Name: La comprensión temprana Organogenesis Usando una simplificado In Situ Protocolo de hibridación en Xenopus (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2015-01-12T12:00:00.000+00:00
Duration: 14 min 50 s
Description: Aprende hibridación in situ en Xenopus laevis para localizar expresión génica en embriones intactos. Este protocolo simplificado permite visualizar patrones de ARN con menos reactivos y mayor rapidez.

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Los autores desean agradecer al CIHR por el apoyo de Steve Deimling y al Departamento de Pediatría de la Universidad de Western Ontario por el apoyo de Steve Deimling, Rami Halabi y Stephanie Grover. Este trabajo fue apoyado por el R2654A11 de subvenciones de NSERC y un suplemento del NSERC Discovery Accelerator

<ol><li>Ninomiya, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cadherin-dependent+differential+cell+adhesion+in+Xenopus+causes+cell+sorting+in+vitro+but+not+in+the+embryo%5BTitle%5D)+AND+%22J+Cell+Sci%22%5BJournal%5D)">Cadherin-dependent differential cell adhesion in Xenopus causes cell sorting in vitro but not in the embryo.</a> J Cell Sci. 125, 1877-1883 (2012).</li>
<li>Movassagh, M., Philpott, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cardiac+differentiation+in+Xenopus+requires+the+cyclin-dependent+kinase+inhibitor%2C+p27Xic1%5BTitle%5D)+AND+%22Cardiovasc+Res%22%5BJournal%5D)">Cardiac differentiation in Xenopus requires the cyclin-dependent kinase inhibitor, p27Xic1.</a> Cardiovasc Res. 79, 436-447 (2008).</li>
<li>Zhao, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+expression+of+alphaA-+and+betaB1-crystallin+during+normal+development+and+regeneration%2C+and+proteomic+analysis+for+the+regenerating+lens+in+Xenopus+laevis%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Vis%22%5BJournal%5D)">The expression of alphaA- and betaB1-crystallin during normal development and regeneration, and proteomic analysis for the regenerating lens in Xenopus laevis.</a> Mol Vis. 17, 768-778 (2011).</li>
<li>Harland, R. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+situ+hybridization%3A+an+improved+whole-mount+method+for+Xenopus+embryos%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">In situ hybridization: an improved whole-mount method for Xenopus embryos.</a> Methods Cell Biol. 36, 685-695 (1991).</li>
<li>Kirilenko, P., Weierud, F. K., Zorn, A. M., Woodland, H. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+efficiency+of+Xenopus+primordial+germ+cell+migration+depends+on+the+germplasm+mRNA+encoding+the+PDZ+domain+protein+Grip2%5BTitle%5D)+AND+%22Differentiation%22%5BJournal%5D)">The efficiency of Xenopus primordial germ cell migration depends on the germplasm mRNA encoding the PDZ domain protein Grip2.</a> Differentiation. 76, 392-403 (2008).</li>
<li>Deimling, S. J., Drysdale, T. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fgf+is+required+to+regulate+anterior-posterior+patterning+in+the+Xenopus+lateral+plate+mesoderm%5BTitle%5D)+AND+%22Mech+Dev%22%5BJournal%5D)">Fgf is required to regulate anterior-posterior patterning in the Xenopus lateral plate mesoderm.</a> Mech Dev. , (2011).</li>
<li>Fletcher, R. B., Harland, R. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+role+of+FGF+signaling+in+the+establishment+and+maintenance+of+mesodermal+gene+expression+in+Xenopus%5BTitle%5D)+AND+%22Dev+Dyn%22%5BJournal%5D)">The role of FGF signaling in the establishment and maintenance of mesodermal gene expression in Xenopus.</a> Dev Dyn. 237, 1243-1254 (2008).</li>
<li>Sive, H. L., Grainger, R. M., Harland, R. M. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aSive%2C+HL+%22Early+development+of+Xenopus+laevis+%3A+a+laboratory+manual%22">Early development of Xenopus laevis : a laboratory manual</a>. , Cold Spring Harbor Laboratory Press. (2000).</li>
<li>Park, E. C., Hayata, T., Cho, K. W., Han, J. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Xenopus+cDNA+microarray+identification+of+genes+with+endodermal+organ+expression%5BTitle%5D)+AND+%22Dev+Dyn%22%5BJournal%5D)">Xenopus cDNA microarray identification of genes with endodermal organ expression.</a> Dev Dyn. 236, 1633-1649 (2007).</li>
