Desarrollo de amelogenina-quitosano hidrogel para

El objetivo general de este procedimiento es desarrollar un protocolo para fabricar un hidrogel de AMLO y quitosano destinado a la reconstrucción superficial del esmalte. Esto se logra primero preparando cortes de diente grabados. En una segunda etapa, se prepara un hidrogel fresco de AMLO y quitosano.

A continuación, se aplica el hidrogel AMLO y kitan sobre la superficie del corte dental. Finalmente, se regenera el esmalte dental con el hidrogel AMLO chizen en saliva artificial. En última instancia, se puede utilizar un tratamiento ultrasónico y una nanoindentación para evaluar la resistencia mecánica de la nueva capa formada y su unión al esmalte natural.

Las implicaciones de esta técnica abarcan el desarrollo de una tecnología que, al aplicarse en el esmalte dental afectado, tanto en adultos como en niños, detiene las lesiones de caries tempranas, reconstruye el esmalte perdido debido a la caries, preserva la estructura dentaria y previene la progresión de la caries. El procedimiento será demostrado por el Dr. Chittar uno, investigador postdoctoral de mi laboratorio. Comience seleccionando un tercer molar humano sin caries restauradas.

Utilice una sierra de diamante de baja velocidad refrigerada por agua para cortar longitudinalmente la corona en rebanadas de dos milímetros de espesor, y luego elimine la porción radicular del molar por medio de ultrasonido. Limpie las rebanadas durante dos minutos y enjuáguelas tres veces con agua ionizada para simular lesiones erosivas. Esmalte las dos rebanadas con ácido fosfórico al 30% durante 30 segundos.

Luego, enjuáguelos inmediatamente con agua ionizada. A continuación, límpielos ultrasónicamente. Limpie las láminas grabadas durante dos minutos más y enjuáguelas con agua ionizada.

Tres veces más. Para preparar la solución stock de Kazan, primero disuelva 1% peso por volumen de Kazan en una solución de ácido acético al 1% volumen por volumen, seguido de agitación a 80 grados Celsius durante la noche.

Después de enfriar la solución a temperatura ambiente, filtre el esan a través de un filtro de 0,45 micrómetros y luego agregue hidróxido de sodio 1 molar para ajustar el pH a 5,0. Para preparar la solución madre de calcio y fosfato, pese el cloruro de calcio y prepare una solución 0,1 molar. A continuación, agite la solución en vórtex hasta que se vuelva clara y ajuste el valor de pH a 11 con hidróxido de sodio 1 molar.

Luego pese el fosfato de dibasodio. Prepare una solución 0,1 molar y agite en vórtex hasta que la solución esté clara. Para preparar el hidrogel de AMLO Genin kaizan, agregue 960 microlitros de la solución de 1% esan recién preparada a un tubo que contiene 200 microgramos de genina de AMLO porcina recombinante.

Luego, agite la solución en vórtex hasta que quede clara. Ahora, añada 25 microlitros de solución de cloruro de calcio 0,1 molar, seguidos de 15 microlitros de solución de fosfato de sodio dibásico 0,1 molar a la solución de ozan que contiene AMLO. Agite la solución en vórtex durante cinco minutos.

Luego, agregue cuidadosamente hidróxido de sodio 1 M para ajustar el pH de la solución de AMLO y ozan a 6,5. El hidrogel de AMLO y ozan se formará cuando el valor de pH alcance 6,5, iniciando así el crecimiento de nuevo esmalte en el hidrogel de AMLO y ozan. Primero, ajuste el pH de la solución de saliva artificial a 7,0 utilizando hidróxido de sodio 1 M y almacene la solución a cuatro grados Celsius. Luego, use una jeringa para aplicar aproximadamente 20 microlitros del hidrogel de AMLO y chizen sobre el borde de la sección de diente y colóquelo en un desecador a temperatura ambiente.

Después de dos horas, agregue 300 PPM de fluoruro de sodio a la solución de saliva y luego transfiera la rebanada de diente a un vaso de precipitados que contenga 30 mililitros de la solución. Cubra el vaso de precipitados con papel de aluminio y luego colóquelo en una estufa a 37 grados Celsius. Finalmente, retire la rebanada de diente después de tres a siete días y colóquela en un desecador a temperatura ambiente hasta que esté seca tras la reparación con hidrogel de AMLO y chizen durante siete días, formándose una capa similar al esmalte con un espesor de 15 micrómetros sobre la superficie de esmalte grabada.

La nueva capa crecida está compuesta por matrices altamente ordenadas de cristales con un diámetro de aproximadamente 50 nanómetros que crecen preferentemente a lo largo del eje c, perpendicular a la superficie. Obsérvese que estos cristales en forma de aguja están organizados en haces similares a las unidades fundamentales del esmalte natural. La imagen de difracción electrónica de área seleccionada de la capa reparada muestra un patrón en forma de arco que revela una alineación jerárquica de los cristales recién formados.

A lo largo de la dirección 0 0 2, el análisis de difracción de rayos X confirma que la capa recién crecida está compuesta de apatita, que se alinea a lo largo del eje cristalográfico C, de acuerdo con las observaciones de microscopía electrónica de barrido y difracción electrónica de área seleccionada. En esta imagen, se muestra la microestructura de la interfaz entre la capa recién crecida y el esmalte natural. Obsérvese que los cristales recién formados no crecieron en la misma dirección que los cristalitos de esmalte originales, y que el crecimiento de apatita mediado por proteínas da como resultado una orientación perpendicular de los cristales recién formados respecto a los cristales de esmalte natural. No hay ninguna brecha aparente en la interfaz entre la capa recién crecida y el sustrato de esmalte.

A escala nanométrica, el esmalte y los cristales regenerados se fusionaron para formar una interfaz continua. Tras 10 minutos de tratamiento ultrasónico, la nueva capa formada en el hidrogel de quitosano AMLO Genin aún está firmemente unida a la superficie del esmalte y la estructura organizada se conserva en la muestra tratada con hidrogel tizen sin amelógeno. Sin embargo, se observa un gran espacio entre el esmalte y la capa reparada, lo que permite distinguir claramente entre la capa recién formada y el esmalte natural.

En este experimento, la genina AMLO en la capa recién formada fue marcada mediante inmunofluorescencia; la presencia de la genina AMLO se confirmó entonces por la fluorescencia verde observada en la capa recién formada. Como se muestra en la gráfica, tras el ataque ácido, la dureza y el módulo de la superficie del esmalte disminuyen casi un 98 % y un 88 %, respectivamente. El grupo control tratado con hidrogel de ozan sin genina AMLO solo muestra una mejora limitada tanto en la dureza como en el módulo.

En contraste, tras la mineralización en el hidrogel AMLO y ozan, se observa un aumento de casi cuatro veces en el módulo y nueve veces en la dureza después de su desarrollo. En VI y tras una evaluación adicional en modelos, este protocolo puede ampliarse para diseñar una tecnología destinada al tratamiento de defectos del esmalte, como caries incipientes a distancia y esmalte erosionado.Ena.