Name: Un procedimiento para observar inducida Contexto-Renovación-pavloviano acondicionado Alcohol comportamiento de búsqueda en ratas (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2014-09-19T14:00:00.000+00:00
Duration: 13 min 24 s
Description: Aprende a observar la renovación del comportamiento de búsqueda de alcohol pavloviano inducida por el contexto en ratas. Este método utiliza entrenamiento de discriminación auditiva y extinción para estudiar los mecanismos de recaída en adicción.

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Este trabajo fue apoyado por el Instituto Nacional sobre el Abuso del Alcohol y el Alcoholismo (RO1 AA014925 otorgado a la Dra. Patricia H. Janak de la Universidad de California, San Francisco, CA, EE. UU.), Fonds de recherche du Quebec – Santé (NC) y el Consejo de Investigación de Ciencias Naturales e Ingeniería (NC, 387224-2010). La publicación en acceso abierto de este artículo fue posible gracias al patrocinio de Med Associates Inc.

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<li>Chaudhri, N., Woods, C. A., Sahuque, L. L., Gill, T. M., Janak, P. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Unilateral+inactivation+of+the+basolateral+amygdala+attenuates+context-induced+renewal+of+Pavlovian-conditioned+alcohol-seeking%5BTitle%5D)+AND+%22Eur+J+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Unilateral inactivation of the basolateral amygdala attenuates context-induced renewal of Pavlovian-conditioned alcohol-seeking.</a> Eur J Neurosci. 38, 2751-2761 (2013).</li>
<li>Chaudhri, N., Sahuque, L. L., Schairer, W. W., Janak, P. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Separable+roles+of+the+nucleus+accumbens+core+and+shell+in+context-+and+cue-induced+alcohol-seeking%5BTitle%5D)+AND+%22Neuropsychopharmacology%22%5BJournal%5D)">Separable roles of the nucleus accumbens core and shell in context- and cue-induced alcohol-seeking.</a> Neuropsychopharmacology. 35, 783-791 (2010).</li>
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Todos los procedimientos experimentales fueron aprobados por el Comité Ético de Investigación Animal de la Universidad Concordia y están en conformidad con las directrices del Consejo Canadiense de los Animales. Fue posible la publicación de acceso abierto de este artículo por el patrocinio de Med Associates Inc.

Los resultados de este procedimiento revelan que los estímulos ambientales específicos que acompañan habitualmente la entrega de alcohol pueden adquirir la capacidad de conducir la conducta de búsqueda de alcohol. También demuestran que los estímulos contextuales asociados a la disponibilidad o ausencia de alcohol antes puede guiar acondicionado respuestas de comportamiento a las señales discretas alcohol predictivo. Los pasos críticos dentro del protocolo Contextos de la presente tarea incorporan estímulos externos a la rata. Sin embargo, el estado interoceptivo de la rata a prueba también puede constituir un &quot;contexto&quot; que podría afectar a la renovación 20. Por tanto, es importante para habituarse ratas a los procedimientos que pueden ocurrir antes de la prueba renovación y cambiar su estado interoceptive, como microinfusions intracraneales o inyecciones sistémicas. Por otra parte, la habituación a microinfusions o inyecciones sistémicas debería llevarse a cabo antes de la extinción y tanto PDT sESIONES, para prevenir este tipo de procedimientos se vean asociados a una fase específica de la prueba. Los parámetros temporales, como la duración CS, intervalo EC-EI, y el intervalo entre ensayos (ITI), hace tiempo se sabe que influyen en respuesta condicionada en una variedad de paradigmas de acondicionamiento 21-26. Del mismo modo, los parámetros temporales pueden influir en la observación del efecto de renovación en nuestro procedimiento. Cualquier conjunto de parámetros distintos a los especificados en el protocolo debe ser validada experimentalmente en estudios piloto antes de proceder a emplearlos en investigaciones de mayor tamaño. Modificaciones y solución de problemas La investigación anterior ha encontrado que la cantidad de etanol que las ratas consumen en la jaula de alojamiento puede variar en función del proveedor de la que se compran ratas 17,27. Por lo tanto, el proveedor es una consideración importante para esta fase del estudio. Del mismo modo, la elección de la cepa de rata debe ser considered con cuidado, ya que hay numerosos informes de la cepa diferencias en el consumo de etanol 28-31. El trabajo previo en un paradigma de condicionamiento aversivo ha demostrado que la edad de desarrollo de ratas influye en la observación de la renovación de una respuesta de miedo condicionado pavloviano 32. La falta de un efecto de renovación en ratas muy pequeños (menores de día postnatal 20) se ha sugerido que se debe a la alteración de la codificación de la información contextual 33. Por tanto, la edad de desarrollo de las ratas para ser usados ​​en la presente procedimiento debe ser tomada en consideración. Se ha observado Renovación de pavloviano condicionado comportamiento de búsqueda de alcohol cuando se utilizaron 10% 9,16, 15% 14, 20 o 15% soluciones de etanol durante el acceso etanol jaula hogar y PDT fases del experimento. Los investigadores podrían utilizar cualquiera de estas concentraciones de etanol a los efectos del establecimiento de este procedimiento en su laboratories. Durante la adquisición de la formación discriminación pavloviano es importante comprobar los orificios de fluido después de cada sesión para asegurarse de que todo el etanol que se entregó se ha consumido. Dejando ratas en las cámaras de acondicionamiento de unos 10 - 15 minutos después de cada sesión puede hacerse a principios de PDT para fomentar el consumo de cualquier etanol que no se consumía durante la sesión. El número de ratas que salen de etanol consumido en los puertos debería disminuir a medida que progresa la TFD. Si a finales de ratas PDT son o bien (a) no se consume todo el etanol y / o (b) que no responden a la CS + entonces estos temas deben ser retirados del estudio. La mayoría de las ratas responden a la más fiable + CS de la CS. Sin embargo, algunas ratas pueden responder a altos niveles para ambas señales, con lo que no muestra evidencia de discriminación. Las ratas que muestran altos responden tanto a la CS + y CS durante la TFD no son lanzadas desde el estudio. En nuestra experiencia, estos sujetos muestran una discriminación notabledurante la primera sesión de extinción en ausencia de etanol, lo que sugiere que sus altos niveles de respuesta a la CS durante la TFD son impulsados ​​por la presencia de etanol en el puerto de fluido. Estos sujetos también tienden a mostrar efectos de renovación robustos. Limitaciones del procedimiento Debido a que el examen de renovación se lleva a cabo en ausencia de etanol, entradas de puerto acondicionado provocados por el CS + disminuyen gradualmente a través de la sesión de prueba. Por lo tanto, el importe global de la conducta generada en la prueba, en contra de lo que los cambios inducidos experimentalmente pueden ser evaluados, es bastante bajo. Debido a que en esta tarea de responder tiende a ser mayor en el inicio a partir del cierre de la sesión de pruebas, es importante examinar los efectos de las manipulaciones experimentales sobre la respuesta condicionada a modo de prueba por prueba. Las entradas en el receptáculo de fluido proporcionan la medida dependiente principal en esta tarea. Sin embargo, una entrada de puerto errónea podría ser registrado si un animal está lo suficientemente cerca del receptáculo de fluido para romper el haz infrarrojo a través de la apertura de la puerta de fluidos con sus bigotes. Si bien, las respuestas erróneas infrecuentes son obvias como un aumento dramático en el puerto total de las entradas en relación con la conducta del sujeto en las sesiones previas. Grabación en vídeo de los animales podría facilitar la detección de posibles respuestas erróneas, y permitir un análisis más refinado de los comportamientos exhibidos por las ratas en todo el entrenamiento y las pruebas. Importancia de la técnica con respecto a los métodos existentes / alternativos Renovación inducida Contexto-del comportamiento de búsqueda de drogas se estudia en gran medida utilizando una tarea de condicionamiento instrumental en el que la variable dependiente primaria es una respuesta operante, tal como una prensa de palanca 8,34 o la nariz meter 12. En el presente procedimiento, la respuesta de búsqueda de drogas es &quot;enfoque condicionado &#39;al puerto de líquido que se produce al presentaciones deel + CS. Esta respuesta probablemente se adquiere a través del aprendizaje pavloviano, que es el proceso de aprendizaje que media la formación de asociaciones entre estímulos ambientales y los efectos farmacológicos de las drogas de abuso en los seres humanos. Las aplicaciones futuras Esta tarea se puede utilizar en combinación con la neurofarmacología, la optogenética y neuroquímica para estudiar los mecanismos neurales que están implicados en la renovación inducida contexto de la conducta de búsqueda de alcohol-pavloviano acondicionado 16. Además, los mecanismos de comportamiento y neuronales que regulan la adquisición y extinción de-pavloviano acondicionado comportamiento de búsqueda de alcohol pueden ser investigados. Por último, esta tarea se puede utilizar para explorar las manipulaciones de extinción que podrían impedir la renovación, una dirección importante para la investigación translacional destinada a reducir el impacto de las drogas asociado contextos ambientales en la reactividad a las señales de predicción de drogas después de la terapia de exposición cue en adi humanacts.

