Name: Una técnica a la pantalla haya americana para la resistencia al insecto Haya Scale ( Fagisuga Cryptococcus Lind.) (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2014-05-27T14:00:00.000+00:00
Duration: 12 min 47 s
Description: Aprende a evaluar la resistencia de haya americana a Fagisuga Cryptococcus mediante infestación artificial controlada con huevos. Este protocolo cuantitativo permite identificar árboles resistentes para la gestión forestal sostenible.

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Los autores agradecen la financiación del Bosque EE.UU. Monitoreo Evaluación de Protección de la Salud del Servicio Forestal y programas especiales de desarrollo tecnológico que han apoyado el desarrollo, modificación y aplicación del protocolo descrito aquí para identificar los árboles que sean resistentes y susceptibles a la cochinilla de haya. También damos las gracias a la Holden Arboretum, Kirtland, Ohio, por su constante colaboración y apoyo de nuestro programa de detección de resistencia haya americana.

1 Planta Material:. Campo árboles maduros, en maceta plántulas o maceta Injertos <ol><li> Para las pruebas de campo, seleccione hayas maduros sanos estadounidenses que no muestran signos de infestación escala o enfermedad para la prueba de resistencia posible. Visiblemente también tendrán que ser identificados para ser utilizado como un control (Figura 1) árboles susceptibles. </li><li> Para la prueba de plántulas en maceta o injertos, recoger y germinar hayucos como se describe en Koch y Carey, 2004 o descendiente del injerto como se describe en Carey et al, 2013. </li><li> Crezca las plantas de semillero o injertos en macetas mezcla suelo enmendado con 47 g de micronutrientes, 477 g fertilizante de liberación lenta 15N-3.9P-9.9K, 700 g de perlita gruesa y 75 g de sulfato de aluminio por 2.8 cu. bolsa de pies. Si es necesario más adelante en la temporada de cultivo, fertilizar las plantas semanalmente con solubles 17N-1.3P-14.1K en 200 ppm de nitrógeno. </li><li> Durante la temporada de crecimiento, mantener las plantas en una casa de sombra. Permita que las plantas en estado latente fuera en el otoño antes de que se muevana una instalación de almacenamiento de temperatura controlada (~ 4 ° C), de noviembre a abril. </li></ol> 2. Colección de Beech Escala Huevos <ol><li> En un stand infestado de BBD, inspeccione los árboles muy infestados (fácilmente identificados por su &quot;blanqueado&quot; la apariencia, la Figura 1A) con una lupa de mano para confirmar la presencia de huevos, normalmente abundantes desde mediados de julio hasta mediados de agosto. </li><li> Utilice una brocha para cepillar suavemente los grumos de cera blanca de cochinillas adultas, huevos y otros restos, en una bolsa sellable colección un galón de plástico (fig. 1B). Reunir a partir de un mínimo de tres árboles diferentes, al menos, 12 m de distancia. </li><li> Si es necesario, guarde los huevos en la bolsa de recolección sellado por hasta dos semanas a 4 ° C. Pegue un pedazo pequeño (2,5 cm cuadrados) de espuma de polietileno húmedo en el interior de la bolsa para evitar que los huevos se sequen. </li><li> Para separar los huevos de escala (0,15 x 0,25 mm) de los adultos (0,60 mm) y debris, la construcción de un tamiz utilizando una pieza corta de 2 &quot;cañería de PVC y un acoplamiento para soportar una pieza cuadrada de 250 micras de malla de nylon (Figura 2). </li><li> Vaciar la mezcla de los adultos, cera, huevos, y los residuos de la bolsa de recogida en el tamiz y utilizar un pequeño pincel para fomentar suavemente los huevos para pasar a través de la malla en una placa de Petri de vidrio a continuación. Platos de plástico Petri deben evitarse porque tienen más electricidad estática, por lo que es difícil de mover los huevos. Los huevos antes y después de tamizado se muestran en la Figura 3. </li><li> Huevos purificadas se pueden almacenar en la placa de Petri a 4 ° C durante al menos una semana. Para evitar que los huevos se seque, pegue un pedazo húmedo de espuma para la tapa y el sello con Parafilm. </li></ol> 3. Huevo de viabilidad Ensayos <ol><li> Para evaluar la viabilidad del huevo, usar una jeringa de 10 cc a aplicar un delgado anillo de vaselina alrededor de la circunferencia de la parte inferior de una placa de Petri de 60 mm de vidrio (Figura 4A </strong&gt;). </li><li> Transferir unos 100 huevos al centro del ring, coloque la tapa en la caja de Petri y selle con Parafilm. Dejar que la cápsula Petri sellada a permanecer en reposo a temperatura ambiente durante 2 semanas, 3 semanas o si los huevos se almacenaron