Name: Nutriente Reglamento mediante la alimentación continua de expansión a gran escala de células de mamífero en esferoides (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2016-09-25T13:00:00.000+00:00
Duration: 11 min 1 s
Description: Aprenda a regular nutrientes en esferoides de células de mamífero mediante alimentación continua ajustada. Este método mejora las tasas de crecimiento y distribución uniforme en biorreactores de suspensión agitada.

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Los autores agradecen a Michael Garwood y Sam Stein por sus útiles comentarios, y a Kristen M. Maynard por su ayuda con la preparación del manuscrito.

Los autores no tienen nada que revelar.

Generación de productos de células de mamíferos para la producción de agentes biológicos y para las terapias con células requiere la cultura y el seguimiento de las células de mamífero en gran escala 55-58. Además, estas aplicaciones requieren condiciones de cultivo definidas y validadas. Simplemente aumentando el volumen de las células utilizando tecnologías de investigación no va a cumplir con todos estos requisitos. cambios de medio manuales que causan fluctuaciones en nutrientes y la...

Con el fin de generar un gran número de células humanas viables y funcionales para el trasplante, la regulación de las condiciones de cultivo es imprescindible. El agotamiento de nutrientes, junto con la acumulación de residuos metabólicos son los principales contribuyentes a los cambios de senescencia y metabólicos que reducen la calidad del producto de células 1-3. Este procedimiento demuestra un método para células de mamíferos de cultivo en esferoides utilizando un biorreactor agitado en combinación con un sistema de alimentación de perfusión tasa ajustada para regular la glucosa en un rango fisiológico 4 durante toda la duración del cultivo. Para los fines de estos estudios, el intervalo fisiológico se definió como entre 100 y 200 mg / dl. Los mismos métodos se pueden utilizar para regular otros nutrientes y residuos metabólicos, tales como lactato. cultivos estáticos en pequeños volúmenes (1 - 30 ml) se utilizan normalmente en el entorno de laboratorio para mantener y diferenciar líneas celulares para EXPERIMENTAL propósitos. pases de células se lleva a cabo con los cambios de medio completo, según sea necesario, a intervalos regulares. La mayor parte de medio de cultivo &quot;convencional&quot; tiene una alta concentración de glucosa (450 mg / dl en DMEM utilizado en estos estudios) para permitir cambios de medio de menos frecuentes, sin el riesgo de limitaciones de nutrientes. Sin embargo, este método por lotes de alimentación de aún requiere una manipulación frecuente, introduce variabilidad en el medio ambiente celular, y aumenta el riesgo de contaminación 5-9. Biorreactores suspensión agitada (SSB) proporcionan una mejor mezcla y la disminución de gastos de envío de 3,10 - 20, pero al igual que cultivos estáticos, requieren cambios manuales medianas que contribuyen a las fluctuaciones en los niveles potencialmente dañinos de productos de nutrientes y desechos. alimentación de la perfusión de las culturas SSB reduce estos problemas mediante la infusión continua y la eliminación del medio, pero los grandes cambios en los niveles de nutrientes debido al crecimiento de las células siguen siendo un problema. El uso de un RA de alimentación ajustadate de los cálculos de utilización de nutrientes sobre la base de los requisitos de células estimado puede proporcionar el entorno celular estable requerido para optimizar la viabilidad celular y la función 21 - 24. Hay una gran cantidad de literatura que describe métodos para cultivos escalables SSB de células de mamíferos específicamente para el cultivo y expansión de células pluripotentes 25 - 32, con otros se centraron en las células de los islotes 17,33,34 (beta), o la producción de productos biológicos 24, 35-38. Muchos de estos tipos de células investigadas pueden crecer en cultivos de esferoides, y procedimientos específicos para el tipo de célula que se utiliza debe ser optimizado antes de implementar un sistema de alimentación continua. En esta demostración, se utilizó un método de alimentación de perfusión para expandir una línea de células beta crecido como esferoides en un biorreactor agitado 39-43. El método descrito en este documento proporciona unala aplicación directa de la alimentación de los ajustes del tipo basado en las mediciones de glucosa fuera de línea para lograr condiciones de cultivo específicas. Ajuste de la velocidad de alimentación con este método para mantener un nivel de glucosa fisiológica se muestra a los rendimientos celulares aumenta. Las células de mamíferos son dependientes de un nutriente clave, glucosa, para la producción de energía, por lo que el uso de esta línea celular representa un modelo para muchas células de mamífero en cultivo 44. Además, esta línea es un ejemplo de la mayor complejidad de las células beta, que son sensibles a los niveles crónicos elevados de glucosa 45. Para este estudio, se dejó que las células ß-TC6 para formar esferoides en cultivo para aproximar el tamaño medio de los islotes de Langerhans in vivo. El sistema de biorreactor de perfusión 17 - 19,21,46 con una velocidad de alimentación ajustada a la glucosa consumo, se tradujo en el mantenimiento de condiciones fisiológicas y los rendimientos celulares más altas sin cambios en la viabilidad.

