Técnicas de muestreo de sangre no terminal en los conejillos de Indias
11 de octubre de 2014
Aunque un modelo conocido, el conejillo de indias en la actualidad representa un nicho en las ciencias experimentales en animales y datos limitados está disponible en la ejecución de la mayoría de los procedimientos. Aquí presentamos cuatro enfoques diferentes para no terminal en las técnicas de muestreo de sangre in vivo, ya sea en cobayas conscientes o anestesiados.
El objetivo general de este video es ilustrar la metodología de cuatro técnicas diferentes de muestreo de sangre en conejillos de indias. Los procedimientos que se muestran no son terminales a menos que los volúmenes de muestra o el número de muestras excedan las pautas para la recolección de sangre. En animales de laboratorio, aquí vemos la causa de la vena osa lateral y la vena tarsiana.
La vena osa corre dorsal y lateralmente sobre la articulación tarsiana. Se debe tomar un máximo de tres muestras de cada pata trasera, y se pueden recolectar aproximadamente de 100 a 400 microlitros de sangre por muestra. El equipo necesario incluye una afeitadora eléctrica, un baño de agua tibia, una toalla limpia, un poco de algodón, un desinfectante como alcohol al 70%, agujas estériles, 21 tubos de recolección o más pequeños.
Y si el objetivo es medir la glucosa en sangre y el muestreador AccuCheck, la toma de muestras de sangre del cefeo o de la vena tarsiana se puede realizar en cobayas sin anestesia. El conejillo de indias es sujetado por un asistente capacitado y se debe usar una técnica séptica. El pelo que cubre la zona del tarso se afeita con una afeitadora eléctrica y la pata trasera se lava y calienta en un baño de agua tibia.
Además de limpiar la pierna, esto hace que las venas se dilaten y se hagan más visibles. La pata trasera se extiende y la estasis se logra aplicando una suave presión hacia abajo justo por encima de la rodilla, lo que permite que la vena se haga visible inmediatamente antes de la toma de muestras. El área afeitada se limpia con un desinfectante.
La vena se perfora con una aguja o una lanceta, y la sangre se puede recolectar en un tubo capilar o microtónico. Cuando se ha recogido la sangre, se alivia la estasis y se aplica una suave presión con un trozo de algodón Para facilitar la hemostasia, aquí se pueden ver las arterias y venas superficiales de la superficie dorsal de la oreja del conejillo de indias. Estos vasos se pueden utilizar para la toma de muestras de sangre cuando solo se requiere un volumen muy pequeño.
Un ejemplo podría ser para las mediciones de glucosa en sangre. El conejillo de indias se sujeta suavemente mientras deja la oreja accesible. El sitio de punción debe estar preparado sépticamente antes de la toma de muestras, pero no es necesario el afeitado.
Se puede aplicar una ligera presión en la base de la oreja para hacer que las venas sean más visibles. La vena se perfora con una aguja o una lanceta y la sangre se recoge en un tubo capilar o se analiza inmediatamente para determinar los niveles de glucosa en sangre mediante el sistema de muestras AccuCheck. Cuando se ha recogido la sangre, se debe aplicar una presión suave en el lugar de la punción para facilitar la hemostasia.
Esta imagen ilustra la posición del conejillo de indias para la toma de muestras de sangre yugular y la causa de la vena yugular. El procedimiento se realiza exclusivamente en un animal anestesiado. El equipo necesario incluye medicamentos para la anestesia y una afeitadora eléctrica, algodón, un desinfectante como un estetoscopio con alcohol al 70%, ungüento neutro para los ojos, jeringas de un mililitro, agujas estériles, generalmente 23 o 25.
La heparina Gorge y el EDTA se pueden utilizar para enjuagar las jeringas antes de la toma de muestras con el fin de evitar la coagulación. Existe una variedad de protocolos anestésicos para los conejillos de indias. En este caso, los animales se anestesian mediante anestesia equilibrada con una mezcla de seno y butif que se inyecta por vía subcutánea en el cuello.
Esta mezcla se puede diluir con solución salina para que la dosificación sea más precisa. Después de la inyección, el conejillo de indias debe devolverse a su jaula y dejarse en silencio. El efecto del entorno generalmente se observa después de aproximadamente 10 minutos y dura de 30 a 40 minutos antes del muestreo.