a 4 ° C antes de comenzar el ensayo. </li><li> Ninfas eclosionadas se atascarse en la vaselina y pueden ser contados fácilmente, y los huevos vacíos se distinguen fácilmente de los huevos sin eclosionar por su color y brillo (Figura 4B). Calcular la viabilidad dividiendo el número de ninfas por la suma de los huevos vacíos más los huevos completos restantes. Buena viabilidad debe estar en el rango de los huevos 75% a 90% eclosionado. </li></ol> 4. Resistencia Escala Proyección de grande maduro Hayas en el campo <ol><li> Para una prueba cuantitativa, contar en 500 huevos utilizando un microscopio de disección y el uso de una pequeña espátula espolvorear suavemente a través del centro de un predampened, de celda abierta de 10 x 15 x 1,3 cm rectángulo de espuma de polietileno. Aamortiguar espuma, mojarlo y luego exprima el agua tanto como sea posible. Para una prueba cualitativa, 500 huevos se pueden contar y se coloca en un pequeño frasco de vidrio y una línea de &quot;relleno&quot; dibujado que se puede utilizar para medir los lotes adicionales de aproximadamente 500 huevos. </li><li> Coloque la almohadilla de espuma en el árbol de prueba con el lado del huevo frente contra la corteza. Sostenga la almohadilla en su lugar con una cuerda, cuerda, bramante o plástico recubierto de alambre del hardware. Plástico o material metálico a base deben utilizarse en lugar de los materiales de fibra naturales que son más fácilmente barridos por la fauna silvestre. </li><li> Línea de la parte superior y los lados de un cm pedazo de vapor permeable casa de abrigo impermeable con acetato adhesivo a base de silicona precortadas 23 x 30 y colocarlo sobre la almohadilla de espuma del ensayo. Presione los bordes de la envoltura de la casa en el árbol para crear un sello impermeable. Coloque la guita de nylon o alambre recubierto de plástico de hardware alrededor del árbol y la casa de abrigo, para mantenerlo en su lugar mientras que el adhesivo fragüe (Figura 5). </li><li> Coloque un mínimo de dosalmohadillas de análisis de cada árbol de prueba, preferiblemente en lados opuestos de la fuste. En cada sitio, coloque almohadillas de prueba en al menos 2 árboles susceptibles (con obvia infestación escala natural), como control. Antes de colocar los bloques de ensayo en los árboles de control, retire los insectos o huevos de escala que tienen lugar de forma natural con un cepillo de cerdas firmes. Nota: Las almohadillas de espuma con los huevos también se pueden colocar en los árboles con el propósito de huevos escala de cría, que puede ser especialmente útil en áreas donde el nivel de infestación es baja. </li></ol> 5. Resistencia escala de cribado de plántulas en maceta o injertos <ol><li> Para las pruebas, seleccionar árboles en macetas con un diámetro mínimo de 1 cm (pinza 5 cm por encima de la línea del suelo) que son lo suficientemente alto como para tener por lo menos 2 almohadillas de análisis separadas puestas en ellos. Pode las ramas pequeñas laterales cuando sea necesario para dar cabida a las almohadillas de análisis. </li><li> Utilice un microscopio de disección para contar 150 huevos y derrama sobre un precorte y humedecido 2,5 x 7,6 x 1,3 cm bolsas d de células abiertasalmohadilla de espuma lene. </li><li> Coloque la almohadilla de espuma de plántulas con el lado del huevo contra la corteza, con alambre recubierto de plástico. Envuelva un pequeño cuadrado de envoltura de la casa alrededor de la plántula justo por encima de la espuma y sellarla con silicona a base de acetato (ver Figura 6 A). </li><li> Incluir conocido familias plántulas susceptibles o injertos como controles. </li></ol> 6. Recogida de datos Nota: Aproximadamente 52 a 57 semanas después de la colocación de las almohadillas de espuma y huevos en los árboles de las pruebas, los datos pueden ser recolectados. Es importante que esto no se realiza hasta después de adultos han empezado a poner huevos, para que su capacidad de reproducción se puede determinar. En algunos árboles resistentes, no es raro ver a un pequeño número de adultos a establecer, pero sin la reproducción se produzca. <ol><li> Retire con cuidado la almohadilla de espuma y contar el número de cochinillas adultas establecidos en la corteza usando una lupa o lente de aumento (10X). </li><li> Cuando se retira la almohadilla de espuma, no es uncommon para algunos adultos y la mayoría de las masas de huevos para ser tirados fuera del árbol con la espuma (ver Figura 7). Usando un microscopio de disección, contar los grupos de huevo y adultos que han permanecido unido a la almohadilla de espuma. </li></ol>

