Evaluación de murino ejercicio de resistencia sin el uso de una rejilla de choque: Una Alternativa para el ejercicio forzado

Se demuestra un método para evaluar la resistencia al ejercicio en ratones de laboratorio sin el uso de una rejilla de choque. Este método es un refinamiento humano que puede disminuir los efectos de confusión del estrés en los parámetros experimentales.

El objetivo general de este procedimiento es determinar la resistencia al ejercicio voluntario. En ratones de laboratorio, esto se logra primero permitiendo que el ratón se aclimate a la sala de procedimientos en su jaula doméstica durante una o dos horas. A continuación, se permite que el ratón se aclimate a la cinta de correr y al sonido del motor.

A continuación, la velocidad de la cinta de correr se incrementa gradualmente hasta que el ratón corre cómodamente a su velocidad máxima sostenida. El paso final es determinar cuándo el mouse ha alcanzado el agotamiento. En última instancia, la cantidad de tiempo que el ratón ha corrido hasta el agotamiento revela una medida de resistencia al ejercicio sin los efectos confusos del estrés por el uso de una rejilla de choque.

La principal ventaja de esta técnica es que es un refinamiento de los métodos existentes para determinar la resistencia al ejercicio y a los ratones, principalmente porque no utiliza una cuadrícula de tiro para animar a los ratones a correr, reduciendo así los efectos confusos del estrés, tanto para el animal como para el experimento. Decida de antemano sobre los grupos experimentales y los procedimientos posteriores al ejercicio para ratones. Coloque la caminadora en un carrito o mesa resistente en una habitación tranquila dedicada a este procedimiento.

Durante las pruebas de carrera, configure la cinta de correr para carriles del tamaño de un ratón y con una inclinación adecuada al protocolo. La inclinación de cinco grados positivos se utiliza aquí para obviar el daño muscular debido al ejercicio excéntrico que se produce durante la carrera cuesta abajo. Coloque una almohadilla absorbente debajo de la campana de la caminadora para recoger las heces.

Permita que el ratón se aclimate a la sala de procedimientos en su jaula doméstica transportada con sus compañeros de jaula durante una o dos horas. Seleccione un solo ratón y registre su número de etiqueta. También pesa el ratón y registra su peso.

Coloque el mouse en la cinta de correr sin el motor encendido para aclimatarse durante unos cinco minutos. Encienda la alimentación sin que la cinta de correr esté en marcha y deje que el mouse se aclimate al ruido de la máquina durante otros cinco minutos. Retire a los ratones de los grupos sedentarios de la cinta de correr en este punto y devuélvalos a su jaula o realice procedimientos posteriores al ejercicio según el diseño experimental.

Después de la aclimatación, gire el cinturón a una velocidad baja. Cuando el animal esté explorando el cinturón y no esté en la plataforma, golpee o levante suavemente los cuartos traseros del ratón con un depresor de lengua de una a tres veces para alentar a los animales reacios a permanecer en la cinta y correr. Iniciar un temporizador de laboratorio Una vez que el mouse esté funcionando a la velocidad inicial de 10 metros por minuto, aumente la velocidad lentamente.

Cuando el mouse esté en la parte superior del cinturón en incrementos de un metro por minuto aproximadamente cada dos minutos, baje la velocidad a la configuración anterior. Si el ratón corre repetidamente en ráfagas cortas y no a un ritmo constante, la mayoría de los ratones correrán fácilmente, pero a veces se detienen por períodos cortos. Use el depresor de lengua para golpear o levantar suavemente la parte trasera del animal para alentar la reanudación de la carrera.

A menudo, el simple hecho de notar que la mano con el depresor de la lengua se acerca a ellos hace que los ratones corran un poco más. No detenga el temporizador para interrupciones temporales en el funcionamiento. Determine la velocidad máxima de carrera sostenida de cada mouse ajustando la velocidad y observando cómo el mouse registra esta velocidad.

Algunos ratones se niegan por completo a correr. Estos ratones correrán en ráfagas cortas. Luego se detiene para acicalarse o pedalear que está sentado en la plataforma y usar sus patas delanteras en el cinturón.

La postura clásica de un ratón que se niega es encorvado con las cuatro patas plantadas debajo del animal para evitar que el depresor de la lengua lo empuje hacia la cinta de correr. De vez en cuando un ratón se vuelve agresivo hacia el depresor de la lengua cuando no está dispuesto a correr, mordiendo la lengua, el depresor o trepando por él como forma de escape. Está claro en los primeros cinco minutos de la prueba si el mouse funcionará o no.

Retire e identifique a los ratones que se niegan a huir del análisis, pero no los cuente como ratones sedentarios. Dependiendo de su diseño experimental, los ratones que se niegan pueden volver a ser analizados en un día diferente. El agotamiento se define por tres paradas sucesivas y la negativa a volver a correr a pesar de los estímulos suaves.

Además de signos físicos de agotamiento, como dificultad para respirar y postura extendida. Identifique a los ratones agotados y detenga el temporizador. Registre la cantidad total de tiempo que pasa corriendo a todas las velocidades.

Dependiendo del diseño experimental, devuelva el ratón a su jaula o realice procedimientos inmediatos después del ejercicio, como la recolección de sangre o tejidos. De acuerdo con las pautas institucionales, limpie el cinturón con una toallita germicida después de probar cada ratón individualmente para que el olor del ratón anterior no influya en el comportamiento de los ratones posteriores probados para el próximo ratón. Use un depresor de lengua fresca para cada ratón.

Los ratones que residen en la misma jaula pueden ser examinados secuencialmente el mismo día sin aclimatación adicional a la sala de procedimientos. La resistencia al ejercicio refleja con precisión el perfil molecular y metabólico de diferentes cepas de ratones C 57 black six que difieren en la expresión de la citocina IL 15 derivada del músculo, los ratones transgénicos que sobreexpresan IL 15 exhiben tiempos de carrera hasta el agotamiento significativamente mayores en comparación con los controles comidos, mientras que los ratones que carecen de IL 15 exhiben tiempos de ejecución significativamente reducidos antes de alcanzar el agotamiento, controles de tipo salvaje. 57 ratones negros de seis de dos fuentes diferentes no exhiben tiempos de ejecución significativamente diferentes.

La velocidad máxima de carrera sostenida difirió solo en los ratones knockout IL 15. Una limitación inevitable de esta técnica es que algunos ratones se niegan a correr voluntariamente. El porcentaje de ratones jóvenes de control de tipo salvaje que se niegan a correr es de alrededor del 10%A los cuatro meses de edad, el porcentaje de rechazos aumenta al 20% a los ocho meses de edad y aumenta a más del 60% a los 16 meses de edad.

Sin embargo, el porcentaje de rechazos en el grupo de mayor edad es significativamente menor en los ratones transgénicos IL 15. Al intentar este procedimiento, es importante recordar mantener la calma y la relajación y prestar atención al comportamiento del ratón. Después de ver este video, debe tener una buena comprensión de cómo usar una cinta de correr para determinar la resistencia al ejercicio y ratones sin usar el chakra e.