<table><tbody><tr><td>&#946; Células TC-6</td><td>ATCC, Manassas, VA</td><td>CRL-11506</td><td>Línea celular de insulinoma de ratón (tipo de célula adherente)</td></tr><tr><td>DPBS No Ca, No Mg</td><td>Invitrogen, Carlsbad, CA</td><td>14190-144</td><td><a href="https://www.lifetechnologies.com/order/catalog/product/14190144? ICID=search-14190144">https://www.lifetechnologies.com/order/catalog/product/14190144? ICID=search-14190144</a></td></tr><tr><td>Dulbecco's Modified Eagles Medium</td><td>Invitrogen, Carlsbad, CA</td><td></td><td>Consulte a continuación los números de producto&nbsp;</td></tr><tr><td>DMEM Alta glucosa (500 mM)</td><td>Invitrogen, Carlsbad, CA</td><td>11965-092</td><td><a href="http://www.lifetechnologies.com/order/catalog/product/11965092">http://www.lifetechnologies.com/order/catalog/product/11965092</a></td></tr><tr><td>DMEM baja glucosa (100 mM)</td><td>Invitrogen, Carlsbad, CA</td><td>11885-084</td><td><a href="http://www.lifetechnologies.com/order/catalog/product/11885084%20(note%20that%20this%20medium%20already%20contains%20pyruvate)">http://www.lifetechnologies.com/order/catalog/product/11885084 (note que este medio ya contiene piruvato)</a></td></tr><tr><td>L-glutamine</td><td>Invitrogen, Carlsbad, CA</td><td>25030081</td><td><a href="http://www.lifetechnologies.com/order/catalog/product/25030081? ICID=producto-de-búsqueda">http://www.lifetechnologies.com/order/catalog/product/25030081? ICID=producto-de-búsqueda</a></td></tr><tr><td>Piruvato de sodio</td><td>Invitrogen, Carlsbad, CA</td><td>11360070</td><td><a href="https://www.lifetechnologies.com/order/catalog/product/11360070? ICID=producto-de-búsqueda">https://www.lifetechnologies.com/order/catalog/product/11360070? ICID=search-product</a></td></tr><tr><td>Heat Inactivated Porcine</td><td>Serum Gibco - Life Technologies</td><td>10082147</td><td><a href="http://www.lifetechnologies.com/order/catalog/product/10082147">http://www.lifetechnologies.com/order/catalog/product/10082147</a></td></tr><tr><td>Trypsin-EDTA</td><td>Invitrogen, Carlsbad, CA</td><td>25200056</td><td><a href="https://www.lifetechnologies.com/order/catalog/product/25200056? ICID=producto-de-búsqueda">https://www.lifetechnologies.com/order/catalog/product/25200056? ICID=search-product</a></td></tr><tr><td>T-150 Matraces tratados con cultivo de tejidos</td><td>Corning, Corning, NY</td><td></td><td>430825 http://catalog2.corning.com/LifeSciences/en-US/Shopping/ProductDetails.aspx?productid=430825(Ciencias de la vida) & categoryname=</td></tr><tr><td>NuAire Incubadora de cultivos celulares</td><td>Princeton, MN</td><td></td><td>US Autoflow. Se puede utilizar cualquier incubadora de cultivo celular reguladora de CO2 con camisa de agua.</td></tr><tr><td>Centrífuga</td><td></td><td></td><td>Sorvall RT 7 (Se puede utilizar cualquier centrífuga de sobremesa similar)</td></tr><tr><td>Refrigerador</td><td></td><td></td><td>Se puede utilizar cualquier refrigerador de laboratorio (se utilizó una versión pequeña de mesa para estos estudios)</td></tr><tr><td>1 L Botella de vidrio</td><td>Corning, Corning, NY</td><td>1395-1L</td><td>Se puede utilizar cualquier proveedor. http://catalog2.corning.com/LifeSciences/en-US/Shopping/ProductDetails.aspx?productid=1395-1L(Ciencias de la vida) & categoryname=</td></tr><tr><td>Botella de vidrio de 2 L Corning</td><td>, Corning, NY</td><td>1395-2L</td><td>Cualquier proveedor podría utilizar</td></tr><tr><td>250 ml de biorreactores agitados&nbsp;</td><td>Corning, Corning, NY</td><td>4500-250</td><td>http://catalog2.corning.com/LifeSciences/en-US/Shopping/ProductDetails.aspx?productid=4500-250(Ciencias de la vida) & categoryname=</td></tr><tr><td>Placa de agitación</td><td>Fisher Scientific</td><td>11-496-104A</td><td>Se puede utilizar cualquier placa de agitación segura para incubadora, cualquier proveedor</td></tr><tr><td>de placas de cultivo de tejidos de 100 mm de