<ol><li>Houston, D. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+technique+to+artificially+infest+beech+bark+with+the+scale%2C+Cryptococcus+fagisuga+%28Lindinger%29%5BTitle%5D)+AND+%22U.S.+Forest+Service%22%5BJournal%5D)">A technique to artificially infest beech bark with the scale, Cryptococcus fagisuga (Lindinger).</a> U.S. Forest Service. , Northeastern Forest Experiment Station. Broomhall, PA. (1982).</li>
<li>Houston, D. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((American+beech+resistance+to+Cryptococcus+fagisuga%5BTitle%5D)+AND+%22Proceeding%2C+IUFRO+beech+bark+disease+working+party+conference%22%5BJournal%5D)">American beech resistance to Cryptococcus fagisuga.</a> Proceeding, IUFRO beech bark disease working party conference. , U.S. Department of Agriculture, Forest Service, Northeastern Forest Experiment Station. Washington, D.C. 38-42 (1983).</li>
<li>Ehrlich, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+beech+bark+disease%3A+a+nectria+disease+of+Fagus%2C+following+Cryptococcus+fagi%5BTitle%5D)+AND+%22%22%5BJournal%5D)">The beech bark disease: a nectria disease of Fagus, following Cryptococcus fagi.</a> 10, 593-692 (1934).</li>
<li>Papaik, M. J., Canham, C. D., Latty, E. F., Woods, K. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+of+an+introduced+pathogen+on+resistance+to+natural+disturbance%3A+beech+bark+disease+and+withdrow%5BTitle%5D)+AND+%22%22%5BJournal%5D)">Effects of an introduced pathogen on resistance to natural disturbance: beech bark disease and withdrow.</a> 35, 1832-1843 (2005).</li>
<li>Miller-Weeks, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Current+status+of+beech+bark+disease+in+New+England+and+New+York%5BTitle%5D)+AND+%22Proceeding%2C+IUFRO+beech+bark+disease+working+party+conference%22%5BJournal%5D)">Current status of beech bark disease in New England and New York.</a> Proceeding, IUFRO beech bark disease working party conference. , U.S. Department of Agriculture, Forest Service, Northeastern Forest Experiment Station. Washington, D.C. 21-23 (1983).</li>
<li>Houston, D. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Beech+bark+disease%3A+The+aftermath+forests+are+structured+for+a+new+outbreak%5BTitle%5D)+AND+%22J.+For%22%5BJournal%5D)">Beech bark disease: The aftermath forests are structured for a new outbreak.</a> J. For. 73, 660-663 (1975).</li>
<li>Twery, M. J., Patterson, W. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Variations+in+beech+bark+disease+and+its+effects+on+species+composition+and+structure+of+northern+hardwood+stands+in+central+New%5BTitle%5D)+AND+%22%22%5BJournal%5D)">Variations in beech bark disease and its effects on species composition and structure of northern hardwood stands in central New.</a> 14, 565-574 (1984).</li>
<li>Jakubus, W. J., McLaughlin, C. R., Jensen, P. G., McNulty, S. A., et al. Alternate year beechnut production and its influence on bear and marten populations. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aJakubus%2C+WJ+%22Beech+Bark+Disease%3A+Proceedings+of+the+Beech+Bark+Disease+Symposium%22">Beech Bark Disease: Proceedings of the Beech Bark Disease Symposium</a>. Evans, C. A., et al. , U.S. Forest Service, Northern Research Station. Newtown Square, PA. 79-87 (2005).</li>
<li>Koch, J. L., Carey, D. W., Mason, M. E., Nelson, C. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Assessment+of+beech+scale+resistance+in+full-+and+half-sib+families%5BTitle%5D)+AND+%22Can.+J.+For.+Res%22%5BJournal%5D)">Assessment of beech scale resistance in full- and half-sib families.</a> Can. J. For. Res. 40, 265-272 (2010).</li>
<li>Koch, J. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Beech+bark+disease%3A+The+oldest+%E2%80%9Cnew%E2%80%9D+threat+to+American+beech+in+the+United+States%5BTitle%5D)+AND+%22Outlooks+Pest+Manag%22%5BJournal%5D)">Beech bark disease: The oldest “new” threat to American beech in the United States.</a> Outlooks Pest Manag. 21, 64-68 (2010).</li>
<li>Koch, J. L., Mason, M. E., Carey, D. W., et al. Screening for resistance to beech bark disease: improvements and results from seedlings and grafted field selections. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aKoch%2C+JL+%22Proceedings+of+the+4th+International+Workshop+on+Genetics+of+Host-Parasite+Interactions+in+Forestry%22">Proceedings of the 4th International Workshop on Genetics of Host-Parasite Interactions in Forestry</a>. Palmieri, K., et al. , U.S. Forest Service, Pacific Southwest Research Station. Albany, CA. (2012).</li>
<li>Leak, W. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fifty+year+impacts+of+the+beech+bark+disease+in+the+Bartlett+Experimental+Forest%2C+New+Hampshire%5BTitle%5D)+AND+%22Northern+J.+Appl.+For%22%5BJournal%5D)">Fifty year impacts of the beech bark disease in the Bartlett Experimental Forest, New Hampshire.</a> Northern J. Appl. For. 23, 141-143 (2006).</li>
<li>Koch, J. L., Carey, D. W., et al. Controlled cross-pollinations with American beech trees that are resistant to beech bark disease. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aKoch%2C+JL+%22Proceedings+of+the+14th+Central+Hardwood+Forest+Conference%22">Proceedings of the 14th Central Hardwood Forest Conference</a>. Yaussy, D. A., et al. , U.S. Forest Service, Northeastern Research Station. 358-364 (2004).</li>
<li>Carey, D. W., Mason, M. E., Bloese, P., Koch, J. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hot+callusing+for+propagation+of+American+beech+by+grafting%5BTitle%5D)+AND+%22HortSci%22%5BJournal%5D)">Hot callusing for propagation of American beech by grafting.</a> HortSci. 48, 620-624 (2013).</li>
<li>Koch, J. L., Carey, W. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+genetics+of+resistance+of+American+beech+to+beech+bark+disease%3A+knowledge+through+2004%5BTitle%5D)+AND+%22Beech+Bark+Disease%3A+Proceedings+of+the+Beech+Bark+Disease+Symposium%22%5BJournal%5D)">The genetics of resistance of American beech to beech bark disease: knowledge through 2004.</a> Beech Bark Disease: Proceedings of the Beech Bark Disease Symposium. Evans, C. A., et al. , U.S. Forest Service, Northern Research Station. Newtown Square, PA. 98-105 (2005).</li>
</ol>