Permanecer sobrio es un desafío considerable que enfrentan las personas que sufren de trastornos de abuso de alcohol. La abstinencia es un momento de vulnerabilidad al impacto conductual, psicológico y fisiológico de los estímulos ambientales que acompañan habitualmente el consumo de alcohol, que pueden, a través del condicionamiento pavloviano, se asocian con la embriaguez 1,2. La exposición a las señales de predicción de alcohol puede provocar respuestas condicionadas, como las ansias de alcohol, lo que puede promover conductas de búsqueda de alcohol que facilitan la recaída 3,4. Las secuencias estereotipadas de comportamiento que llevan al consumo de alcohol pueden causar ciertos tipos de estímulos para ser experimentadas habitualmente inmediatamente antes de los efectos farmacológicos de la ingesta de alcohol. Por ejemplo, la vista, el olfato y el gusto del alcohol son las propiedades sensoriales de alcohol que preceden fiable intoxicación. Además de estas señales, que se conocen como &#39;discreta&#39; o &#39;proximaseñales l &#39;, contextos ambientales en las que las drogas se usan con regularidad también puede provocar ansias 5,6. La exposición a los lugares físicos en los que los fármacos han sido previamente utilizadas por lo tanto puede ser un desencadenante crítico para la recaída 7. Se han desarrollado modelos animales para estudiar los mecanismos neurales que median el impacto de los contextos asociados de drogas en el comportamiento de búsqueda de drogas 8-13. El procedimiento descrito en este documento permite la investigación de cómo los contextos asociados con el consumo de alcohol pueden modular el comportamiento de búsqueda de alcohol que está provocada por una discreta, alcohol predictivo cue pavloviano. Entrenamiento en discriminación pavloviano se lleva a cabo en un contexto ambiental específico, donde las ratas se entrenan para conductualmente distinguir entre dos estímulos auditivos acondicionado, un + CS que se empareja con el alcohol, y un CS que no lo es. Sesiones de extinción se llevaron a cabo a continuación, en un contexto diferente, donde la respuesta a la CS+ Disminuye como resultado de alcohol ha sido retenido. Posteriormente, la reexposición al alcohol asociado, contexto de formación pavloviano desencadena un aumento selectivo en el comportamiento de búsqueda de alcohol inducida por el CS +, sin ningún cambio en la respuesta a la CS. Este resultado, que hemos replicado consistentemente 9,14-16, extiende los resultados de los procedimientos instrumentales de acondicionamiento en la que se han encontrado contextos de drogas para estimular la renovación de las respuestas operantes asociados con la administración de fármacos 10,13.