diámetro</td><td>Nunc, Rochester, NY (Fisher Scientific)</td><td>1256598&nbsp;</td><td>Se puede utilizar cualquier proveedor (pedido a través de Fisher Sci)</td></tr><tr><td>FALCON 50 ml Tubos Cónicos</td><td>Falcon, San José, CA</td><td>1256598</td><td>Se puede utilizar cualquier proveedor</td></tr><tr><td>Delran Plástico utilizado para piezas personalizadas</td><td>McMaster Carr</td><td>Varios</td><td>Se puede utilizar cualquier material de elección, pero se elige Deran porque es seguro para autoclave, no reactivo y fácil de mecanizar. http://www.mcmaster.com/#acetal-homopolymer-sheets/=rjrcac</td></tr><tr><td>Tubo de acero inoxidable para tapas personalizadas</td><td>McMaster Carr</td><td>Varios</td><td>Se puede utilizar cualquier proveedor. http://www.mcmaster.com/#standard-stainless-steel-tubing/=rjrd91</td></tr><tr><td>Tapas de biorreactores Delran modificadas a medida para alimentación continua</td><td>Hecho</td><td></td> a medida <td>No conozco ningún proveedor que produzca un producto similar</td></tr><tr><td>Tapas de botellas de vidrio modificadas a medida para alimentación continua</td><td>Hecho</td><td></td> a medida <td>Algunos proveedores (e.g., Fischer Sci, Corning) fabrican productos similares en los enlaces a continuación.</td></tr><tr><td>Bomba peristáltica digital Masterflex Cole</td><td>Parmer, Vernon Hills, IL</td><td>EW-77919-25</td><td>Se puede utilizar cualquier bomba peristáltica de precisión. http://www.coleparmer.com/Product/L_S_Eight_Channel_Four_Roller_ Cartridge_Pump_System_115_230 _VAC/EW-77919-25</td></tr><tr><td>Conectores de tubería de PVDF (varios)</td><td>Cole Parmer, Vernon Hills, IL</td><td>ver enlace</td><td>Se puede utilizar cualquier proveedor. http://www.coleparmer.com/Category/Cole_Parmer_PVDF_Premium _Luer_Fittings/55889</td></tr><tr><td>Tubería BPT de Pistón L / S 16</td><td>Cole Parmer, Vernon Hills, IL</td><td>WU-06508-16</td><td>Se puede utilizar cualquier proveedor. http://www.coleparmer.com/Product/Masterflex_PharMed_BPT_Tubing _L_S_13_25/WU-06508-16</td></tr><tr><td>Tubería BPT de Cáñamo L/S 14</td><td>Cole Parmer, Vernon Hills, IL</td><td>WU-06508-14</td><td>Se puede utilizar cualquier proveedor. http://www.coleparmer.com/Product/Masterflex_PharMed_BPT_Tubing _L_S_13_25/WU-06508-14</td></tr><tr><td>Tubería BPT de Pistón Laminado L/S 13</td><td>Cole Parmer, Vernon Hills, IL</td><td>WU-06508-13</td><td>Se puede utilizar cualquier proveedor. http://www.coleparmer.com/Product/Masterflex_PharMed_BPT_Tubing _L_S_13_25/ WU-06508-13</td></tr><tr><td>Millipore Millex GP MEMBRANA PES 0.22 &#181; l filtro de jeringa estéril (utilizado para ventilación y filtración media)</td><td>Fisher Scientific</td><td>SLGP033RS</td><td>Se puede utilizar cualquier proveedor Pipeta</td></tr><tr><td>graduada de 25 ml</td><td>Fisher Scientific</td><td>13-678-11</td><td>Se puede utilizar cualquier proveedor, y se pueden utilizar varios tamaños</td></tr><tr><td>Pipeta</td><td>Fisher Scientific</td><td>13-681-15E</td><td>Se puede utilizar cualquier proveedor o producto similar</td></tr><tr><td>Hemocitómetro</td><td>Fisher Scientific</td><td>02-671-6</td><td>Se puede utilizar cualquier proveedor, o producto similar</td></tr><tr><td>Trypan Blue</td><td>Gibco - Life Technologies</td><td>15250-061</td><td>Se puede utilizar cualquier proveedor, o producto similar. https://www.lifetechnologies.com/order/catalog/product/15250061</td></tr><tr><td>Microscopio de luz invertida</td><td>Leica</td><td></td><td>Se puede utilizar cualquier proveedor o producto similar</td></tr><tr><td>Medidor de glucosa en sangre One Touch Ultra Fisher</td><td>Scientific</td><td>22-029-293</td><td>Se puede utilizar cualquier proveedor o producto similar (p. ej., Bayer)</td></tr><tr><td>One Touch Ultra-Strips</td><td>Fisher Scientific</td><td>22-029-292&nbsp;</td><td>Se puede utilizar cualquier proveedor o producto similar (p. ej., Bayer)</td></tr></tbody></table>