Los autores declaran que no tienen intereses financieros en competencia.

Los pasos críticos necesarios para el éxito de este ensayo incluyen la realización de una prueba de viabilidad sobre los huevos y el uso de los controles susceptibles en cada sitio de prueba, y con materiales de macetas. También es importante la utilización de más de una almohadilla de análisis por árbol o planta de semillero. Hemos encontrado que, tanto en el campo como en las pruebas más controladas en macetas con plantas, una fuente frecuente de error puede ser el fracaso de la almohadilla. Por ejemplo, en el campo, ...

Enfermedad de la corteza de la haya (BBD) ha tenido un impacto negativo en haya americana en América del Norte desde la introducción de la cochinilla de haya invasivo, Cryptococcus fagisuga, en la provincia canadiense de Nueva Escocia a finales del decenio de 1890 3. Este complejo de insectos de la enfermedad se inicia cuando el insecto de la escala de haya inserta su estilete de alimentación en la corteza de la creación de pequeñas fisuras que proporcionan entrada para la infección por una de las especies Neonectria de hongo (ditissima Neonectria o Neonectria faginata). A medida que crecen los micelios de hongos, grandes áreas de tejido puede morir, con el tiempo que rodea completamente el árbol. El daño causado por la enfermedad debilita el árbol, por lo que es propenso a romperse con vientos fuertes 4. Los niveles de mortalidad en la primera ola de la enfermedad se han notificado a ser tan alta como 50% 5. Los árboles supervivientes a menudo son severamente deformados como chancros forman la reducción de valor del árbol como un producto de madera.0; Estos árboles tienen una propensión a la raíz-brote que conduce a la formación de &quot;matorrales de haya&quot; que impiden a otras especies más deseables desde el establecimiento, lo que reduce el valor económico y ecológico de la posición 6. Aunque la enfermedad de la corteza del haya, no es probable que conduzca a la extinción de la haya americana, que altera la composición de pie y la salud que lleva a una disminución de alimento y hábitat para la vida silvestre 7,8. En las masas afectadas por BBD en muchos años, se ha informado de árboles que permanecen libres de cualquier síntoma de la enfermedad. Ensayos de inoculación artificial han demostrado que estos árboles son resistentes al insecto escala 2. Sin infestación de escala, hay pocas oportunidades para la infección Neonectria, minimizando el impacto del hongo. La mortalidad a gran escala en madera de haya americana debido a la infección Neonectria en ausencia de infestación escala antes nunca tieneha informado, por lo que la resistencia a los resultados de insectos escala de haya en la resistencia a la BBD. Las investigaciones recientes sobre la gestión de BBD se ha centrado en la identificación, la propagación, la cría y la conservación de los árboles de haya americana con resistencia al insecto escala de haya. Los estudios genéticos han demostrado que la resistencia al insecto escala es heredable y cuidadosa selección y mejora genética de los árboles resistentes puede resultar en una mejora significativa en una sola generación 9. Este hallazgo ha impulsado los esfuerzos de los administradores estatales y nacionales forestales en los Estados Unidos para establecer huertos semilleros regionales de haya americana resistente para proporcionar una fuente de semilla BBD resistentes genéticamente diversas para las plantaciones de restauración 10,11. La