<li>Horb, M. E., Slack, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Endoderm+specification+and+differentiation+in+Xenopus+embryos%5BTitle%5D)+AND+%22Dev+Biol%22%5BJournal%5D)">Endoderm specification and differentiation in Xenopus embryos.</a> Dev Biol. 236, 330-343 (2001).</li>
<li>Nieuwkoop, P. D., Faber, J. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aNieuwkoop%2C+PD+%22Normal+table+of+Xenopus+laevis+%28Daudin%29+%3A+a+systematical+and+chronological+survey+of+the+development+from+the+fertilized+egg+till+the+end+of+metamorphosis%22">Normal table of Xenopus laevis (Daudin) : a systematical and chronological survey of the development from the fertilized egg till the end of metamorphosis</a>. , Garland Pub. (1994).</li>
<li>Gebhardt, D. O., Nieuwkoop, P. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+Influence+of+Lithium+on+the+Competence+of+the+Ectoderm+in+Ambystoma+Mexicanum%5BTitle%5D)+AND+%22J+Embryol+Exp+Morphol%22%5BJournal%5D)">The Influence of Lithium on the Competence of the Ectoderm in Ambystoma Mexicanum.</a> J Embryol Exp Morphol. 12, 317-331 (1964).</li>
<li>Nieuwkoop, P. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pattern+formation+in+artificially+activated+ectoderm+%28Rana+pipiens+and+Ambystoma+punctatum%29%5BTitle%5D)+AND+%22Dev+Biol%22%5BJournal%5D)">Pattern formation in artificially activated ectoderm (Rana pipiens and Ambystoma punctatum).</a> Dev Biol. 6, 255-279 (1963).</li>
<li>Sato, S. M., Sargent, T. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Molecular+approach+to+dorsoanterior+development+in+Xenopus+laevis%5BTitle%5D)+AND+%22Dev+Biol%22%5BJournal%5D)">Molecular approach to dorsoanterior development in Xenopus laevis.</a> Dev Biol. 137, 135-141 (1990).</li>
<li>Smith, S. J., Kotecha, S., Towers, N., Latinkic, B. V., Mohun, T. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((XPOX2-peroxidase+expression+and+the+XLURP-1+promoter+reveal+the+site+of+embryonic+myeloid+cell+development+in+Xenopus%5BTitle%5D)+AND+%22Mech+Dev%22%5BJournal%5D)">XPOX2-peroxidase expression and the XLURP-1 promoter reveal the site of embryonic myeloid cell development in Xenopus.</a> Mech Dev. 117, 173-186 (2002).</li>
<li>Drysdale, T. A., Tonissen, K. F., Patterson, K. D., Crawford, M. J., Krieg, P. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cardiac+troponin+I+is+a+heart-specific+marker+in+the+Xenopus+embryo%3A+expression+during+abnormal+heart+morphogenesis%5BTitle%5D)+AND+%22Dev+Biol%22%5BJournal%5D)">Cardiac troponin I is a heart-specific marker in the Xenopus embryo: expression during abnormal heart morphogenesis.</a> Dev Biol. 165, 432-441 (1994).</li>
<li>Carroll, T., Wallingford, J., Seufert, D., Vize, P. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Molecular+regulation+of+pronephric+development%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Top+Dev+Biol%22%5BJournal%5D)">Molecular regulation of pronephric development.</a> Curr Top Dev Biol. 44, 67-100 (1999).</li>
<li>Tonissen, K. F., Drysdale, T. A., Lints, T. J., Harvey, R. P., Krieg, P. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((XNkx-2.5%2C+a+Xenopus+gene+related+to+Nkx-2.5+and+tinman%3A+evidence+for+a+conserved+role+in+cardiac+development%5BTitle%5D)+AND+%22Dev+Biol%22%5BJournal%5D)">XNkx-2.5, a Xenopus gene related to Nkx-2.5 and tinman: evidence for a conserved role in cardiac development.</a> Dev Biol. 162, 325-328 (1994).</li>
<li>Davidson, L. A., Ezin, A. M., Keller, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Embryonic+wound+healing+by+apical+contraction+and+ingression+in+Xenopus+laevis%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Motil+Cytoskeleton%22%5BJournal%5D)">Embryonic wound healing by apical contraction and ingression in Xenopus laevis.</a> Cell Motil Cytoskeleton. 53, 163-176 (2002).</li>
<li>Hurtado, R., Mikawa, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Enhanced+sensitivity+and+stability+in+two-color+in+situ+hybridization+by+means+of+a+novel+chromagenic+substrate+combination%5BTitle%5D)+AND+%22Dev+Dyn%22%5BJournal%5D)">Enhanced sensitivity and stability in two-color in situ hybridization by means of a novel chromagenic substrate combination.</a> Dev Dyn. 235, 2811-2816 (2006).</li>
</ol>