<table><tbody><tr><td>Carro utilitario de servicio pesado</td><td>Rubbermaid</td><td>#4520-88</td><td>Se utiliza para transportar ratas en su jaula doméstica desde la sala de la colonia hasta la sala de comportamiento u otras instalaciones</td></tr><tr><td>Ratas, Long-Evans</td><td>Harlan</td><td></td><td>Las ratas pesaban 220-240 g a su llegada</td></tr><tr><td>Báscula Ohaus</td><td>Fisher</td><td>#S402421</td><td>Para pesar ratas; tara primero el fondo de un recipiente de plástico, luego coloque la rata en él para pesarla</td></tr><tr><td>Beta-chips, álamo temblón</td><td>Harlan</td><td>#7090A</td><td>Ropa de cama para jaula casera</td></tr><tr><td>Nylabone</td><td>Bio-Serv</td><td>#K3580</td><td>Enriquecimiento proporcionado en la jaula casera</td></tr> comida <tr><td>para roedores esterilizable en autoclave</td><td>Agribrands, Charles River</td><td>#5075</td><td>Para alimentar ratas Tapa de jaula de barra de</td></tr><tr><td>alambre</td><td>Ancare</td><td>#R20SS2B</td><td>Hecho a medida con dos ranuras para botellas Fondo de</td></tr><tr><td>jaula</td><td>Ancare</td><td>#R20PC</td><td>Para albergar ratas</td></tr><tr><td>Tapones</td><td>Ancare</td><td>#8.5</td><td>Tapones de goma para ocluir la abertura en botellas de agua y cilindros graduados; va con tubos de sorbo de punta de bola&nbsp;</td></tr><tr><td>Tubos de punta esférica, 1.5" de largo</td><td>Ancare</td><td>#TD-99</td><td>Insertados en tapones, permiten a las ratas beber de botellas de agua y cilindros graduados</td></tr><tr><td>Botellas de agua</td><td>Ancare</td><td>#FSPC8HT</td><td>capacidad de 473 ml (16 oz), deben ocluirse con tapón</td></tr><tr><td>Cilindros graduados, 100 ml</td><td>Fisher</td><td>#0300741</td><td>Contener etanol durante la exposición al alcohol en la jaula del hogar; El extremo de la boquilla debe cortarse para permitir la oclusión con tapones</td></tr><tr><td>Báscula Mettler</td><td>Mettler Toledo</td><td>#MS6001S</td><td>Para el pesaje de botellas de agua y cilindros de etanol Tubo</td></tr> de <tr><td>polietileno, diámetro interior de 1/32", espesor de pared de 1/32", diámetro exterior de 3/32"</td><td>Fisher</td><td>#14-169-1A</td><td>Para conectar una jeringa de etanol de 20 ml al puerto de fluido</td></tr><tr><td>Aguja, 18 g, 1,5" de longitud</td><td>Fisher</td><td>#B305199</td><td>Para conectar el tubo de polietileno a las jeringas de etanol; debe limarse</td></tr><tr><td>Jeringas, 20 ml, Luer-Lok no estéril</td><td>Fisher</td><td>#1482316J</td><td>Para contener etanol en las bombas de fluido; debe conectarse al tubo de polietileno mediante una aguja de 18 G 1 1/2</td></tr><tr><td>Jeringas, 60 ml, Luer-Lok no estéril</td><td>Fisher</td><td>#14-820-11</td><td>Para enjuagar el tubo de polietileno después de las sesiones de PDT</td></tr><tr><td>Bomba de jeringa de una sola velocidad, 3.33 rpm</td><td>Med Associates Inc.</td><td>#ENV-018MD</td><td>Para contener jeringas de etanol de 20 ml y suministrar etanol</td></tr><tr><td>Puerto de fluido</td><td>Med Associates Inc.</td><td>#ENV-254-CB</td><td>Para permitir la administración de etanol durante las sesiones de PDT; conectado a jeringas de etanol con tubería de polietileno</td></tr><tr><td>Detector de infrarrojos de entrada al puerto</td><td>Med Associates Inc.</td><td>#ENV-215M</td><td>Fijo en ambos lados del puerto de fluido; necesita 2 por puerto de fluido</td></tr><tr><td>Houselight, 28 V, 100</td><td>mA Med Associates Inc.</td><td>#ENV-135M</td><td>Proporciona iluminación general en la cámara de acondicionamiento</td></tr><tr><td>Módulo Clicker</td><td>Med Associates Inc.</td><td>#ENV-225SM</td><td>Estímulo auditivo para cámara de acondicionamiento</td></tr><tr><td>Generador de ruido blanco con altavoz</td><td>Med Associates Inc.</td><td>#PHM-100</td><td>Estímulo auditivo para la cámara de acondicionamiento</td></tr> Bar <tr><td>floor</td><td>Med Associates Inc.</td><td>#ENV-009A-GF</td><td>Para ir con la cámara de prueba modular</td></tr><tr><td>Capa de banco, absorbente</td><td>VWR</td><td>#89126-790</td><td>Papel absorbente para colocar en la bandeja de metal, debe cortarse para que se ajuste a la bandeja de metal Lámina</td></tr> de <tr><td>policarbonato, 1/8" de grosor, 12-5/8" x 10"</td> <td>Johnston Plastics</td><td>#30102515</td><td>Para hacer un inserto de piso transparente liso utilizado para el contexto 1. Necesita ser cortado en piezas de 11.5" x 12.25"</td></tr><tr><td>Lámina de aluminio perforada, 0.063" de espesor, 48" x 96", 0.250" agujeros x 0.375" centros</td><td>Acero</td><td></td> Anica <td>Para hacer un inserto de piso perforado utilizado para el contexto 2. Necesita ser cortado en pedazos de 11.5" x 12.25"</td></tr><tr><td>Cartón negro, 0.053" de grosor, 28" x 44"</td> <td>Omer DeSerres</td><td>#P1909</td><td>Para construir paneles que cubran el techo, la puerta y la pared trasera de la cámara de acondicionamiento en el contexto 1. Necesita ser cortado a medida. Cada cámara necesita tres paneles que midan aproximadamente 11.5" x 13.25". Los paneles se pueden unir por el lado más estrecho con cinta adhesiva.</td></tr><tr><td>Cinta adhesiva resistente para todo uso, 1.88" x 45 yardas.</td><td>Duck Tape</td><td></td><td>Material adhesivo para unir los paneles de cartón negro utilizados para cubrir la pared trasera, el techo y la puerta en el contexto 1.</td></tr><tr><td>Cámara de pruebas modular</td><td>Med Associates Inc.</td><td>#ENV-009A Cámara de</td><td>acondicionamiento</td></tr><tr><td>Cubículos atenuadores de sonido</td><td>Med Associates Inc.</td><td>#ENV-200R3AM</td><td>Viene con un ventilador de 28 V CC instalado (#ENV-025F)</td></tr><tr><td>Placa de Petri</td><td>Fisher</td><td>#08748B</td><td>Solo en la parte inferior, para contener la solución rociada que proporciona el estímulo de olor; debe estar centrado en la bandeja de metal en las cámaras de acondicionamiento</td></tr><tr><td>Paquete de interfaz PCI Med</td><td>Associates Inc.</td><td>#DIG-700P2-R2</td><td>Conecta el gabinete de interfaz de mesa a la computadora; incluye 1 tarjeta de interfaz, 1 tarjeta de decodificación, 1 cable plano y 1 cable de alimentación de 28 V CC</td></tr><tr><td>Gabinete de mesa grande y fuente de alimentación</td><td>Med Associates Inc.</td><td>#SG-6510D</td><td>Se utiliza para contener las 12 tarjetas incluidas en el paquete SmartCrtrl 8 Input, 16 Output</td></tr>, <tr><td>SmartCtrl 8 Input, 16 Output</td><td>Med Associates Inc.</td><td>#DIG-716P2</td><td>Se utiliza para conectar y controlar los dispositivos en la cámara de acondicionamiento. El paquete incluye todos los cables, el módulo de interfaz y el panel de conexión.</td></tr><tr><td>Software Med PC IV</td><td>Med Associates Inc.</td><td>#SOF-735</td><td>Software para ejecutar programas. Debe instalarse en la computadora.</td></tr><tr><td>Monitor LG, LCD de 19" Tienda</td> de <td>informática Concordia</td><td>#W1942TQ-BF Monitor de</td><td>ordenador; para ir con el ordenador que ejecuta Med PC IV</td></tr><tr><td>ESTACIÓN DE TRABAJO EN TORRE HP Z200</td><td>Tienda de informática Concordia</td><td>#BZ788US#ABA</td><td>Ordenador en el que se ejecuta Med PC IV</td></tr><tr><td>Benzaldehído, &ge; 99%</td><td>Les produits chimiques OMEGA Chemical Company Inc.</td><td>#B37-50</td><td>Diluir en agua del grifo para el olor del contexto de las almendras</td></tr><tr><td>Aceite de limón, prensado en frío, California</td><td>Sigma Aldrich</td><td>#W262528-1KG-K</td><td>Diluir en agua del grifo para el olor del contexto del limón</td></tr><tr><td>Alcohol etílico, 95%</td><td>Alcoholes</td><td></td> comerciales <td>Diluir en agua del grifo hasta la concentración deseada</td></tr></tbody></table>