investigación también ha indicado que la manipulación genética silvícola de soporte por la remoción de los árboles susceptibles y retención de árboles resistentes puede resultar en soporte 9,12 mejorar. &lt;/ P&gt; Gestión de BBD a través de actividades de mejoramiento de árboles o por medio de la realización de prescripciones silvícolas requiere la capacidad de seleccionar y distinguir entre árboles de hayas escala resistentes y susceptibles. Los métodos que aquí se presentan han sido adaptados de un método introducido por primera vez por Dave Houston para inocular artificialmente plántulas con huevos escala de haya 1. El método se puede utilizar como una herramienta de detección para identificar los loci de rasgos cuantitativos (QTL) asociados con la resistencia o para distinguir entre las plantas de semillero en macetas resistentes y susceptibles o rametos injertados en los estudios genéticos. Alternativamente, puede ser utilizado para el cribado de árboles maduros en el campo para identificar árboles resistentes para el desarrollo huerto de semillas, o la retención en el campo. Árboles susceptibles pueden ser identificados y eliminados para minimizar el impacto de la enfermedad.

<table><tbody><tr><td>Hoja de malla de nailon, 250 micrones</td><td><a href="http://www.amazonsupply.com/dp/B000FMWH1S/ref=sp_dp_g2c_asin" target="_blank"><img src="/img/new_window.png"> Piezas pequeñas</a></td><td>CMN-0250-D</td><td>Tamaño de la abertura de la malla: 250 micrones cuadrados, porcentaje de área abierta: 34, diámetro del hilo: 180 micrones, ancho: 24&amp;rdquo;, Longitud: 12&amp;rdquo;, Cantidad del paquete: 1</td></tr><tr><td>Tyvek Home Wrap</td><td><a href="http://www.lowes.com/pd_14582-2020-D13499991_0__" target="_blank"><img src="/img/new_window.png"> DuPont</a></td><td>D1349991</td><td>Rollo de 9 pies x 150 pies; puede solicitarse que se corte por la mitad.</td></tr><tr><td>espuma de polietileno, &amp;frac12;&amp;rdquo; grueso&amp;nbsp;</td><td><a href="http://www.colsfoam.com/apcfp/products.htm" target="_blank"><img src="/img/new_window.png"> Columbus Foam Products</a></td><td></td><td>rollo de 2 pies x 50 pies</td></tr><tr><td>MetroMix 510</td><td><a href="http://sungro.com/products_displayProduct.php?product_id=118&amp;amp;brand_id=17" target="_blank"><img src="/img/new_window.png"> Sun Gro Horticulture</a></td><td></td><td>2,8 pies cúbicos de corteza, musgo de turba, vermiculita, ceniza de corteza, carga de nutrientes iniciales (con yeso), nitrógeno de liberación lenta y&amp;nbsp;caliza dolomítica</td></tr><tr><td>Osmocote Plus 15-9-12</td><td><a href="http://everris.us.com/product/15-9-12" target="_blank"><img src="/img/new_window.png"> Everris</a></td><td>E903206</td><td>Liberación estándar de 3-4 meses</td></tr><tr><td>Sight Savers 10X</td><td><a href="http://www.amleo.com/Bausch---Lomb-Illuminating-Codington-Magnifier-10x/p/CM10/" target="_blank"><img src="/img/new_window.png"> Bausch &amp;amp; Lomb</a></td><td>813434</td><td>Aumento de 10X iluminado Coddington</td></tr><tr><td>Nikon Mini Field Estereoscopio</td><td><a href="http://www.opticsplanet.com/nikon-fieldmicroscope.html" target="_blank"><img src="/img/new_window.png"> Nikon</a></td><td>7314</td><td>Aumento de 20X</td></tr><tr><td>Silicona II transparente</td><td><a href="http://www.midlandhardware.com/159538.html" target="_blank"><img src="/img/new_window.png"> GE</a></td><td>159538</td><td>ventana transparente de 2,9 oz &amp;amp; masilla para puertas</td></tr></tbody></table>