nutriente reglamento mediante la alimentación continua de expansión a gran escala de células de mamífero en esferoides

Nutrient Regulation by Continuous Feeding for Large-scale Expansion of Mammalian Cells in Spheroids

En esta demostración, se cultivaron esferoides formados a partir de la línea celular de insulinoma β-TC6 como modelo de fabricación de un producto de células de islotes de mamíferos para demostrar cómo la regulación de los niveles de nutrientes puede mejorar el rendimiento celular. En estudios anteriores, los biorreactores facilitaron el aumento de los volúmenes de cultivo en comparación con los cultivos estáticos, pero no se observó un aumento en el rendimiento celular. Las limitaciones en nutrientes clave como la glucosa, que se consumieron entre las alimentaciones por lotes, pueden conducir a limitaciones en la expansión celular. Se observaron grandes fluctuaciones en los niveles de glucosa, a pesar del aumento de las concentraciones de glucosa en los medios. El uso de sistemas de alimentación continua eliminó las fluctuaciones en los niveles de glucosa y mejoró las tasas de crecimiento celular en comparación con los métodos de cultivo estáticos y SSB alimentados por lotes. Se observaron aumentos adicionales en las tasas de crecimiento al ajustar la tasa de alimentación en función del consumo de nutrientes calculado, lo que permitió el mantenimiento de la glucosa fisiológica durante tres semanas en cultivo. Este método también se puede adaptar para otros tipos de células.