Los autores no tienen intereses financieros contrapuestos que divulgar.

La capacidad de utilizar la hibridación in situ para visualizar el patrón de expresión de genes específicos sigue siendo el método más comúnmente utilizado para identificar órganos específicos o tipos de células en el embrión de Xenopus. Esto es debido a varias ventajas ofrecidas por esta técnica. La expresión de un gen puede identificar estructuras específicas así antes de cualquier signo histológico de diferenciación como es el caso para la expresión nkx2.5 en los progenitores del corazón an...

El patrón de expresión de un gen específico es una información importante para determinar el papel potencial de ese gen en el desarrollo de un órgano o tipo de célula específico. En pocas palabras, si no se expresa en el momento y lugar adecuados, es poco probable que juegue un papel clave. En Xenopus, como en la mayoría de los embriones tempranos, el ensayo más comúnmente utilizado para detectar la expresión de un gen es la hibridación in situ de montaje completo utilizando sondas de ARN antisentido marcadas. El uso de la tinción de anticuerpos para evaluar la expresión de un gen en Xenopus se está volviendo más común a medida que los investigadores descubren anticuerpos, generalmente generados contra proteínas de mamíferos, que reaccionan de manera cruzada al homólogo de Xenopus o generan sus propios 1-3. Sin embargo, la gran mayoría de los estudios sobre la organogénesis de Xenopus todavía utilizan sondas de ARN antisentido. Cuando se utilizan anticuerpos, cada anticuerpo individual a menudo requiere una optimización para la concentración de anticuerpos primarios o los protocolos de fijación. Por el contrario, el protocolo para hibridaciones in situ es esencialmente invariante para diferentes sondas. El concepto básico es relativamente simple y se ha establecido un excelente protocolo estándar 4. Nuestro protocolo es una versión simplificada del protocolo original 4 que sigue proporcionando una excelente detección de los patrones de expresión génica en el embrión temprano. Los embriones se fijan y luego se preparan para la hibridación cambiando las soluciones y las temperaturas de modo que permita la unión de alta rigurosidad de la sonda de ARN antisentido marcada a su ARNm objetivo. La sonda no unida se lava y los embriones se preparan para la unión de un anticuerpo contra la etiqueta de las sondas de ARN. A continuación, el exceso de anticuerpos se elimina y se utiliza una reacción de color enzimática para localizar el lugar al que se une la sonda de ARN en el embrión. En la actualidad hay una serie de líneas transgénicas de Xenopus que impulsan la expresión de proteínas fluorescentes en tejidos específicos y están disponibles en los centros de almacenamiento de Xenopus, como el National Xenopus Resource en Woods Hole. Si bien es muy útil para muchos experimentos que requieren examinar la organogénesis en embriones vivos, esta opción requiere un alojamiento separado para las líneas transgénicas. 
La hibridación in situ puede delinear claramente dónde se formarán órganos específicos o tipos de células en el embrión temprano (Figura 1). La técnica es notablemente sensible dado que se puede detectar la expresión génica en un pequeño número de células en un solo embrión 5. Sin embargo, la hibridación in situ utilizando la intensidad de la tinción colorimétrica no se considera cuantificable porque la reacción de color no es lineal. A pesar de la dificultad para cuantificar la intensidad de la tinción, los cambios en la expresión suelen ser bastante notables; particularmente cuando la hibridación in situ muestra aumentos o disminuciones cuantificables en el tamaño de los dominios de expresión 6,7. 
Las claras ventajas de la hibridación in situ de montaje completo la convierten en un ensayo crítico en el estudio del desarrollo temprano. Sin embargo, requiere mucho tiempo y muchos pasos a lo largo de varios días. Este protocolo es una versión simplificada del protocolo estándar que elimina varios pasos sin reducir la calidad del resultado in situ. La simplificación también elimina las fuentes de variabilidad, lo que facilita la resolución de problemas si una hibridación in situ no es óptima. En concreto, hemos eliminado el uso de tratamientos con proteinasa K y ARNasa del embrión, dos pasos que pueden depender de la calidad del reactivo y que también pueden reducir la intensidad de la señal si se exageran. El protocolo también proporciona cierto grado de ahorro de costos debido a la eliminación del uso de varios reactivos. Por último, este protocolo también proporciona algunas pautas sencillas para mejorar la captura de imágenes de los resultados de la hibridación in situ. Aunque este protocolo está optimizado para el trabajo en embriones de Xenopus, es probable que al menos algunas de las simplificaciones sean aplicables al trabajo de hibridación in situ en otros sistemas embrionarios.