La profundidad de la anestesia se evalúa mediante la comprobación de reflejos y se administra un ungüento ocular neutro para proteger los ojos. La vena yugular se aborda con el conejillo de indias colocado boca arriba y las patas delanteras retraídas trimestralmente. Se afeita la zona y se prepara asépticamente, se palpa la clavícula y se inserta una aguja de 23 gorge montada en una jeringa de un mililitro aproximadamente un centímetro lateral a la línea media, justo craneodorsalmente a la clavícula.
La jeringa debe mantenerse en un ligero ángulo hacia arriba y medial. Tan pronto como se penetra en la piel, se aplica una ligera presión negativa a la jeringa, ya que la yugular está situada bastante superficialmente y la profundidad de inserción de alrededor de tres a cuatro milímetros es suficiente. Una vez recogida la muestra, libere la tensión de las patas delanteras y aplique una presión suave en el lado de la punción.
A continuación, el animal puede ser devuelto a una jaula de recuperación, pero debe ser monitoreado para asegurar la hemostasia y la recuperación de la anestesia. Cuando el conejillo de indias se recupera completamente de la anestesia, puede regresar a su corral. Las características anatómicas del conejillo de indias son ligeramente diferentes de las de otros modelos de roedores, y es necesario modular las técnicas de muestreo para adaptarse a las diferencias específicas de la especie y obtener muestras de calidad suficientes en el menor tiempo posible.
Tanto a largo como a corto plazo. In vivo, los estudios a menudo requieren muestras de sangre repetidas. La elección de la técnica debe considerarse cuidadosamente para reducir el estrés y el malestar y garantizar la supervivencia, así como el cumplimiento de los requisitos de tamaño de la muestra y accesibilidad.
Todos los métodos descritos han sido probados exhaustivamente y aplicados con éxito para la toma repetida de muestras de sangre in vivo. En los estudios realizados en nuestro centro de investigación, el conejillo de indias representa un nicho en las ciencias animales experimentales, pero se dispone de datos limitados sobre la ejecución de procedimientos básicos. En este artículo de video, hemos presentado cuatro enfoques diferentes para el muestreo de sangre in vivo no terminal en animales conscientes o anestesiados, siempre que los volúmenes de muestra y el número de muestras no excedan las pautas para la recolección de sangre en animales de laboratorio.
Estos procedimientos se recomiendan para su uso en conejillos de indias cuando se requieren muestras de sangre repetidas. En su protocolo de estudio.
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Resumen
Este video demuestra cuatro técnicas de muestreo de sangre no terminal en cobayas, tanto en estado consciente como anestesiado. Estos métodos son cruciales para los investigadores que trabajan con este organismo modelo, para el cual hay pocos datos procedimentales disponibles.
Componentes Clave del Estudio
Área de la ciencia
- Ciencias experimentales de los animales
- Técnicas veterinarias
- Metodologías de muestreo sanguíneo
Antecedentes
- Los cobayos son un modelo poco común en la investigación experimental.
- Existe poca información sobre los procedimientos de muestreo sanguíneo en esta especie.
- Las técnicas no terminales son esenciales para las prácticas éticas de investigación.
- Comprender las pautas de recolección de sangre es fundamental para el bienestar animal.
Objetivo del estudio
- Ilustrar técnicas seguras y efectivas de muestreo sanguíneo.
- Proporcionar pautas sobre los volúmenes máximos de muestra y la frecuencia.
- Ampliar la base de conocimientos para investigadores que utilizan cobayas.
Métodos Utilizados
- Demostración del muestreo de la vena lateral auricular y de la vena tarsal.
- Uso de equipos específicos, como agujas estériles y tubos de recolección.
- Directrices sobre el volumen máximo de sangre por muestra.
- Procedimientos para animales tanto conscientes como anestesiados.
Resultados Principales
- Demostración exitosa de cuatro técnicas de muestreo de sangre.
- Establecimiento de límites seguros de volumen de muestra.
- Instrucciones claras sobre el equipo y la preparación necesarios.
- Énfasis en las consideraciones éticas en la recolección de sangre.
Conclusiones
- Las técnicas presentadas son fundamentales para la investigación que involucra conejillos de Indias.
