Nanomanipulation of Single RNA Molecules by Optical Tweezers

William Stephenson; Gorby Wan; Scott A. Tenenbaum; Pan T. X. Li

doi:10.3791/51542

Nanomanipulación de Soltero moléculas de ARN por Pinzas Ópticas

JoVE Journal
Bioengineering

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Nanomanipulation of Single RNA Molecules by Optical Tweezers

Nanomanipulación de Soltero moléculas de ARN por Pinzas Ópticas

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06:59 min

August 20, 2014

DOI: 10.3791/51542-v

William Stephenson¹, Gorby Wan², Scott A. Tenenbaum^3,4, Pan T. X. Li^4,5

¹Nanoscale Engineering Graduate Program, College of Nanoscale Science and Engineering,University at Albany, State University of New York, ²Nanoscale Science Undergraduate Program, College of Nanoscale Science and Engineering,University at Albany, State University of New York, ³Nanobioscience Constellation, College of Nanoscale Science and Engineering,University at Albany, State University of New York, ⁴The RNA Institute,University at Albany, State University of New York, ⁵Department of Biological Sciences,University at Albany, State University of New York

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Las pinzas ópticas se han utilizado para estudiar el plegamiento del ARN estirando moléculas individuales desde sus extremos 5' y 3'. Aquí se describen los procedimientos comunes para sintetizar moléculas de ARN para pinzas, la calibración del instrumento y los métodos para manipular moléculas individuales.

El objetivo general del siguiente experimento es demostrar un experimento de despliegue mecánico de una sola molécula en una estructura de ARN. En el primer paso, se construye una cámara de flujo y se monta en el instrumento. En el segundo paso, las perlas de tamaño micrométrico se mezclan con la muestra de ARN de interés, y luego los dos tamaños diferentes de perlas se cargan en la cámara de flujo.

Finalmente, la cámara de flujo y la trampa óptica se pueden usar para dirigir las perlas en contacto entre sí para evaluar una variedad de interacciones de moléculas individuales. En última instancia, esta técnica de nanomanipulación se puede utilizar para estudiar el plegamiento del ARN a nivel estructural secundario y terciario. Este método puede ayudar a responder preguntas clave en el campo del plegamiento del ARN, como ¿cómo se pliega y despliega un ARN?

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