Determinación de la actividad locomotora espontánea en Drosophila melanogaster

El objetivo general de este procedimiento es cuantificar la actividad locomotora espontánea de las moscas de la fruta. Esto se logra primero recolectando y envejeciendo moscas experimentales. El segundo paso es configurar monitores de población en una incubadora de temperatura controlada y descargar el software adecuado.

A continuación, las moscas se transfieren a archivos de vidrio y luego se colocan dentro de monitores de población donde se ejecutan los monitores de actividad. El último paso es analizar los datos. En última instancia, los monitores de población se utilizan para mostrar las diferencias en la actividad física espontánea de las moscas.

La principal ventaja de esta técnica sobre los métodos existentes, como el eje geográfico negativo, es que permite un registro continuo sencillo, fiable y objetivo de la actividad física espontánea de múltiples poblaciones de moscas. Este método puede ayudarnos a determinar cómo afectan las diferentes manipulaciones a las moscas. La actividad física espontánea que demuestre el procedimiento será Suzanne Kowski, asistente de laboratorio de un laboratorio Para comenzar a preparar los alimentos de acuerdo con los pasos enumerados en el protocolo de texto adjunto y dejar que se enfríen con una mezcla constante en un plato caliente.

Alícuota cinco mililitros de alimento en cada frasco de vidrio estrecho, asegurándose de que la cantidad de comida esté por debajo del anillo más bajo de la población. Monitoree después de que los alimentos se enfríen a temperatura ambiente. Cubra los viales con tapones de esponja y manténgalos a cuatro grados centígrados durante un máximo de dos semanas.

Caliente los viales a temperatura ambiente antes de usarlos. A continuación, cultive moscas Canton S en viales de plástico con alimento de laboratorio estándar. Mantenga los viales en una cámara humidificada a temperatura controlada a 25 grados centígrados en un ciclo de luz y oscuridad de 12 horas.

Limpie las moscas adultas de los viales por la mañana. A continuación, separe las moscas recién encerradas por sexo en una almohadilla de dióxido de carbono dentro de las ocho horas posteriores a la esterilización para asegurarse de que las moscas hembras son vírgenes. Prepare 10 viales de moscas parentales colocando machos y hembras vírgenes de cinco a 10 días de edad.

Moscas en un frasco de comida estándar con varios granos de levadura. Mantenga las moscas en una incubadora a 25 grados centígrados con un ciclo de luz y oscuridad de 12 horas durante dos días. Pase las moscas a un nuevo frasco de plástico cada dos días y guarde los viales con los huevos resultantes en una incubadora a 25 grados centígrados.

Luego limpie y deseche las moscas que cerró durante el primer día y devuelva los viales a la incubadora para recolectar una población más sincronizada de moscas el segundo día. A continuación, en una almohadilla de dióxido de carbono, recoja rápidamente 25 moscas macho y 25 hembras por vial con una cuchara de metal en 24 horas. Anote el día de ELO en el vial.

Reúna al menos cinco viales de Replicate cada uno. Para grupos experimentales y control. Mantenga los viales en cámaras ambientales con temperatura controlada a 25 grados centígrados con un ciclo de luz y oscuridad de 12 horas.

Pase las moscas a un nuevo frasco de plástico cada dos días durante 10 días. Usando un embudo, coloque los monitores de población en una incubadora de temperatura controlada. A continuación, conecte cada monitor con un cable telefónico de cuatro hilos a la unidad de interfaz de la fuente de alimentación o PSIU a través de un divisor de cinco vías.

A continuación, conecte el cable telefónico a la PSIU. Conecte la PSIU a una toma de corriente de 100 a 240 voltios y conecte el conector de salida de la fuente de alimentación a uno de los jax de acoplamiento de PSIU. A continuación, descargue el software USB utilizado por la PSIU para sintetizar un enlace de datos entre el programa informático y la PSIU y los monitores de actividad.

Inicie el programa. A continuación, en preferencias. Elija el puerto serie PSIU para Macintosh.

A continuación, seleccione el intervalo de lectura. A continuación, seleccione los monitores por su número de fabricante único. Seleccione el rango de monitores que corresponde a los números asignados a los monitores.

Asegúrese de que todos los monitores estén conectados correctamente buscando la luz verde. Una luz roja indica que se ha perdido la conexión. Un recuadro negro indica que el sistema está apagado o que la conexión USB no se ha realizado correctamente.

Separe las moscas macho y hembra de la misma edad. En una almohadilla de dióxido de carbono, coloque 10 moscas macho y 10 hembras a temperatura ambiente separada. Vidrio vi.

Use al menos tres viales para cada línea experimental y de control, y para cada sexo de moscas, mantenga los viales de lado hasta que las moscas se recuperen del dióxido de carbono para asegurarse de que no se queden atrapadas en la comida. Déjalos durante dos horas a temperatura ambiente para que se recuperen del óxido de carbono. A continuación, coloque los viales dentro de la población.

Monitores alojados en las incubadoras. Pase las moscas después de tres o cuatro días a viales nuevos para evitar que los alimentos se sequen. Al final del experimento, escanee los datos para eliminar las lecturas duplicadas y asegúrese de que las grabaciones estén completas.

Con el escaneo de archivos 110 x, seleccione el intervalo para la recopilación de datos y descarte los datos recopilados dentro de las primeras 24 horas en el período de tiempo seleccionado. El programa enviará el conteo total actual de cada monitor a la computadora y comenzará a contar nuevamente desde cero. A continuación, elija un nombre experimental y copie los archivos de la carpeta de datos de la computadora para guardar los datos.

Comience el análisis de datos copiando cuidadosamente los datos recopilados en los archivos de texto en columnas de hojas de cálculo de Excel. A continuación, calcule la actividad total dentro de un período de tiempo deseado para cada monitor que representa la suma de la actividad recogida a tres alturas diferentes de haces infrarrojos. Por último, determinar la actividad locomotora media y la desviación estándar entre los tres monitores que representan tres réplicas biológicas mediante la prueba T de Student de dos colas.

La actividad locomotora espontánea en Drosophila depende del sexo de la mosca y del ciclo de luz y oscuridad. Como lo demuestra este gráfico de la actividad promedio de las moscas macho y hembra, la flecha marca la transición de la luz a la oscuridad. Cuando se observa una disminución en la actividad, la actividad total de las moscas macho de 20 días de edad aumenta cuando las moscas reciben la mitad de la cantidad de alimento estándar en una dieta baja en calorías en comparación con la disminución de la actividad de las moscas en una dieta alta en calorías.

Después de ver este video, debería tener una buena comprensión de cómo determinar la actividad física espontánea de drosophila. Este método es útil para determinar cómo las diferentes manipulaciones genéticas o ambientales afectan la actividad de las moscas.