<table><tbody><tr><td>Agitadores de tubos Labguake</td><td>VWR</td><td>17-08-2011</td><td></td></tr><tr><td>Viales VWR</td><td>VWR</td><td>10-07-2012</td><td></td></tr><tr><td>L-cisteína</td><td>BioShop</td><td>CYS342.500</td><td></td></tr><tr><td>Juego de trifosfato de ribonucleósidos, 100 mM</td><td>Roche</td><td>11277057001</td><td></td></tr><tr><td>Digoxigenina-11-UTP</td><td>Roche</td><td>11209256910</td><td></td></tr><tr><td>Inhibidor de rnasa (Rnase OUT)</td><td>Invitrogen&nbsp;</td><td>10777-019</td><td></td></tr><tr><td>T7 ARN polimerasa</td><td>fermentas</td><td>EPO111</td><td></td></tr><tr><td>T3 ARN polimerasa</td><td>fermentas</td><td>EPO101</td><td></td></tr><tr><td>SP6 ARN polimerasa</td><td>fermentas</td><td>EPO131</td><td></td></tr><tr><td>Dnase 1</td><td>Invitrogen&nbsp;</td><td>18047-019</td><td></td></tr><tr><td>Suero de oveja</td><td>&nbsp; Wisent</td><td>31150</td><td></td></tr><tr><td>Reactivo bloqueador</td><td>Roche</td><td>11096176001</td><td></td></tr><tr><td>BM púrpura Ap Sustrato</td><td>Roche</td><td>11442094001</td><td></td></tr><tr><td>Anti-Digoxigenina-Ap Fragmentos de Feb</td><td>Roche</td><td>11093274910</td><td></td></tr><tr><td>Metanol</td><td>VWR</td><td>CAMX0485-7</td><td></td></tr><tr><td>NaCl</td><td></td><td>BioShop SOD002.10</td><td></td></tr><tr><td>SDS</td><td>EM&nbsp;</td><td>7910</td><td></td></tr><tr><td>EDTA</td><td>BioShop</td><td>EDT001.500</td><td></td></tr><tr><td>Tris</td><td>BioShop</td><td>TRS003.5</td><td></td></tr><tr><td>Tween-20</td><td>EM&nbsp;</td><td>9480</td><td></td></tr><tr><td>MgSO4</td><td>Sigma</td><td>M-2643</td><td></td></tr><tr><td>Mopas</td><td>BioShop</td><td>MOP001.250</td><td></td></tr><tr><td>EGTA</td><td>Sigma</td><td>E-3889-25G</td><td></td></tr><tr><td>Paraformaldehído</td><td></td><td>BioShop PAR070.500&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>Formamida</td><td>&nbsp; VWR&nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp;</td><td>CAFX0420-4&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>ARN</td><td>Roche</td><td>10109223001</td><td></td></tr><tr><td>Ácido maleico</td> <td>&nbsp; VWR&nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp;</td><td>CAMX0100-3</td><td></td></tr><tr><td>Citrato de sodio tri-Shop</td><td>BioShop</td><td>CIT001</td><td></td></tr><tr><td>Peróxido de hidrógeno (solución al 30%)</td><td>EM&nbsp;</td><td>HX0635-2</td><td></td></tr><tr><td>BSA</td><td>BioShop</td><td>ALB001.100</td><td></td></tr><tr><td>PVP-40</td><td>ICN</td><td>195451</td><td></td></tr><tr><td>Ficoll 400</td><td>GE Healthcare</td><td>17-0300-10</td><td></td></tr><tr><td>Alcohol Bencílico</td><td>Sigma</td><td>B-1042</td><td></td></tr><tr><td>Benzoato de Bencilo</td><td>Sigma</td><td>B-6630</td><td></td></tr><tr><td>Agarosa ultrapura&nbsp;</td><td>Invitrogen&nbsp;</td><td>16500-500</td><td></td></tr></tbody></table>

la comprensión temprana organogenesis usando una simplificado<em&gt; in situ</em&gt; protocolo de hibridación en<em&gt; xenopus</em

Understanding Early Organogenesis Using a Simplified In Situ Hybridization Protocol in Xenopus

La organogénesis es el estudio de cómo se especifican los órganos y luego adquieren su forma y funciones específicas durante el desarrollo. El embrión de Xenopuslaevis es muy útil para el estudio de la organogénesis porque su gran tamaño los hace muy adecuados para identificar órganos en las primeras etapas de la organogénesis. En este momento, el método principal utilizado para identificar un órgano o primordio específico es la hibridación in situ de montaje completo con sondas de ARN antisentido marcadas específicas de un gen que se expresa en el órgano de interés. Además, es relativamente fácil manipular genes o vías de señalización en Xenopus y la hibridación in situ permite analizar los cambios en la presencia o morfología de un órgano diana. La hibridación in situ de montaje completo es un protocolo de varios días con muchos pasos involucrados. Aquí proporcionamos un protocolo simplificado con un número reducido de pasos y reactivos utilizados que funciona bien para los ensayos de rutina. Los robots de hibridación in situ han facilitado enormemente el proceso y detallamos cómo y cuándo utilizamos esa tecnología en el proceso. Una vez que se completa una hibridación in situ, capturar la mejor imagen del resultado puede ser frustrante. Proporcionamos asesoramiento sobre cómo optimizar la obtención de imágenes de los resultados de hibridación in situ. Aunque el protocolo describe la evaluación de la organogénesis en Xenopus laevis, es casi seguro que el mismo protocolo básico puede adaptarse a Xenopus tropicalis y otros sistemas modelo.