Niveles de glucosa del medio y las fluctuaciones de restringir la expansión de la célula en la norma SSB culturas Los niveles de glucosa fluctúan en cultivos estáticos y culturas SSB durante todo el periodo de cultivo de 3. Estas fluctuaciones se intensifican a medida que aumenta el número de células durante el periodo de cultivo de 21 días y fueron casi idénticos en ambos cultivos estáticos y SSB. Estas observaciones se presentan en nuestra publicación anterior <...

La regulación de nutrientes mediante la alimentación ajustada al crecimiento continuo mejora las tasas de crecimiento de los esferoides de células de mamíferos en comparación con la alimentación intermitente por lotes para cultivos en biorreactores de suspensión agitada. Este estudio demuestra los métodos necesarios para establecer cultivos alimentados con tasa ajustada simple.

Nutriente Reglamento mediante la alimentación continua de expansión a gran escala de células de mamífero en esferoides

In this demonstration, spheroids formed from the &#946;-TC6 insulinoma cell line were cultured as a model of manufacturing a mammalian islet cell product ...

El objetivo general de este proceso es cultivar un gran número de células en condiciones controladas de nutrientes. Utilizando equipos convencionales que se encuentran en un laboratorio de cultivo celular. Los algoritmos asociados permiten el control y la manipulación de nutrientes dentro de rangos experimentales.Este método puede ayudar a responder preguntas clave para aplicaciones de cultivo celular a gran escala. Como las terapias celulares humanas. La principal ventaja de esta técnica es que permite el cultivo de células a gran escala con una distribución uniforme de nutrientes y gases.Esto permite densidades celulares más altas que los cultivos celulares estáticos o alimentados a granel, aumenta el rendimiento y reduce la pérdida de células. Esto se puede hacer con equipos que se encuentran comúnmente en la mayoría de los laboratorios de cultivo celular. La demostración visual de este método puede ser útil para los nuevos investigadores, ya que estas técnicas utilizadas pueden ser difíciles de dominar, debido a la gran cantidad de pasos que deben realizarse en un orden específico en condiciones estériles.Reúna los cinco componentes principales necesarios para el sistema de alimentación. Un depósito mediano, una bomba peristáltica, un biorreactor agitado, un depósito de residuos y un conjunto de muestreo de tuberías diseñado a medida. Establezca el depósito medio con una botella de vidrio de un litro.El depósito de residuos mediante una botella de vidrio de dos litros. El biorreactor agitado utiliza un reactor de vidrio de 250 ml de volumen. Utilice una bomba peristáltica digital o una bomba similar con un cabezal de bomba de ocho canales para controlar el intercambio de medios.Ensamble el depósito y las tapas del biorreactor modificado de plástico duro y esterilizable en autoclave. Con puertos de paso de tubería de acero inoxidable para proporcionar ventilación a través de filtros estériles y permitir la transferencia de medios entre depósitos y biorreactores. Conecte un tubo de salida fabricado a partir de tubos de aireación de vidrio poroso a la tapa del biorreactor de suspensión agitada modificada.Ensamble juegos de tubos de perfusión esterilizables en autoclave a partir de conectores de tubos de fluoruro de polivinilideno y tubos de bomba peristáltica duraderos. La longitud de la sección depende de la distancia entre los diferentes componentes. Ensamble la línea de alimentación utilizando dos diámetros de tubo.Utilice L/S 14 para la tubería primaria que abarcará la distancia desde el biorreactor hasta el depósito de medio. Inserte una longitud de tubo L/S 13 en el centro de la longitud del tubo para la sección de la bomba, utilizando los adaptadores de PVDF adecuados. Utilice adaptadores de tubería de púas de manguera de PVDF estándar para unir dos piezas de tubería L/S 14 a cada lado de la tubería de sección de bomba más corta.Ensamble la sección de la tubería para la eliminación de desechos utilizando una tubería L/S 16 de mayor diámetro e inserte una sección corta de tubería L/S 14 en el medio para la sección de bombeo. Esto se hace de la misma manera que el montaje de la línea de alimentación mediante adaptadores de púas de manguera de PVDF. Ensamble el componente final del juego de tubos construyendo el juego a partir de tres longitudes de tubería cortas L/S 14.Conectados entre sí con un conector HVDF tipo T y dos pequeñas abrazaderas de manguera en dos de las longitudes de tubería. Conecte el conjunto de muestras al conector de muestras de acero inoxidable adjunto en la tapa del biorreactor. Después de la esterilización, se conectará un filtro de gas estéril para la ventilación del gas a una de las longitudes sujetas.El otro se utiliza para la conexión a una jeringa de muestreo estéril. Esterilizar en autoclave el conjunto de muestreo mientras está conectado al biorreactor, antes de comenzar el experimento como se describe en el protocolo de texto. Utilice este conjunto para recolectar muestras estériles del biorreactor según sea necesario, sin perturbar el proceso de alimentación continua.Coloque los respiraderos estériles en las ubicaciones apropiadas en las tapas del matraz giratorio, el recipiente mediano, los recipientes de desechos y los puertos de muestras. Cultive y recoja las células como se describe en el protocolo de texto. Deje que las células se incuben