una técnica a la pantalla haya americana para la resistencia al insecto haya scale (<em&gt; fagisuga cryptococcus</em&gt; lind.)

A Technique to Screen American Beech for Resistance to the Beech Scale Insect (Cryptococcus fagisuga Lind.)

Enfermedad de la corteza de la haya (BBD) se traduce en altos niveles de mortalidad inicial, dejando detrás de los árboles sobrevivientes que se debilitan en gran medida y deformadas. La enfermedad se inicia por la alimentación de las actividades de la insecto de la escala de haya invasiva, Cryptococcus fagisuga, que crea puntos de entrada para la infección por una de las especies Neonectria de hongo. Sin infestación de escala, hay pocas oportunidades para la infección por hongos. El uso de huevos de escala para infestar artificialmente árboles sanos en rodales muy BBD impactadas demostró que estos árboles fueron resistentes a la porción de insectos escala del complejo de la enfermedad 1. Aquí se presenta un protocolo que hemos desarrollado, basado en la técnica de la infestación artificial por Houston 2, que se puede utilizar para la detección de árboles escala resistentes en el campo y en las plantas de semillero y los injertos en macetas pequeñas. La identificación de los árboles escala resistente es un componente importante de la gestión de BBD través del árbolprogramas de mejora y manipulación silvicultural.

La figura 6 muestra una planta de semillero resistentes (C) y dos plantas de semillero susceptibles (D, E) que exhibe diferentes grados de susceptibilidad. Un ejemplo de lo que un árbol maduro susceptible parece a 57 semanas después de la prueba de infestación artificial fue creado se muestra en la Figura 5B. Cuando la espuma se desprendió del árbol, no es raro que las cochinillas y sus racimos de huevos para permanecer pegado a la espuma como se muestr...

Enfermedad de la corteza de la haya es iniciada por la alimentación de las actividades de la cochinilla de haya que crear puntos de entrada de hongos en la corteza. Los árboles que son resistentes a la cochinilla son también resistentes a las enfermedades. Aquí presentamos el protocolo que hemos desarrollado para detectar árboles individuales de haya para la resistencia a escala de haya.

Una técnica a la pantalla haya americana para la resistencia al insecto Haya Scale (<em&gt; Fagisuga Cryptococcus</em&gt; Lind.)

Beech bark disease (BBD) results in high levels of initial mortality, leaving behind survivor trees that are greatly weakened and deformed.&#160;The ...

