se logra suspendiendo primero las células en una solución de etanol para permear la pared celular y la membrana celular. Como segundo paso, se agrega un tinte fluorescente rojo del Nilo, que ingresa a las células y se acumula en las regiones no polares de la célula, incluidos los cuerpos lipídicos neutros.
A continuación, las muestras se exponen a una fuente de luz de excitación de 530 nanómetros, lo que hace que el rojo del Nilo absorbido en los cuerpos lipídicos neutros emita una fluorescencia de 604 nanómetros. Los resultados se obtienen a escala masiva mediante la realización de las pruebas individuales en un micro pocillo múltiple y el uso de un espectrofotómetro para producir lecturas rápidas de fluorescencia. Las lecturas muestran una relación lineal entre el contenido neutro de lípidos de las células lgal y la intensidad de la medición de fluorescencia.
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