un procedimiento para observar inducida contexto-renovación-pavloviano acondicionado alcohol comportamiento de búsqueda en ratas

A Procedure to Observe Context-induced Renewal of Pavlovian-conditioned Alcohol-seeking Behavior in Rats

Contextos ambientales en los que las drogas de abuso se consumen pueden desencadenar el deseo, una respuesta pavloviana acondicionado subjetiva que puede facilitar la conducta de búsqueda de drogas y la recaída puntual en los usuarios de drogas en abstinencia. Hemos desarrollado un procedimiento para estudiar los procesos conductuales y neuronales que median el impacto del contexto en el comportamiento de búsqueda de alcohol en ratas. Después de la aclimatación al gusto y los efectos farmacológicos de etanol al 15% en la jaula de alojamiento, ratas macho Long-Evans reciben entrenamiento en discriminación pavloviano (PDT) en cámaras de acondicionamiento. En cada sesión diaria (lunes a viernes) PDT, se producen 16 ensayos cada uno de los dos estímulos diferentes auditivo 10 seg acondicionado. Durante un estímulo, el CS +, 0,2 ml de etanol al 15% se entrega a un puerto de fluido para el consumo oral. El segundo estímulo, el CS, no se empareja con etanol. A través de sesiones, entradas en el puerto de fluido durante el aumento de CS +, mientras que las entradas durante el CS se estabilizan a un nivel más bajo, lo que indica que un predictive asociación entre el CS + y etanol se adquiere. Durante PDT cada cámara está equipada con una configuración específica de estímulos contextuales visuales, olfatorias y táctiles. Después de PDT, la extinción de formación se lleva a cabo en la misma cámara que ahora está equipado con una configuración diferente de los estímulos contextuales. El CS + y CS se presentan como antes, pero el etanol se retira ésta, lo que provoca una disminución gradual de entradas de puerto durante el CS +. En la prueba, las ratas se colocan de nuevo en el contexto PDT y presentan con las CS + y CS-como antes, pero sin etanol. Esta manipulación provoca un aumento robusto y selectivo en el número de entradas de puerto realizadas durante el alcohol predictivo CS +, sin ningún cambio en la respuesta durante el CS. Este efecto, conocido como la renovación inducida contexto-, ilustra la capacidad poderosa de contextos asociados con el consumo de alcohol para estimular el comportamiento de búsqueda de alcohol en respuesta a señales de Pavlov alcohol.