- La capacitación adecuada y el cumplimiento de las directrices garantizan el bienestar animal.
- Investigaciones futuras pueden ampliar estas metodologías.
Preguntas frecuentes
Relevancia Ejecutiva para la Industria
El muestreo de sangre no terminal en cobayas permite estudios longitudinales in vivo al facilitar la recolección repetida de muestras de alta calidad, manteniendo al mismo tiempo el bienestar animal. Esta capacidad es fundamental para evaluaciones preclínicas de farmacocinética y farmacodinamia, en las que el muestreo seriado proporciona información sobre la interacción con el objetivo y la reducción de riesgos mecanicistas. Las técnicas abordan una brecha metodológica en un modelo especializado pero clínicamente relevante, mejorando la fiabilidad de los datos en flujos de trabajo de descubrimiento temprano.
Aplicaciones Estratégicas en I+D de Biotecnología Farmacéutica
Descubrimiento Temprano y Validación de Blancos
- Valor científico: Permite la comprobación de hipótesis mediante la medición seriada de biomarcadores in vivo.
- Valor operativo: Proporciona acceso reproducible a datos de exposición sistémica para estudios de modulación de dianas.
- Valor predictivo: Facilita la caracterización de la relación dosis-respuesta y el fortalecimiento de la confianza en la diana.
Desarrollo de Pruebas y Tamizaje
- Valor científico: Genera muestras cuantificables de plasma o suero para lecturas de ensayos.
- Valor operativo: Estandariza el momento y manejo de la recolección de muestras en campañas de cribado.
- Preparación para ensayos: Asegura un volumen y calidad suficientes para flujos de trabajo analíticos posteriores.
Investigación Traductiva y Preclínica
- Continuidad Translacional: Conecta la validación del blanco en fase de descubrimiento con el perfilado preclínico de seguridad.
- Reducción de Riesgos: Disminuye la variabilidad en las métricas de exposición mediante muestreos estandarizados.
- Relevancia del Modelo: Aprovecha las similitudes fisiológicas entre el cobayo y el ser humano para una desvinculación predictiva de riesgos.
Integración de la canalización y flujo de trabajo
Estos métodos de muestreo se integran en los flujos de trabajo de biología de descubrimiento al proporcionar matrices biológicas confiables para el análisis de vías diana y la evaluación de compuestos líderes.
- Biología del Descubrimiento: Facilita la aclaración de vías mediante la medición seriada de marcadores farmacodinámicos.
- Selección: Permite la evaluación consistente de compuestos mediante la adquisición estandarizada y repetible de muestras.
- Análisis: Proporciona resultados cuantificables (por ejemplo, concentración, niveles de biomarcadores) para el análisis comparativo de condiciones.
- Investigación Traducional: Asegura la continuidad hacia estudios preclínicos mediante el mantenimiento de la integridad de las muestras y el cumplimiento ético.
- Reutilización Empresarial: Establece una capacidad reutilizable para estudios longitudinales con cobayas en diversos proyectos.
Impacto Operativo y Empresarial
- Valor científico: Aumenta la confianza predictiva mediante la reducción de la variabilidad inducida por el muestreo y los artefactos de estrés.
- Valor operativo: Mejora la estandarización y escalabilidad del muestreo in vivo entre diferentes instalaciones.
- Valor estratégico: Mejora la calidad de las decisiones de avance o interrupción al proporcionar datos longitudinales confiables.
- Impacto en la cartera: Permite la priorización ajustada al riesgo basada en métricas consistentes de interacción con el objetivo.
Consideraciones de Implementación
- Requiere capacitación en técnica aséptica y manejo de animales para procedimientos conscientes o anestesiados.
- Depende de equipos como afeitadoras eléctricas, baños de calentamiento y herramientas estériles de recolección.
- Necesita el cumplimiento de las directrices específicas por especie sobre el volumen sanguíneo (máximo 100–400 µL/muestra, ≤3 muestras/pata trasera).
- Incluye consideraciones de adaptación respecto a la accesibilidad de la vena según la cepa, la edad o el estado de salud del animal.
- Comprende limitaciones prácticas como las dificultades de visibilidad en animales pigmentados u obesos y la necesidad de habilidad por parte del operador para prevenir hematomas.