El objetivo general de este procedimiento es distinguir entre árboles americanos de haya resistentes y susceptibles a la enfermedad de la corteza de la playa. Esto se logra primero recolectando cochinillas adultas y sus huevos directamente de los árboles americanos de haya. El segundo paso consiste en obtener un lote homogéneo de huevos separándolos de los adultos y otros residuos.A continuación, se cuentan los huevos colocados sobre almohadillas de espuma y fijados en la corteza de los árboles de prueba. Al mismo tiempo, se realizan pruebas para confirmar la viabilidad de los huevos. Aproximadamente un año después, se retiran las almohadillas de prueba y se cuenta el número de adultos y agrupaciones de huevos.En última instancia, esta técnica para infestar artificialmente árboles de haya con el insecto cochinilla de la haya se utiliza para identificar árboles resistentes y susceptibles a la enfermedad del cancro del haya. La ventaja de esta técnica frente a la desarrollada previamente por Dave Houston para la infestación artificial con cochinillas es que nuestro método emplea árboles control y ensayos de viabilidad de huevos, y es lo suficientemente cuantitativo y reproducible para estudios genéticos. Este método puede ayudar en las decisiones de manejo de la enfermedad del cancro del haya al determinar qué árboles son resistentes a la enfermedad y deben conservarse durante la cosecha, o bien podrían ser los mejores candidatos para incluirse en huertos semilleros: árboles de haya americana con una infestación severa de la cochinilla de la haya.Los insectos se identifican fácilmente por su apariencia blanqueada. Utilice una lupa manual para confirmar la presencia de huevos, que suelen ser abundantes desde mediados de julio hasta mediados de agosto. Sujete con cinta adhesiva una bolsa plástica de un galón con cierre hermético a un tronco infestado y use un pincel para cepillar suavemente los coágulos blancos y cerosos de cochinillas adultas, huevos y otros desechos dentro de la bolsa.Recolecte huevos de un mínimo de tres árboles diferentes separados por al menos 12 metros. Humedezca un trozo cuadrado de espuma de polietileno de 2,5 centímetros y colóquelo con cinta adhesiva en el interior de la bolsa para evitar que los huevos se sequen. Luego, cierre herméticamente la bolsa.Sopla dentro de la bolsa para añadir un cojín protector de aire para el transporte de los huevos. Los huevos pueden almacenarse en la bolsa de recolección sellada hasta dos semanas a cuatro grados Celsius. Para separar los huevos con escamas de los adultos y los residuos, construya un tamiz mediante ensamblaje.Un trozo cuadrado de malla de nailon de 250 micrones colocado entre un tramo corto de tubo de PVC de dos pulgadas y un acoplamiento. Coloque un plato de Petri de vidrio debajo del tamiz y luego vierta sobre él la mezcla de adultos, huevos de cera y residuos provenientes de la bolsa de recolección. A continuación, utilice un pincel pequeño para ayudar suavemente a que los huevos pasen a través de la malla hacia el plato de Petri de vidrio colocado debajo.Para evitar que los huevos se sequen, sujete con cinta adhesiva un trozo de espuma húmeda a la tapa y selle. Los huevos purificados pueden almacenarse en la placa de Petri a cuatro grados Celsius durante al menos una semana. Con el fin de obtener cochinillas viables, primero debe poder identificar los insectos adultos que ponen huevos y separarlos de los huevos mediante el proceso de aspiración.Finalmente, debe poder confirmar la viabilidad de estos huevos utilizando un ensayo de viabilidad como huevo. Para evaluar la viabilidad de los huevos, utilice una jeringa de 10 cc para aplicar un anillo delgado de vaselina alrededor de la circunferencia del fondo de una placa de Petri de vidrio de 60 milímetros. Recoga aproximadamente 100 huevos con una espátula y transfiéralos al centro del anillo.Luego coloque la tapa en la placa de Petri y séllela con cinta adhesiva. Deje la placa de Petri sellada sin alteraciones a temperatura ambiente durante dos o tres semanas, si los huevos se habían almacenado a cuatro grados Celsius. Después de dos a tres semanas, utilice el microscopio de disección para contar el número de ninfas eclosionadas, que a menudo se pueden encontrar atrapadas en la vaselina.Luego cuente el número de huevos no eclosionados, que son opacos y de color amarillento, y el número de huevos eclosionados, que son más claros en color y translúcidos. Calcule la viabilidad dividiendo el número de ninfas eclosionadas entre la suma de los huevos vacíos más los huevos no eclosionados restantes. Una buena viabilidad debe estar entre el 75 y el 90% de huevos eclosionados.Prueba en campo para evaluar la resistencia a la cochinilla de la playa. El insecto puede analizarse cuantitativamente contando 500 huevos mediante un microscopio estereoscópico portátil si solo se requiere una prueba cualitativa. Coloque los 500 huevos en un vial pequeño con una marca de llenado que pueda utilizarse para medir lotes adicionales de aproximadamente 500 huevos.A continuación, humedezca un rectángulo de espuma de polietileno de celda abierta y luego exprima toda el agua posible. Utilizando una espátula pequeña de metal de laboratorio, espolvoree suavemente