Acceso etanol intermitente en la jaula de alojamiento: El consumo de etanol (g / kg) y aumento de la preferencia de etanol a través de sesiones de acceso etanol intermitente en la jaula de alojamiento, por lo general alcanzar niveles estables dentro de 8 a 12 sesiones (Figura 1). En el conjunto de datos se muestra en la Figura 1, el consumo estable etanol promediado en las dos últimas sesiones de acceso etanol jaula varió desde 1,33 hasta 6,44 g / kg para las ratas individuales. La fase de consumo de etanol jaula del experimento se puede detener una vez que el g / kg Consumo ha estabilizado, y las ratas se mantuvo a este nivel estable de beber durante un número de sesiones. Para analizar los datos de esta fase, realizar el análisis por separado de medidas repetidas de la varianza (ANOVA) a través del factor de la sesión para el consumo de etanol (g / kg) y la preferencia de etanol en un mismo sujeto. Esquema de procedimiento de renovación inducida contexto: Cada fase de laprocedimiento experimental (PDT, extinción, prueba de la renovación) se ilustra en la Figura 2. Ver el pie de figura para obtener más detalles. Medidas y datos de respuesta de análisis: En todas las fases de comportamiento se describen a continuación, las respuestas de entrada del puerto realizadas durante el CS + y CS se normalizan con referencia a pre-CS respuestas de entrada de puerto de línea de base. Para crear las medidas normalizadas CS, restar el número de entradas de puerto realizadas durante el intervalo de la línea de base pre-CS (el 10 segundos inmediatamente antes de la aparición CS) a partir del número de entradas de puerto hechas durante las presentaciones de la CS + y CS. El normalizado CS + y CS-medidas normalizadas sirven como indicadores de comportamiento suscitó específicamente por presentaciones CS, elevado por encima de los niveles basales. Realizar medidas repetidas ANOVA separados con los factores sujetos dentro-repetidas de sesión y tipo CS (CS + vs CS) para el PDT y fases de extinción. Para las comparaciones entre fase (PDT, extinción, renovaral test), los datos de uso promediado en las dos últimas sesiones de TFD y la extinción y la sesión de datos de prueba de renovación en medidas repetidas ANOVA. Para el seguimiento de los efectos significativos principales e interacciones, uso post hoc pruebas t para muestras independientes o apareadas que se corrigen para comparaciones múltiples. Criterio de significación se fijó en α = 0,05. PDT: respuestas de entrada a puerto a los aumentos de CS + a través de sesiones de TFD, mientras que las respuestas de entrada del puerto de la CS-permanecen bajos y estables, en general. Tenga en cuenta que las respuestas de entrada a puerto a la CS puede aumentar ligeramente en las primeras sesiones de entrenamiento PDT; sin embargo, entradas de puerto hechas en respuesta a la CS se estabilizan a un nivel mucho más bajo que las hechas en respuesta a la CS +. Discriminación éxito se evidencia por una elevación estadísticamente significativa en entradas de puerto durante el CS + en comparación con el CS (Figura 3). Este resultado indica que-pavloviano acondicionado comportamiento de búsqueda de alcohol tiene seres establecido para el CS +, pero no el CS. Extinción: respuestas de entrada a puerto a la CS + disminuyen gradualmente a través de sesiones de extinción. Respuestas de entrada a puerto a la CS-siguen siendo bajos y estables a través de sesiones de extinción. Idealmente, discriminado responder es abolida a finales de entrenamiento de extinción, como lo demuestra la falta de una diferencia estadísticamente significativa entre entradas de puerto a la CS + y CS. Sin embargo, no es raro que un cierto grado de discriminación de responder a permanecer, incluso al final de la formación extinción. En este caso, es importante verificar que las respuestas de entrada a puerto a la CS + al final del entrenamiento de extinción son estadísticamente más baja que las respuestas de entrada del puerto de la CS + en el inicio de la extinción, así como al final de la terapia fotodinámica (Figura 3) . Este patrón de resultados indica que-pavloviano acondicionado comportamiento de búsqueda de alcohol se haya extinguido significativamente. Inducida Contexto-examen de renovación: Portrespuestas de entrada a los aumentos de CS + en la prueba de la renovación inducida contexto, en relación con entradas de puerto CS + observadas al final del entrenamiento de extinción. Este aumento es selectivo para el CS +, como entradas de puerto de la CS se mantienen inalterados. Además, las entradas de puerto a la CS + son estadísticamente elevada en comparación con entradas de puerto de la CS en el examen de renovación inducida contexto-(Figura 4). Confirmación estadística de las comparaciones de entradas de puerto CS + entre la extinción y prueba, así como comparaciones de CS + y CS-entradas de puerto dentro de prueba, indica una renovación selectiva de la conducta de búsqueda de alcohol-pavloviano acondicionado inducida por el contexto alcohol asociado a prueba. <img alt="Figura 1" fo:content-width="4in" src="/files/ftp_upload/51898/51898fig1highres.jpg" width="400"> Figura 1 La escalada del consumo de etanol y la preferencia inducida por etanol acceso intermitente en la jaula. Media y# 177; SEM (A) el consumo de etanol (g / kg) y (B) de preferencia etanol a través de 12 sesiones de acceso etanol intermitente en la jaula hogar. Ambas medidas suelen aumentar a través de sesiones y luego se estabilizan. Consumo estable etanol promediado en las dos últimas sesiones de acceso etanol jaula oscilado 1,33-6,44 g / kg para las ratas individuales. Estos datos se obtuvieron utilizando ratas macho Long-Evans potable 15% (v / v) de etanol. <img alt="Figura 2" fo:content-width="4in" src="/files/ftp_upload/51898/51898fig2highres.jpg" width="400"> . Figura 2 un esquema del procedimiento experimental El procedimiento consta de tres fases: entrenamiento en discriminación pavloviano (PDT), la extinción, y la prueba de la renovación inducida contexto-. Durante cada sesión de TFD, las ratas reciben 16 ensayos de un estímulo condicionado auditivo (CS +) que señala la entrega de etanol y 16 ensayos deun segundo estímulo auditivo (CS) que no está asociado con la entrega de etanol. Sesiones de TFD se llevan a cabo en Contexto A, compuesto por una configuración específica de visual, olfativa, y los estímulos táctiles. Durante sesiones de extinción, que se realizan en el Contexto B, integrado por un conjunto diferente de los estímulos visuales, olfativos, táctiles y, el CS + y CS se presentan, pero el etanol no serán revelados. Para el examen de renovación inducida contexto, las ratas se volvieron a Contexto A, y el CS + y CS se presentan sin etanol. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/51898/51898fig2highres.jpg" target="_blank">Por favor haga clic aquí para ver una versión más grande de esta figura.</a> <img alt="Figura 3" fo:content-width="4in" src="/files/ftp_upload/51898/51898fig3highres.jpg" width="400"> Figura 3. Adquisición y extinción de discriminados-pavlovianas respuesta condicionada para el etanol. Media ± SEM entradas de puerto normalizado made durante el CS + y CS a través de PDT (sesiones de 1 - 18) en el Contexto A y extinción (sesiones 19 - 26) en el Contexto B. Estos datos se obtuvieron utilizando ratas Long-Evans machos, se entrenó con 10% (v / v) etanol como el estímulo incondicionado (EI) que fue presentada en asociación con el + CS durante la TFD. * P &lt;0,05, CS + CS frente. Figura publicado originalmente en Chaudhri, Sahuque, y Janak (2008). Usado con permiso de Elsevier. <img alt="Figura 4" fo:content-width="5in" src="/files/ftp_upload/51898/51898fig4highres.jpg" width="500"> Figura 4. renovación de ± SEM entradas-pavlovianas respuesta condicionada para el etanol. Media normalizada portuarias realizadas durante el CS + y CS en sesiones de TFD en Contexto A, sesiones de extinción en Contexto B, y la prueba de la renovación en el Contexto A. Los datos son inducidos Context- promedio durante las dos últimas sesiones de TFD y extinción; la prueba de la renovación es una sola sesión. Estoslos datos se obtuvieron usando ratas macho Long-Evans, formados con 10% (v / v) de etanol como el estímulo no condicionado (US), que fue presentada en asociación con el CS + durante la TFD. * P &lt;0,05; ** P &lt;0,001, CS + CS frente. #p &lt;0,05, CS + TFD frente al CS + extinción. ^ P &lt;0,05, CS + extinción frente a test CS +. Figura publicado originalmente en Chaudhri, Sahuque, y Janak (2008). Usado con permiso de Elsevier.

