Las mediciones del comportamiento y del aparato locomotor utilizando un sistema de supervisión de la actividad de campo abierto para las Enfermedades del músculo esquelético

El objetivo general de este procedimiento es medir la locomoción y la actividad conductual de los ratones en un entorno de campo abierto. El primer paso es aclimatar a los ratones a la cámara de campo abierto durante cuatro días consecutivos. Después de la aclimatación, la actividad conductual se registra utilizando un software especializado.

Cada día, los datos se exportan y revisan con fines de control de calidad. Después de las pruebas, los datos se analizan para múltiples parámetros de comportamiento. En última instancia, la actividad de campo abierto se utiliza para mostrar las diferencias entre los animales de control y los de prueba de una manera no invasiva.

La ventaja de este método no invasivo es que proporciona una evaluación global de la calidad de vida general de forma longitudinal. Esto imita la prueba de caminata de seis minutos utilizada como medida de resultado clínico y proporciona información sobre los posibles efectos fuera del objetivo del medicamento para obtener los mejores resultados. Asegúrese de que todos los animales estén correctamente aclimatados y que las pruebas se realicen a la misma hora todos los días, y de que haya una habitación tranquila con temperatura y humedad controladas con iluminación uniforme.

Para comenzar, lleve a los ratones a la sala de pruebas y permita que se aclimaten durante aproximadamente 10 minutos. Salga de la habitación durante este tiempo. A continuación, regrese a la habitación y encienda las cámaras de actividad.

Aunque los datos no se están recopilando en este momento, esto imitará el entorno de prueba. La cámara de actividad utilizada en este protocolo contiene un divisor central que divide la cámara en cuadrantes. Asegúrese de que el divisor esté correctamente alineado dentro de la cámara.

A continuación, retire suavemente a cada ratón de su jaula de origen e incorpórelos inmediatamente en un cuadrante vacío. Una vez que todos los animales estén cargados, coloque la tapa en la parte superior y salga de la habitación. Permita que los animales se aclimaten a la cámara de prueba durante 60 minutos después del período de aclimatación.

Regrese a la habitación y retire la tapa. Regrese suavemente cada ratón a su jaula de origen. Limpie cada cámara a fondo con desinfectante y toallas de papel entre cada sesión.

Repita estos pasos durante cuatro días consecutivos una semana antes de la recopilación inicial de datos. Tenga cuidado de asignar aleatoriamente a los animales a una nueva caja en cada sesión para evitar la habituación y realice un seguimiento de las asignaciones de cajas a lo largo de la duración del estudio. Para medir la actividad en campo abierto, lleve ratones a la sala de pruebas para que se aclimaten durante 10 a 30 minutos.

Salga de la habitación durante este tiempo. Pasado este tiempo, regrese a la habitación y encienda las cámaras de actividad. A continuación, abra el software informático adjunto que registrará el movimiento del animal.

Configure los parámetros primarios de recopilación de datos en el software de la computadora para recopilar seis bloques de datos de 10 minutos y luego ingrese la fecha, el nombre de archivo y los números de identificación del mouse apropiados. Una vez que se hayan configurado todos los parámetros, ejecute una verificación previa al haz para verificar que todos los haces infrarrojos funcionen correctamente. Si la cámara no pasa la verificación previa al haz, lo más probable es que se deba a una mala alineación del divisor central.

Si esto sucede, vuelva a alinear el divisor hasta que los sensores se desbloqueen y el sistema esté listo. Cuando todas las cámaras de prueba estén listas, retire suavemente al ratón de su jaula de inicio y colóquelo en la cámara de prueba. Se pueden colocar dos animales en la cámara de ensayo al mismo tiempo durante la recogida de datos.

Por ejemplo, se puede colocar un animal en el cuadrante delantero izquierdo y otro en el cuadrante trasero derecho. Coloque la tapa en la parte superior de las cámaras una vez que todos los animales estén cargados y luego inicie el programa para comenzar la recopilación de datos. El programa comenzará a registrar los niveles de actividad de acuerdo con los parámetros de recopilación de datos establecidos anteriormente.

Abandone la sala de pruebas mientras dure el período de prueba. Regrese a la habitación cuando se complete la recopilación de datos. Guarde los datos y luego devuelva cada animal a su respectiva jaula de origen.

Limpie todas las unidades con un desinfectante y toallas de papel antes de realizar pruebas a otro grupo de animales. Después de la prueba, exporte los datos a una hoja de cálculo. El software informático calcula múltiples parámetros durante el período de recopilación de datos.

Para cada mouse, revise todos los datos con fines de control de calidad. Repita estos pasos durante cuatro días consecutivos. Tenga cuidado de asignar aleatoriamente a los animales a una nueva caja en cada sesión y realice un seguimiento de las asignaciones de cajas a lo largo de la duración del estudio.

Por último, calcule la actividad horizontal media. Actividad vertical, distancia total recorrida, tiempo total de movimiento y tiempo total de descanso de los cuatro días de recogida de datos. Estos resultados muestran los niveles típicos de actividad en campo abierto de machos y hembras de distrofia muscular congénita alfa con deficiencia de dos laminados J, ratones y ratones de control a lo largo del tiempo, la actividad horizontal fue mayor en los ratones de control, al igual que la actividad vertical y la distancia total recorrida.

Los ratones DY dos J también mostraron una pérdida completa de la actividad vertical a las 19 semanas de edad, lo que refleja la parálisis de sus extremidades traseras y, a su vez, la incapacidad de reproducirse a las seis semanas de edad durante la fase necrótica máxima. En el modelo animal de distrofia muscular de Duchenne, los ratones MDX muestran niveles más bajos de actividad horizontal, actividad vertical y distancia total recorrida. También se demostraron diferencias en la actividad de campo abierto entre ratones de diferentes cepas.

Los ratones BL 10 tuvieron mayor actividad horizontal, actividad vertical y distancia total recorrida en comparación con los ratones L six. Debido a que la actividad conductual es propensa a grandes variaciones, la actividad en campo abierto puede no ser una medida de criterio de valoración primario adecuada. Sin embargo, puede ser una medida de resultado secundaria muy valiosa en estudios preclínicos cuando se realiza con ensayos histológicos y moleculares funcionales adicionales.