El uso de sondas específicas de tejido puede proporcionar información relevante en cuanto a la situación del desarrollo de órganos específicos. En los siguientes ejemplos, la etapa del embrión se basa en la tabla de etapas Nieuwkoop y Faber 11. Si uno utiliza genes forman sondas expresadas después de la diferenciación, la troponina I cardiaca en etapa de 28 a 30, por ejemplo (Figura 1C), la presencia o el tamaño de un órgano diferenciado se pueden evaluar en cualquier diferenciación ...

El embrión de Xenopus laevis sigue siendo excepcionalmente útil en el estudio del desarrollo temprano debido a su gran tamaño y facilidad de manipulación. Se proporciona un protocolo simplificado para el protocolo de hibridación in situ de montaje completo que se puede utilizar en la identificación de órganos específicos en este sistema modelo.

La comprensión temprana Organogenesis Usando una simplificado<em&gt; In Situ</em&gt; Protocolo de hibridación en<em&gt; Xenopus</em

Organogenesis is the study of how organs are specified and then acquire their specific shape and functions during development.  The Xenopuslaevis embryo ...

El objetivo general del siguiente experimento consiste en mostrar dónde se expresa un gen determinado dentro de un embrión intacto. Esto se logra fijando el ARN para que permanezca en su lugar dentro del embrión como un segundo paso. Una sonda de ARN antisentido específica para el gen de interés se hibrida con el ARN diana dentro del embrión.Esta sonda contiene un epítopo, generalmente digoxigenina, que luego puede ser detectado. A continuación, un anticuerpo acoplado a fosfatasa alcalina se hibrida con el epítopo en la sonda de ARN, seguido del uso de un tinte colorimétrico. Con el fin de visualizar la localización del ARN dentro del embrión, se obtienen resultados que muestran con precisión dónde se expresa el gen de interés, basándose en la reacción de color y en el conocimiento de la anatomía del embrión.La principal ventaja de nuestro protocolo del instituto frente a los protocolos existentes es que es más rápido y utiliza menos reactivos sin pérdida aparente de calidad. Este método puede responder preguntas clave en embriología, como la forma en que se especifican y organizan los tejidos. Aunque este método puede proporcionar información sobre el desarrollo de opus, también p

understanding-early-organogenesis-using-simplified-situ-hybridization

Research

Investigación

JoVE Journal

Developmental Biology

Biología del Desarrollo

Este video muestra a 2 colores montar toda la hibridación in situ, un método por el cual el patrón de expresión espacial y temporal de dos genes diferentes se pueden visualizar en embriones de pollo joven. Este método fue introducido originalmente por David Wilkinson, Henrique Domingos, Ingham Phil y David Ish-Horowicz.

Monte doble entero hibridación in situ de embriones de pollo temprano

Xenopus epitelios embrionarios son un sistema modelo ideal para estudiar los comportamientos celulares, tales como el desarrollo de la polaridad y cambiar de forma durante la morfogénesis epitelial. Histología tradicional de muestras fijas cada vez se complementa con células vivas de imagen confocal. Aquí se demuestra métodos para aislar los tejidos de rana y visualizar en directo las células epiteliales y su citoesqueleto utilizando células vivas, la microscopía confocal.

Células vivas, imágenes y análisis cuantitativo de las células epiteliales embrionarias en Xenopus laevis</em

Ectodermo embrionario de Xenopus se ha convertido en un atractivo modelo para el estudio de la polaridad celular. Un ensayo se describe, en el que la distribución subcelular de las proteínas fluorescentes se evalúa en las células de ectodermo. Este protocolo ayudará a contestar preguntas relacionadas con el control espacial de la señalización.

Translocación polarizado de proteínas fluorescentes en Xenopus Ectodermo en respuesta a la señalización de Wnt

El pez cebra, un pequeño pez tropical, se ha convertido en un modelo popular para el estudio de la función de genes durante el desarrollo de vertebrados y la enfermedad. La expresión temporal y espacial de los genes diana se puede determinar...

Alta resolución todo el montaje de<em&gt; In Situ</em&gt; La hibridación en embriones de pez cebra para estudiar la expresión génica y la función

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