Un procedimiento para el estudio de la capacidad de un contexto ambiental de alcohol asociado a desencadenar la renovación de la conducta de búsqueda de alcohol en ratas se describe.

Un procedimiento para observar inducida Contexto-Renovación-pavloviano acondicionado Alcohol comportamiento de búsqueda en ratas

Environmental contexts in which drugs of abuse are consumed can trigger craving, a subjective Pavlovian-conditioned response that can facilitate ...

Este procedimiento examina la capacidad de un contexto asociado al alcohol para desencadenar la renovación del comportamiento pavloviano de búsqueda de alcohol. Esto se logra habituando primero a ratas experimentadas con etanol a cámaras de acondicionamiento que se han configurado en dos contextos únicos. El segundo paso del procedimiento es llevar a cabo sesiones de entrenamiento de discriminación pavloviana en un contexto donde dos señales auditivas diferentes señalan la disponibilidad de alcohol o la falta de ella.El tercer paso es llevar a cabo un entrenamiento sobre extinción. En el segundo contexto, donde ambas señales auditivas se presentan sin alcohol, el paso final es devolver a las ratas al contexto de entrenamiento original y presentar ambas señales auditivas sin alcohol. Esta manipulación provoca una renovación del comportamiento de búsqueda de alcohol desencadenado por la señal auditiva que anteriormente se asociaba con el alcohol.La principal ventaja de esta técnica sobre los procedimientos existentes, como el condicionamiento instrumental, es que proporciona un modelo animal de comportamiento de búsqueda de alcohol provocado por señales pavlovianas que predicen el alcohol. Este método puede ayudar a responder preguntas clave en el campo de la adicción, como si el contexto asociado con el alcohol provoca una recaída antes del entrenamiento, habitúe a las ratas a la sala de pruebas y a los dos contextos ambientales que experimentarán. Siempre transporte las ratas desde el centro de cuidado de animales hasta la sala de pruebas de manera constante.En la primera sesión, deje las ratas en la sala de pruebas durante 20 minutos con las luces de la habitación iluminadas y los ventiladores de los cubículos de atenuación de sonido encendidos después de 24 horas. Lleva a cabo la segunda sesión de habituación como la primera, pero ahora pesa y manipula cada rata. Realizar la tercera sesión 24 horas después.Para ello, configure cada cámara de acondicionamiento con una de las dos combinaciones distintivas de estímulos visuales olfativos y táctiles. Para proporcionar un contexto consistente, el estímulo olfativo debe ser el último estímulo contextual agregado a cada cámara. Para minimizar la mezcla de diferentes estímulos olfativos, cierre las puertas de las cámaras y el cubículo atenuador de sonido en el que se aloja cada cámara.Inmediatamente después de aplicar el estímulo olfativo para la tercera sesión, pesa cada rata y colócala en su cámara de acondicionamiento durante 20 minutos. La mitad de las ratas deben experimentar el contexto uno, y la otra mitad debe experimentar el contexto. Dos, para ayudar a mantener la necesidad vital de consistencia entre las ratas y sus cámaras, es útil marcar las ratas con un número que identifique una cámara específica.Un minuto después de que todas las ratas hayan sido colocadas en sus cámaras, ilumine la luz de la casa en las cámaras Durante los 20 minutos, registre todas las entradas de puertos de fluido realizadas por las ratas. Luego apague las luces, descargue las ratas y devuélvalas a su centro de atención. Más tarde, ese mismo día, lleva a cabo una cuarta sesión de habituación casi idéntica a la tercera, en la que se invierte el contexto de las cámaras de condicionamiento.Por último, después de cada sesión, lavar siempre las bandejas de residuos y los paneles del suelo de las cámaras de acondicionamiento y las placas de Petri en las que se aplicó el estímulo contextual olfativo. Use solo soluciones de limpieza sin perfume semanalmente. Limpie las cámaras en su totalidad para este entrenamiento.Divida las ratas en dos grupos con la misma ingesta promedio de etanol en sus últimas dos sesiones de acceso al etanol. Un grupo se entrena en el contexto uno y el otro se entrena en el contexto. Dos. El contexto utilizado para el entrenamiento de discriminación pavloviana se conoce como contexto A. Durante estas sesiones, las ratas aprenden a distinguir entre dos señales auditivas diferentes, una emparejada con etanol y otra que no lo es.Así que el primer paso es preparar jeringas de 20 mililitros con etanol. Para los puertos de fluido, conecte el tubo desde la parte posterior del puerto de fluido a la jeringa cargada. Con una aguja roma, cargue cada jeringa en su propia bomba fuera del cubículo de atenuación de sonido.A continuación, cebe el tubo haciendo avanzar manualmente la bomba y limpie el exceso de etanol del puerto de fluido. Ahora lleva las ratas a la sala de pruebas del laboratorio. Al igual que durante la habituación, pesa cada rata antes de colocarla en su cámara de acondicionamiento asignada.Asegúrese de verificar la configuración de contexto dentro de cada cámara y asegúrese de cargar la rata correcta en la cámara correcta. Una rata que ha sido expuesta al contexto equivocado o al CS plus equivocado puede tener que ser eliminada del estudio. Una vez que todas las ratas estén pesadas y