a temperatura ambiente en tripsina durante dos o tres minutos en un gabinete de bioseguridad y luego recójalas en un tubo cónico.A continuación, se recoge una pequeña muestra de células y se tiñe con azul de tripán. Cuente la densidad celular usando un microscopio y un hemocitómetro estándar con tinción con azul de tripán como se describe en el protocolo de texto. Agregue el número deseado de células totales a los biorreactores de suspensión agitados estériles para cada condición.Añada el medio al biorreactor de suspensión agitado con una pipeta para alcanzar el volumen total de cultivo deseado. Mueva el biorreactor de suspensión agitada con células a una placa de agitación dentro de una incubadora de cultivos celulares. Cultivo de células en los biorreactores sin alimentación durante tres días a 37 grados centígrados, con 5% de dióxido de carbono, 100% de humedad relativa y una tasa de agitación de 70 rpm para permitir la formación de esferoides.Después de la formación del esferoide, retire el biorreactor de suspensión agitado de la incubadora. Ensamble los componentes para el sistema de alimentación continua en un gabinete de seguridad biológica. Primero llene un depósito de medio fresco con el medio de cultivo deseado y luego conéctelo a un lado de la línea de alimentación.Asegúrese también de que el depósito de medio fresco esté correctamente ventilado con un filtro estéril. Se debe reemplazar un filtro estéril en el puerto de entrada del biorreactor para filtrar el medio antes de que ingrese al biorreactor. Conecte la línea de desagüe al depósito de residuos mediano y asegúrese de que el depósito de residuos esté correctamente ventilado con un filtro estéril.Coloque el biorreactor de suspensión agitado en la placa de agitación dentro de la incubadora utilizando los mismos parámetros de cultivo que para la formación de esferoides. Coloque el depósito de medio fresco dentro de un minirefrigerador cercano. Asegúrese de que las líneas de alimentación puedan salir del refrigerador sin impedir que las puertas se cierren.También es fundamental que las líneas de alimentación no queden cerradas por las puertas del refrigerador o de la incubadora. El depósito de medio residual se puede colocar en la mesa de trabajo fuera de la incubadora en una ubicación conveniente. Pase los extremos de los tubos restantes a la incubadora y conecte la línea de alimentación al filtro en el puerto de entrada del biorreactor.A continuación, conecte la línea de desagüe al puerto del tubo de salida. A continuación, coloque la sección de la bomba de las líneas de alimentación y residuos en el cabezal de la bomba, asegurándose de la orientación adecuada para que las líneas de alimentación bombeen el medio desde el depósito de medio fresco hasta el biorreactor de suspensión agitado, y las líneas de residuos bombeen el medio desde el biorreactor hasta el depósito del medio de desecho. Calcule la velocidad de alimentación utilizando la ecuación de velocidad de alimentación ajustada como se describe en el protocolo de texto.Utilice la muestra más reciente con información de recuento de células, junto con la predicción de la tasa de crecimiento y las mediciones de glucosa en el medio para estimar la velocidad de alimentación necesaria para mantener la concentración de glucosa deseada en el cultivo. Ajuste la velocidad de la bomba en función de la velocidad de alimentación calculada. Repita el cálculo de la velocidad de alimentación y ajuste la velocidad de la bomba para cada punto de muestreo.Las mediciones de glucosa en medio se muestran a partir de cultivos de esferoides de insulinoma Beta-TC6 utilizando biorreactores de suspensión agitados estáticos y métodos de cultivo de biorreactores de suspensión agitada alimentados continuamente. Alimentación con medio estándar de alta glucosa. La alimentación continua es capaz de eliminar las fluctuaciones de glucosa, pero los niveles medios de glucosa en el medio cambian drásticamente durante el período de cultivo y están muy por encima del rango fisiológico.La alimentación ajustada es capaz de eliminar las fluctuaciones, así como de mantener las concentraciones de glucosa cerca de los niveles fisiológicos durante todo el período de cultivo. Aquí, se compara el crecimiento celular reportado como un cambio de pliegue en el número de células durante el período de cultivo de 21 días para biorreactores de suspensión agitada con cambios regulares de medio, cultivos de biorreactores de suspensión agitados con velocidad de alimentación constante y cultivos de biorreactores de suspensión agitada con velocidad de alimentación ajustada. Siguiendo este procedimiento, se pueden elaborar otros métodos, como la variación de condiciones, para responder a preguntas adicionales, como los requisitos de nutrientes para nuevas líneas celulares o resultados experimentales específicos.Después de su desarrollo, esta técnica allanó el camino para que los investigadores en el campo de la biología celular exploraran los requisitos metabólicos en células de humanos con cáncer u otros trastornos. Después de ver este video, debe tener una buena comprensión de cómo ensamblar un sistema de cultivo celular de profusión para controlar mejor las condiciones de cultivo y maximizar el rendimiento celular. No olvide que trabajar con células humanas puede ser extremadamente peligroso, y siempre se deben tomar precauciones como la protección contra patógenos transmitidos por la sangre al realizar este procedimiento.