los 500 huevos sobre el centro de la espuma humedecida. Ahora los huevos están listos para ser utilizados en infestaciones artificiales.Seleccione árboles maduros y sanos de palmera americana que no presenten signos de cochinilla, infestación ni enfermedad. Amarre una cuerda de nailon alrededor del árbol de prueba, luego coloque la almohadilla de espuma sobre el árbol con el lado de los huevos enfrentado contra la corteza. Deslice la cuerda sobre la almohadilla para asegurarla.Deslice una segunda almohadilla debajo de la cuerda en el lado opuesto del árbol. Se deben colocar al menos dos almohadillas en cada árbol. Se debe utilizar un material basado en plástico o metal en lugar de cuerda, hilo o estambre, ya que estos últimos son más fácilmente aprovechados por la fauna silvestre. Precortado.Un trozo de 23 por 30 centímetros de una barrera contra el vapor, permeable y resistente al agua, recubierto en la parte superior y los lados con adhesivo de silicona a base de acetato. Luego, coloque la barrera sobre la almohadilla de espuma para pruebas y presione los bordes contra el árbol para crear un sello impermeable. Coloque cordel de nailon o alambre recubierto de plástico alrededor del árbol y la barrera para mantenerla en su lugar mientras el adhesivo se endurece; seleccione árboles visiblemente susceptibles para utilizarlos como controles.Utilice un cepillo de cerdas firmes para eliminar cualquier cochinilla o huevos que ocurran naturalmente del área donde se colocará la almohadilla de prueba. Luego, coloque las almohadillas de prueba en al menos dos árboles susceptibles en cada sitio de prueba. Comience cultivando plántulas o injertos en una mezcla de sustrato para macetas mejorada.La evaluación de plántulas en macetas o de gráficos se realiza en un invernadero sombreado más adelante en la temporada de crecimiento. Fertilice las plantas semanalmente según sea necesario durante la temporada de crecimiento y manténgalas en un invernadero sombreado. Permita que las plantas entren en estado de latencia en el exterior durante el otoño antes de trasladarlas a un almacenamiento a cuatro grados Celsius.De noviembre a abril, tras uno o dos años, cuando el tronco sea lo suficientemente alto como para tener al menos dos almohadillas de prueba separadas y tenga un diámetro mínimo de un centímetro medido con un calibre a cinco centímetros sobre la línea del suelo, estará listo para la prueba. Poda cualquier pequeña rama lateral según sea necesario para dejar espacio para las almohadillas de prueba. Utiliza un microscopio estereoscópico para contar 150 huevos y distribúyelos sobre una almohadilla de espuma de polietileno de celda abierta previamente cortada y humedecida.Sujete el cojín de espuma a la plántula con el lado del huevo contra la corteza utilizando alambre recubierto de plástico. Envuelva un pequeño cuadrado de membrana para casas alrededor de la plántula justo por encima de la espuma y séllelo con silicona a base de acetato. Para los controles, fije cojines de espuma que contengan huevo a familias de plántulas o injertos conocidos por su susceptibilidad.Aproximadamente un año. Después de colocar las almohadillas de espuma en los árboles, retire cuidadosamente la almohadilla de espuma de la plántula o del árbol adulto. Luego use una lupa o una lente de aumento de 10 x para contar el número de cochinillas adultas establecidas en la corteza.Cuando se retira la almohadilla de espuma, no es raro que algunos adultos y la mayoría de los grupos de huevos se desprenda del árbol junto con la espuma. Bajo un microscopio estereoscópico, cuente los grupos de huevos y los adultos que están adheridos a la almohadilla de espuma. Aquí se muestra una plántula resistente.Las líneas negras indican el alcance del cojín de espuma. No se observa infestación de la corteza. Las dos plántulas susceptibles que se ven aquí exhiben diferentes grados de susceptibilidad.Un árbol susceptible maduro, 57 semanas después de la infestación artificial, se muestra aquí. Los árboles fueron infestados artificialmente con huevos de cochinilla de la haya en el Bosque Nacional Allegheny, en Pensilvania, y en el Parque Estatal Luton, en Michigan. Este gráfico compara árboles resistentes con árboles control susceptibles.El número de árboles probados en cada grupo se indica entre paréntesis. Los conteos de adultos por cada 100 huevos suministrados se promediaron en todos los árboles dentro del grupo. Aunque existe una gran variación en el número de adultos establecidos en los árboles susceptibles, se detectan diferencias claras entre los árboles susceptibles y los resistentes.Al intentar esta técnica, es importante asegurarse de que la envoltura protectora esté bien sellada alrededor del árbol. Esto evitará la acumulación excesiva de humedad en la almohadilla de espuma, lo que podría arruinar su ensayo. Después de ver este video, usted debería ser capaz de recolectar y purificar huevos de cochinilla y utilizarlos para realizar pruebas destinadas a determinar si un árbol de playa es resistente o susceptible a la cochinilla.El cochinilla forma parte de un complejo causal con un hongo que realmente provoca la enfermedad del escorbuto del abedul.

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