cargadas, inicie el programa informático que controla los eventos de la sesión de entrenamiento.A los cinco minutos del programa, la luz de la casa en cada cámara se ilumina en cada sesión, se presentan 16 ráfagas de diez segundos de ruido blanco y 16 ráfagas de diez segundos de ruido de clic. Para cada rata, designe uno de estos estímulos auditivos para el etanol y contrarreste estas designaciones a través de los dos contextos de condicionamiento durante los últimos seis segundos de los Cs, además, la bomba suministra 0,2 mililitros de etanol al puerto de fluido. Establezca los estímulos en un horario de tiempo variable de 67 segundos para hacer una sesión de una hora.Registre todas las entradas del puerto de fluido a partir de 10 segundos antes de Cs, durante Cs y 10 segundos después de Cs. Además, registre el número total de entradas de puerto de fluido realizadas para toda la sesión de entrenamiento de discriminación pavloviana. Cuando termine la sesión, apague las luces de la casa y devuelva las ratas al centro de cuidado de animales en las cámaras de acondicionamiento.Revise los puertos de líquido para asegurarse de que las ratas consumieron los 3,2 mililitros de etanol suministrados durante la sesión. Recuerde revisar los puertos de fluido después de que las ratas se hayan retirado de las cámaras para asegurarse de que estén consumiendo el etanol, las ratas que no consumen el etanol y también muestran niveles bajos de entradas de puertos durante el CS plus pueden tener que ser eliminadas del estudio. Limpie las cámaras de acondicionamiento como de costumbre.Limpie el tubo enjuagándolo primero con agua y luego usando una jeringa vacía de 60 mililitros para hacer pasar el aire a través de él. Repita las sesiones diariamente hasta que las ratas discriminen entre los dos estímulos auditivos según lo indicado por las respuestas de entrada al puerto. Se anticipa un aumento selectivo en las entradas de puerto al CS plus que se estabiliza dentro de 16 a 20 sesiones.Para las sesiones de extinción. La cámara de acondicionamiento de cada rata debe configurarse con un contexto diferente al utilizado durante el entrenamiento de discriminación pavloviano. El contexto en el que se lleva a cabo la extinción se denomina Contexto B. Realice las sesiones de extinción exactamente igual que las sesiones de discriminación utilizando el mismo programa informático, pero no suministre etanol durante el CS Plus.Para mantener la consistencia, las bombas se cargan con jeringas vacías de 20 mililitros conectadas a la cámara mediante un tubo libre de etanol. Realizar las sesiones de extinción diariamente hasta que las ratas dejen de discriminar entre CS más y menos. Esto puede tomar alrededor de ocho sesiones como siempre, limpie el equipo según sea necesario antes de continuar con la prueba de renovación.Es vital que haya una reducción significativa en las entradas de puertos durante el CS plus al final del entrenamiento de extinción en comparación con el principio. La prueba de renovación inducida por el contexto utiliza la misma configuración de contexto de cámara que se utilizó durante el entrenamiento de discriminación pavloviana, que es un contexto diferente al del entrenamiento de extinción. Esta prueba de una sola sesión se realiza de manera idéntica a una sesión de entrenamiento de discriminación pavloviana, excepto que no se suministra etanol y las jeringas están vacías.Utilizar el mismo programa informático para presentar los estímulos auditivos. El resultado esperado es una renovación del comportamiento de búsqueda de alcohol que es selectivo para el CS, además de la limpieza del equipo al final de la prueba. Al igual que antes, cuando las ratas tuvieron acceso periódico e intermitente al etanol en sus jaulas domésticas, el consumo de etanol y la preferencia por el etanol aumentaron a niveles estables después de ocho a 12 sesiones de entrenamiento.Durante el entrenamiento de discriminación pavloviano, las respuestas de entrada al puerto al CS plus aumentaron a lo largo de las sesiones de entrenamiento, hubo un ligero aumento en la respuesta al CS menos, pero las ratas aprendieron a discriminar entre las dos señales auditivas durante el entrenamiento de extinción, las respuestas de entrada al puerto al CS plus disminuyeron gradualmente mientras que las respuestas al CS menos permanecieron bajas. Cuando las ratas fueron devueltas al contexto asociado con el entrenamiento de discriminación pavloviana, se produjo un aumento selectivo en las entradas de puertos durante el CS plus en relación con los resultados después del entrenamiento de extinción. Por el contrario, no hubo cambios en respuesta al CS menos.Estos resultados demuestran que el comportamiento de búsqueda de alcohol provocado por una señal discreta puede ser fuertemente modulado por el contexto ambiental. Al intentar este procedimiento, es importante que el investigador no use perfumes, colonias u otros productos perfumados. Las ratas son criaturas altamente olfativas y las señales olfativas asociadas con el investigador pueden ser disruptivas para el comportamiento en esta tarea Siguiendo este método, se pueden realizar otros procedimientos como micro infusiones intracraneales con el fin de responder preguntas adicionales como qué regiones cerebrales están involucradas.El contexto indujo la renovación de la búsqueda condicionada de alcohol pavloviana.