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Bioingeniería

Los esferoides son un tipo de modelo de cultivo celular en 3D que se utiliza para representar con mayor precisión el entorno de una célula en comparación con los modelos monocapa de cultivo celular en 2D. En el protocolo de ejemplo, veremos a los científicos generar esferoides a partir de una línea celular de cáncer colorrectal y aplicar imágenes de células vivas para rastrear el crecimiento de los esferoides.

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Aquí, describimos un protocolo rápido y flexible para la formación de esferoides celulares 3D a través de la agregación celular. Se adapta fácilmente a múltiples tipos de células y es adecuado para su uso en una variedad de aplicaciones, incluidos los ensayos de migración celular, invasión o anoikis, y para obtener imágenes y cuantificar las interacciones célula-matriz.

Un método de agregación celular eficiente y flexible para esferoide 3D Producción

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Generación de células epiteliales nasales humanas esferoides para estudio de regulador de conductancia de la transmembrana individualizada la Fibrosis quística

Aquí presentamos un método que combina el uso del borrado epigenético químico con señales relacionadas con la mecanodetección para generar eficientemente células pluripotentes de mamíferos, sin necesidad de transfección génica o vectores retrovirales. Esta estrategia es, por lo tanto, prometedora para la medicina traslacional y representa un avance notable en la tecnología de organoides de células madre.

Una estrategia de dos pasos que combina la modificación epigenética y las señales biomecánicas para generar células pluripotentes de mamíferos

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Un modelo tridimensional de esferoides para estudiar las células madre del cáncer de colon

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