El análisis in vitro de la respuesta inmune celular Myd88 mediada por el Virus del Nilo Occidental cepa mutante Infección

El objetivo general de este estudio es introducir dos ensayos inmunológicos basados en citometría de flujo para medir la respuesta inmunitaria mediada por células a la infección por el virus del Nilo Occidental en células dendríticas de ensayo de cebado de células T in vitro, o dcs purificadas a partir de ratones infectados con el virus West Nll. Un cocultivo con linfocitos T marcados con CFSE vírgenes purificados a partir de dos ratones transgénicos OT en presencia de péptido óvulo. A continuación, se analiza la respuesta a la proliferación de las células T mediante citometría de flujo en un laboratorio de nivel dos de bioseguridad en el ensayo de tinción de citocinas intracelulares modificado Citos PLE de ratones infectados con el virus del Nilo Occidental, A estimulado ex vivo con péptidos específicos del Nilo Occidental en un tubo de microcentrífuga y luego el sostén de la célula para la producción de citocinas intracelulares y se analiza en el tubo mediante citometría de flujo en el laboratorio de nivel dos de bioseguridad.

En última instancia, estos métodos se pueden utilizar para examinar el papel de vías de señalización específicas en la activación de células T en animales infectados por el virus del Nilo Occidental, y reducen significativamente el tiempo de rendimiento dentro de las instalaciones de nivel tres de bioseguridad. Aunque este método puede proporcionar información sobre la inmunidad celular del virus N occidental, también se puede aplicar a otros patógenos de nivel tres de bioseguridad para el ensayo de cebado de células T in vitro. Comience por aislar células dendríticas esplénicas de ratones salvajes tipo C 57 negro seis A, mis ratones D ocho ocho knockout inoculados con el virus del Nilo Occidental y controle los animales no infectados con perlas magnéticas anti CD 11 C de acuerdo con las instrucciones del fabricante.