a-procedure-to-observe-context-induced-renewal-pavlovian-conditioned

Research

Investigación

JoVE Journal

Behavior

Comportamiento

Los modelos animales de recaída, conocidos como procedimientos de reintegro, se han utilizado ampliamente para estudiar el papel del estrés en la recaída en la búsqueda de drogas. Aquí, nos informe sobre un método para inducir el restablecimiento de la cocaína que buscan en ratas de laboratorio a través de las exposiciones agudas al estímulo eléctrico plantar leve, eléctrico intermitente.

Un procedimiento para el estudio de la reposición de estímulo eléctrico plantar inducido por la cocaína Buscando en ratas de laboratorio

Responder a las señales de alimentos o medicamentos por pares aumenta a lo largo de un período de abstinencia y esto puede relacionarse con una mayor susceptibilidad a las conductas recaída. Aquí detallamos un procedimiento para la evaluación de esta "incubación del deseo" en las ratas que se han auto-administrado sacarosa.

Un método general para la evaluación de incubación de sacarosa en ratas Deseo

Un procedimiento que permite una demostración del aumento robusto de búsqueda de drogas en ratas con restricción alimenticia se describe. Después del entrenamiento de auto-administración de heroína, las ratas pasan por un período de abstinencia, en un ambiente libre de drogas, durante los cuales son levemente comida restringida. Búsqueda de drogas se prueba a continuación, en el medio ambiente asociados con las drogas.

Un procedimiento para estudiar el efecto de la prolongada restricción de alimentos en heroína Buscando en ratas abstinentes

Este protocolo describe un nuevo y eficiente método para iniciar rápidamente operante de responder durante etanol en ratas que, contrariamente a los métodos estándar, no requiere privación de agua o sacarina / sacarosa desvanecimiento para iniciar de responder.

Un método para evaluar las propiedades reforzantes de etanol en ratas sin privación de agua, la sacarina o el desvanecimiento de Formación Extended Access

Aquí, presentamos un protocolo para provocar el comportamiento de enfoque condicionado pavloviano en ratas. Este procedimiento se puede utilizar para medir las diferencias individuales en la tendencia a abordar y atribuir prominencia de incentivos a las señales relacionadas con la recompensa e investigar la vulnerabilidad a la adicción.

Pavloviano Formación Enfoque acondicionado en ratas

Condicionamiento de clásico de rastro eyeblink (ECC) se utilizó para evaluar aprendizaje dependiente de hipocampo en ratas adultas que fueron administrados a una alta concentración (11,9% v/v) de alcohol durante el desarrollo temprano del cerebro neonatal. En general, los procedimientos ECC son sonidas herramientas de diagnóstico para detectar disfunción cerebral a través de muchos contextos psicológicos y biomédicos.

El uso de condicionamiento de clásico de Eyeblink rastro para evaluar disfunción hipocampal en un modelo de rata de trastornos del espectro alcohólico Fetal

Este manuscrito describe un procedimiento de recuperación de memoria para desestabilizar recuerdos recompensa robusto y reescritura con contracondicionamiento antes de su restablecimiento.

Un procedimiento de recuperación basada en el Error de predicción para desestabilizar y reescribir recuerdos recompensa desadaptativas en bebedores peligrosos

Este protocolo describe la preferencia de lugar condicionada (CPP) como un modelo de recaída. Este procedimiento permite la medición de la recaída en animales de laboratorio, considerando el impacto de señales ambientales asociada a drogas como ansias y recaída en absteniéndose de adictos es actualmente el foco de los programas de tratamiento de abuso de drogas.

Reintegro de la búsqueda de drogas en ratones utilizando el paradigma de preferencia condicionada del lugar

Aquí, un protocolo de morfina acondicionado lugar preferencia (CPP) se describe a medida incubación de antojo en ratas.

Un protocolo de preferencia de lugar condicionada para medir la incubación de antojo en ratas

Se describe un procedimiento que demuestra una recaída aguda robusta inducida por la privación de alimentos a la búsqueda de heroína después de la abstinencia impuesta por el castigo. Se implementó con éxito un modelo de abstinencia impuesto por el castigo utilizando el programa de cadena de buscar y tomar para la autoadministración de heroína. Las pruebas de búsqueda de heroína se realizan después de 24 horas de estrés por privación de alimentos.

Un procedimiento para estudiar la recaída inducida por el estrés de la búsqueda de heroína después de la abstinencia impuesta por el castigo

Aprende a observar la renovación del comportamiento de búsqueda de alcohol pavloviano inducida por el contexto en ratas. Este método utiliza entrenamiento de discriminación auditiva y extinción para estudiar los mecanismos de recaída en adicción.

Un procedimiento para observar inducida Contexto-Renovación-pavloviano acondicionado Alcohol comportamiento de búsqueda en ratas (Video) | JoVE Journal

Un procedimiento para observar inducida Contexto-Renovación-pavloviano acondicionado Alcohol comportamiento de búsqueda en ratas

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