Ensayo sencillo para cuantificación de Prevención Social en Drosophila melanogaster

El objetivo de este procedimiento es cuantificar la respuesta de las moscas a la señal social emitida por individuos estresados. Esto se logra primero recolectando, respondiendo y emitiendo moscas no más de dos días antes del experimento. El segundo paso consiste en transferir las moscas emisoras y respondedoras a viales nuevos dos horas antes del experimento y dejar que se habitúen a la sala con control ambiental donde se realizará el ensayo.

A continuación, las moscas respondedoras se colocan en los TMA y se les da a elegir entre un vial en el que las moscas han sido estresadas previamente, conteniendo así el odorante de estrés de Drosophila y un vial nuevo, el paso final es contar el número de moscas respondedoras en el vial fresco en el vial DSO y en el elevador para cuantificar su respuesta al DSO. En última instancia, el laberinto T se utiliza para medir la evitación por parte de las moscas de una señal de estrés social, específicamente el odorante de estrés gilo. La primera vez que tuve la idea de este método fue cuando era un postdoctorado en Caltech.

En ese momento, Greg Sue y su asesor postdoctoral David Anderson, estaban estudiando el miedo o la evitación social en Phyla, pero no existía ningún ensayo para eso. Se acercaron a mí porque estaba realizando muchos ensayos de comportamiento en el laboratorio de S brands y, mientras realizaba experimentos de fototaxi y aprendizaje olfativo, me di cuenta de que las moscas se sentían atraídas por los viales en los que otras moscas habían pasado algún tiempo sin ser molestadas, mientras evitaban los viales en los que las moscas se habían estresado en ese momento con una descarga eléctrica. Obispo. La demostración de este método es fundamental, ya que el proceso experimental del ensayo de evitación social requiere cierta práctica para ser rápido y eficiente en la transferencia de las bios sin perder moscas o DSL.

La principal ventaja de esta técnica para examinar las interacciones sociales sobre los métodos existentes como el seguimiento de video asistido por computadora, es que este es un ensayo fácil de dominar e implementar, pero es muy poderoso para cuantificar la evitación social de los individuos estresados. Para comenzar el experimento, corta una lámina de polietileno poroso para cubrir una caja de 12,7 centímetros por 10,2 centímetros. Llene la caja con hielo picado y cúbrala con la sábana para completar el aparato de anestesia fría drosophia.

Realice el experimento en un banco cubierto con una cubierta de banco blanca y una pizarra blanca en el frente para garantizar condiciones de iluminación homogéneas. A continuación, prepare el aparato de los compañeros de equipo del aspirador de moscas de vórtice, el termómetro y el temporizador. Uno o dos días antes del experimento, anestesiar el colon de las moscas.

Transfiera las moscas con un embudo a un tubo de 50 mililitros y coloque el tubo en un cubo de hielo aislado bajo el nivel del hielo. Espera cinco minutos para que las moscas entren en coma. A continuación, transfiera las moscas a la lámina de polietileno poroso a temperatura ambiente y clasifique las moscas respondedoras bajo un microscopio estereoscópico.

Separe las moscas macho de tres a siete días de edad de las moscas hembra, y mantenga estas moscas en un grupo de 40 moscas emisoras de Cantón de sexo mixto que recojan suavemente. Con un aspirador bucal permita que las moscas. Una noche de recuperación para minimizar cualquier efecto de confusión de la colección en el comportamiento.

A continuación, abra la bolsa de viales de prueba para reemplazar el aire viciado que huele a plástico en la bolsa con aire fresco. Antes del experimento, asegúrese de que la temperatura de la sala de pruebas sea de 25 grados centígrados, que la habitación tenga luz uniforme y que la humedad sea superior al 30%Dos horas antes del experimento, transfiera las moscas respondedoras y emisoras a viales de alimentos frescos y permita que las moscas se adapten al entorno en el banco donde se realizará el experimento. Coloque el laberinto de té en la almohadilla de golpeo y apriete el clip de tornillo para que el ascensor esté estable.

A continuación, transfiera las moscas respondedoras a un vial de prueba nuevo y coloque el vial que contiene las moscas respondedoras en la parte superior del laberinto de té. Luego incline el aparato del laberinto de té y golpéelo en la alfombra de golpeteo para que las moscas de la fruta caigan en el ascensor. Mueva la parte superior del elevador hacia abajo para colocar las moscas entre las secciones superior e inferior de los TMA y asegúrese de que el elevador esté por encima del punto de elección para evitar que las moscas escapen mientras las moscas respondedoras se adaptan al nuevo entorno.

Coloque las moscas emisoras en un vial de prueba nuevo y cúbralo con un trozo de algodón. Agite el vial en un mini vórtice de esta manera. Las moscas emitirán DSO, transferirán las moscas a un vial de comida y colocarán rápidamente el vial lleno de DSO en uno de los dos lados del equipo.

A Alternar el lado de colocación para el vial lleno de DSO. En cada nueva ejecución, coloque un vial de prueba nuevo en el otro lado del equipo A y luego baje el elevador por completo para que las moscas de la fruta puedan elegir entre el vial de prueba nuevo y el vial lleno de DSO. Inicie inmediatamente el temporizador.

Después de un minuto, mueva el elevador hacia arriba para separar las moscas en el vial fresco y el vial DSO de las moscas atrapadas en el elevador. Cuente el número de moscas en cada vial y en el elevador. Repite esto.

Para cada genotipo y/o grupo de afección, el tamaño de las moscas respondedoras no influye en que eviten la DSO. Después de realizar el experimento en un rango de 10 a 80 moscas, una prueba T no mostró significación estadística entre los índices de rendimiento o PI de las moscas respondedoras. El número de moscas emisoras influye en la evitación de moscas de DSO, como se demuestra en este gráfico, que representa diferentes ensayos.

Usando de 10 a 160 emisores vuela cada uno. Aun así, se detectó una evitación sustancial con solo 10 moscas estresadas. La elección, el tiempo y los antecedentes genéticos de las moscas de la fruta afectan la respuesta a la DSO, como se muestra en este gráfico, que ilustra una respuesta de las cepas de Canton y Elwood.

Ambos genotipos muestran una mayor evitación de la DSO que Oregón y algunas cepas de markin después de su desarrollo. Esta técnica allanó el camino para que los investigadores en el campo de la neurociencia identificaran el circuito neurológico que subyace a la percepción y evitación del CO2, uno de los componentes del DSO. También se ha utilizado para estudiar el papel de los genes candidatos al autismo en la afectación del comportamiento social.

En José Ano Gaster. Una vez dominada, esta técnica se puede realizar en menos de cinco minutos por réplica. Después de ver este video, debe tener una buena comprensión de cómo realizar un ensayo de evitación social, desde la preparación de las moscas emisoras y respondedoras antes de probarlas hasta la generación de los bios de campo DSL y la manipulación de los compañeros de equipo para proporcionar a los respondedores una opción binaria.