Los métodos para la comparación de Nutrientes en jalea real Realizado por africanizadas y europeas Honey Bees y los efectos sobre títulos hemolinfa de proteínas

El objetivo general del siguiente experimento es cuantificar los nutrientes en el polen y el pan de abeja, elaborados por dos subespecies de abejas melíferas, y medir el consumo de títulos de proteínas. Esto se logra presentando a las abejas europeas y africanas la misma fuente de polen en un área confinada y permitiendo que las abejas almacenen el polen en sus colonias como pan de abeja. A continuación, el pan de abeja se alimenta a las abejas europeas y africanas recién emergidas en jaulas.

Luego, se toman muestras de las abejas en las jaulas después de cuatro, siete y 11 días de alimentación, y se mide la cantidad de pan de abeja que queda en cada jaula para estimar el consumo. Por último, se mide y compara la concentración de nutrientes, incluidas proteínas y aminoácidos en el polen y el pan de abeja elaborado por abejas europeas y africanizadas, y se compara entre las razas de abejas. Los resultados muestran que el pan de abeja difiere del polen en las concentraciones de proteínas y algunos aminoácidos, así como en los títulos de proteínas de la hemolinfa.

Este método puede ayudar a responder preguntas clave en los estudios de nutrición de las abejas melíferas, como el papel de la fuente de polen en los nutrientes del pan de abeja y cómo las abejas de diferentes subespecies y genotipos adquieren esos nutrientes. Para empezar, después de colocar trampas de polen en las colonias de abejas melíferas, recoja el polen, use un molinillo de café para moler el polen hasta convertirlo en un polvo fino, establezca cinco colonias, cada una de abejas melíferas africanas o una HB y abejas melíferas europeas, o EHB en un área de vuelo cerrada o EFA, de modo que las abejas se alimentan únicamente del polen proporcionado para evitar que las obreras se desplacen entre las colonias de EHB y A HB. Divida el AGE en secciones separadas para que las abejas no puedan cruzar entre ellas en cada sección del AGE. Coloque colonias individuales de EHB o HB con 3.500 a 4.000 abejas obreras, panal de cera con néctar, miel, cría inmadura y panal vacío alimenten con polen molido a las colonias colocando una bandeja en cada sección del AGE y esparciendo aproximadamente 60 gramos de polen en las bandejas.

De esta manera, las abejas forjadoras pueden recolectar el polen como cargas curriculares y almacenarlo en sus colonias como pan de abeja para alimentar a las abejas en jaulas. Coloque los marcos de la cría de obreras selladas de colonias HB y EHB en jaulas de emergencia separadas en una sala ambiental establecida entre 32 y 24 grados Celsius y 40% de humedad relativa. Cuando las obreras emergen en nuestras aproximadamente 24 horas de edad, se establecen 12 jaulas de bioensayo de plexiglás y se agregan 100 abejas obreras EHB recién emergidas o una HB a cada jaula, se coloca una sección de panal con un número conocido de pan bbr europeo o EBB o pan B africanizado o células A, B, B en cada jaula para generar las siguientes condiciones de tratamiento.

A HB alimentado por A-B-B-E-H-B alimentado por A B, BAHB Fed EBB y EHB Fed. EBB añade viales de agua y una solución de sacarosa al 30% formulada por volumen a cada jaula. Reemplace el jarabe de azúcar y los viales de agua diariamente durante el período de estudio de 11 días.

Muestra 10, trabajadores EHB recién emergidos y A HB antes de colocarlos en las jaulas. Refiérase a estos como B del día cero y haga que sirvan como referencia para las concentraciones de proteínas de la hemolinfa. Retire 10 abejas de cada jaula después de que se hayan alimentado de EBB o B, B durante cuatro, siete y 11 días.

Coloque las abejas vivas en tubos de halcón individuales y colóquelas en bolsas de hielo. Seleccione la submuestra de cuatro abejas para el análisis de la concentración de proteína de hemolinfa después de muestrear abejas en el día 11, cuente el número de celdas de panal que aún contienen pan de abeja. Retire el pan de abeja restante de las celdas de cada jaula y guárdelo en tubos de microcentrífuga separados por jaula.

Mantenga las muestras de BBR a menos 80 grados centígrados hasta que se analice el pH, la concentración de proteínas solubles y el contenido de aminoácidos. Para llevar a cabo el análisis de proteínas, tome seis muestras de polen y una muestra de EBB y A BB de cada jaula. Mezcle 20 miligramos de polen o bbr con un mililitro de vórtice PBS de 0,1 molar para mezclar durante 10 segundos y centrifugar a 571,2 g durante un minuto.

Retire una muestra de 25 microlitros del sobrenadante S y colóquela en un pocillo de una placa de poliestireno E-I-A-R-I-A de fondo plano de 96 pocillos. Repita cada muestra en tres pocillos. Caliente el extremo de un tubo capilar de 20 microlitros y tire de la sección calentada hasta que se forme una punta en forma de aguja.

A continuación, extraiga la hemolinfa de las abejas recogidas de cada jaula insertando el tubo capilar en la parte lateral derecha del tórax cerca del punto de unión del ala. Recoja linfa adicional si es necesario insertando el mismo tubo en la membrana entre las guías de la turis del abdomen. Añadir un microlitro de hemolinfa a nueve microlitros de PBS 0,1 molar.

Utilice un kit de ensayo de proteínas Bradford y siga las instrucciones del fabricante para determinar la proteína soluble total. Realizado el análisis de las concentraciones de aminoácidos según el protocolo de texto como se muestra en estos gráficos, tanto el valor de pH como la concentración de proteína fueron menores en bbr que en polen. Tanto el EHB como el A HB consumieron más A BB que EBB, como se demuestra aquí.

Los niveles de proteína soluble en la hemolinfa de A HB fueron significativamente más altos que los de EHB, independientemente del tipo de bbr que consumieron. Estas diferencias en los niveles de proteína de la hemolinfa ocurrieron a pesar de que EHB y A HB consumieron cantidades similares de cada tipo de bbr. De los 10 aminoácidos que eran esenciales para las abejas melíferas, todos menos la histamina se detectaron en el polen.

En la mayoría de los casos, las concentraciones de aminoácidos medidas en el pan de abeja fueron más altas que en el polen. Por ejemplo, las concentraciones de leucina y tionina fueron aproximadamente un 60% más altas en bbr en comparación con el polen y las concentraciones de valina fueron aproximadamente un 25% más altas. Los niveles de alanina y ácido aspártico glutamina también fueron más altos en el bbr que en el polen.

Las concentraciones de aminoácidos no difieren mucho entre A, B, B y EBB, con la excepción de la fenilalanina y la cistina. Los niveles de fenilalanina fueron aproximadamente dos veces más altos en A BB en comparación con EBB o polen. Las concentraciones de cistina fueron más bajas en la EBB en comparación con A, B, B o polen.

Después de ver este video, debería tener una buena comprensión de cómo evaluar las concentraciones de proteínas en el pan de abeja, el polen y la hemolinfa de abejas melíferas. Con estas técnicas, se puede determinar si el almacenamiento y el consumo de alimentos y las concentraciones de proteínas de la hemolinfa se ven afectadas por factores genéticos o ambientales.