Desarrollo de amelogenina-quitosano hidrogel para In Vitro Esmalte Recrecimiento con una interfaz Dense

El objetivo general de este procedimiento es desarrollar un protocolo para la fabricación de un hidrogel de AMLO y quitosano para la reconstrucción superficial del esmalte. Esto se logra preparando primero rodajas de dientes grabados. En el segundo paso, se prepara hidrogel fresco de AMLO y kitan.

A continuación, se aplica el hidrogel AMLO y kitan sobre la superficie del corte del diente. Finalmente, el esmalte dental se vuelve a crecer con el hidrogel AMLO chizen en saliva artificial. En última instancia, el tratamiento ultrasónico y una nano dentadura pueden utilizarse para evaluar la resistencia mecánica de la capa recién formada y su unión al esmalte natural.

Las implicaciones de esta técnica se extienden a nuestro desarrollo de una tecnología que, cuando se aplica sobre el esmalte dental afectado, tanto en adultos como en niños, detiene la lesión de caries temprana, reconstruye la pérdida de esmalte debido a la caries, preserva la estructura dental y previene la progresión de la caries dental. El Dr. Chittar, becario postdoctoral de mi laboratorio, demostrará el procedimiento. Comience seleccionando un tercer molar humano sin ninguna caries restaurada.

Utilice una sierra de diamante de baja velocidad refrigerada por agua para cortar la corona longitudinalmente en rodajas de dos milímetros de grosor y, a continuación, retire la parte de la raíz del molar por ultrasonidos. Limpie las rodajas durante dos minutos y luego enjuáguelas con el agua ionizada tres veces para simular lesiones erosivas. Grabe las dos rodajas con ácido fosfórico al 30% durante 30 segundos.

Luego enjuáguelos inmediatamente con el agua ionizada. Luego por ultrasonidos. Limpie las rodajas grabadas durante dos minutos nuevamente y enjuáguelas con agua ionizada.

Tres veces más. Para preparar la solución madre de Kazán. Primero disuelva el 1% de peso por volumen, Kazan en una solución de ácido acético del 1% de volumen por volumen, seguido de la agitación a 80 grados centígrados durante la noche.

Después de enfriar la solución a temperatura ambiente, cuele el esan a través de un filtro de 0,45 micrómetros y luego agregue un hidróxido de sodio molar para ajustar el pH a 5,0. Para preparar la solución madre de calcio y fosfato, pese el cloruro de calcio y mezcle una solución 0,1 molar. A continuación, agite la solución hasta que se aclare y ajuste el valor de pH a 11 con un molar de hidróxido de sodio.

A continuación, pesa el fosfato de sodio diba. Mezcle una solución 0,1 molar y un vórtice hasta que la solución esté clara. Para preparar el hidrogel AMLO Genin kaizan, agregue 960 microlitros de la solución 1%esan recién preparada a un tubo que contenga 200 microgramos de genina porcina recombinante AMLO.

A continuación, agite la solución hasta que esté clara. Ahora, agregue 25 microlitros de solución de cloruro de calcio 0.1 molar, seguidos de 15 microlitros de solución de fosfato de sodio diba 0.1 molar a la solución de ozán que contiene AMLO. Agita la solución durante cinco minutos.

Luego, agregue con cuidado un hidróxido de sodio molar para ajustar el pH de la solución de AMLO y ozán a 6.5 AMLO y el hidrogel de ozán se formará cuando el valor de pH alcance 6.5 para iniciar el recrecimiento del esmalte en el AMLO andaz, un hidrogel. Primero, ajuste el pH de la solución de saliva artificial a 7.0 con un molar de hidróxido de sodio y almacene la solución a cuatro grados Celsius. A continuación, utiliza una jeringa para aplicar unos 20 microlitros de hidrogel AMLO y chizen en el borde de la rodaja de diente, y colócala en un desecado a temperatura ambiente.

Después de dos horas, agregue 300 ppm de fluoruro de sodio a la solución de saliva y luego transfiera el corte de diente a un vaso de precipitados que contenga 30 mililitros de la solución. Cubra el vaso de precipitados con papel de aluminio y luego colóquelo en un horno a 37 grados centígrados. Finalmente, retire el corte de diente después de tres a siete días y colóquelo en un desecado a temperatura ambiente hasta que se seque después de la reparación con hidrogel AMLO y chizen durante siete días, se forma una capa similar al esmalte con un grosor de 15 micrómetros en la superficie del esmalte grabado.

La capa recién desarrollada está formada por matrices muy ordenadas de cristales con un diámetro de unos 50 nanómetros, que crecen preferentemente a lo largo del eje marino perpendicular a la superficie. Tenga en cuenta que estos cristales en forma de aguja están organizados en haces similares a las unidades fundamentales del esmalte natural. La imagen de difracción de electrones del área seleccionada de la capa reparada exhibe un patrón en forma de arco que revela una alineación jerárquica de los cristales recién desarrollados.

A lo largo del análisis de difracción de rayos X en 2 direcciones 0 0 2 confirma que la capa recién desarrollada está compuesta por apetito, que se alinean a lo largo del eje cristalográfico C de acuerdo con la microscopía electrónica de barrido y las observaciones de difracción de electrones de área seleccionada en esta imagen, se muestra la microestructura de la interfaz entre la capa recién desarrollada y el esmalte natural. Tenga en cuenta que los cristales recién desarrollados no crecieron en la misma dirección que la cristalita de esmalte original, y que el crecimiento del apetito mediado por proteínas da como resultado una orientación perpendicular de los cristales recién crecidos en relación con los cristales de esmalte natural. No hay un espacio aparente en la interfaz entre la capa recién desarrollada y el sustrato de esmalte.

A nanoescala, el esmalte y los cristales regenerados se fusionaron para formar una interfaz sin fisuras. Después de 10 minutos de tratamiento ultrasónico, la capa recién desarrollada formada en el hidrogel de chito Genin AMLO todavía está firmemente unida a la superficie del esmalte y la estructura organizada se conserva para la muestra tratada con hidrogel tizen sin am. Y, sin embargo, se observa un gran espacio entre el esmalte y la capa reparada para distinguir claramente entre la capa recién desarrollada y el esmalte natural.

En este experimento, la genina de AMLO en la capa recién desarrollada fue marcada inmunofluorescentemente, la presencia de genina de AMLO fue confirmada por la fluorescencia verde dentro de la capa recién crecida. Como se muestra en el gráfico después del grabado al ácido, la dureza y el módulo de la superficie del esmalte disminuyen casi un 98 y un 88% respectivamente. El grupo control tratado con hidrogel de ozono sin genina AMLO solo muestra una mejora limitada tanto en la dureza como en el módulo.

En contraste, después de la mineralización en el hidrogel AMLO y ozono, se observa un aumento de casi cuatro veces en el módulo y nueve veces en la dureza después de su desarrollo. En VI y evaluación posterior en modelos, este protocolo puede ampliarse para diseñar una tecnología para el tratamiento de defectos como la caries temprana, la distancia y la erosionación. Ena.