Las pruebas para detectar olor Discriminación y habituación en ratones

El objetivo general de este procedimiento es proporcionar un método para investigar la capacidad de los ratones para detectar, habituarse y deshabituarse frente a olores novedosos y sociales. Esto se logra primero preparando una serie de olores novedosos no sociales, como extractos a base de frutas y frutos secos, y olores sociales, como el lecho de la jaula. El segundo paso consiste en presentar los olores a los ratones, comenzando con tres olores novedosos y seguidos por dos olores sociales diferentes.

En cada ensayo, se evalúa y registra el comportamiento de olfateo de los ratones. En última instancia, la prueba de olfacción para la detección, discriminación y habituación al olor se utiliza para demostrar que el animal puede responder a un olor novedoso, puede habituarse al olor y luego demostrar la capacidad de deshabituarse ante la presentación de otro olor novedoso o un olor social. Este método puede utilizarse para responder preguntas clave en el campo de la neurociencia, como si el animal no responde a un animal novedoso o a un estímulo novedoso porque es incapaz de detectar el olor.

Comience a preparar los olores no sociales colocándose guantes y llenando tres tubos cónicos de 15 mililitros con 10 mililitros de agua. Añada con pipeta 100 microlitros de extracto de almendra en el primer tubo, 100 microlitros de extracto de plátano en el segundo tubo, y deje el tercer tubo solo con agua para usarlo como control. A continuación, obtenga dos jaulas diferentes de ratones que no hayan sido limpiadas durante al menos tres días y que contengan igual número de ratones del mismo sexo que los sujetos de prueba.

Utilice un hisopo de algodón para limpiar la parte inferior de la jaula sucia de forma zigzagueante. Sacuda cualquier material de cama adherido al hisopo y colóquelo con el extremo con algodón hacia abajo en un frasco de vidrio grande con tapa hermética. Repita este procedimiento hasta obtener tres hisopos de ambas jaulas para cada ratón que se vaya a probar.

Guarde los frascos a temperatura ambiente y utilice los hisopos dentro de las cuatro a seis horas siguientes. Para mantener un olor fuerte y constante, traslade las jaulas de la muestra de olor a una habitación fuera del área de pruebas el día del experimento. No use fragancias perfumadas ni lociones y evite comer cualquier alimento con olor fuerte.

Coloque los olores sociales y no sociales preparados en la sala de pruebas, junto con hisopos de algodón nuevos, cinta de laboratorio, un frasco de desecho con tapa y dos temporizadores inmediatamente antes del procedimiento de prueba. Póngase guantes limpios y pese al primer ratón. Luego, transfiera el ratón a una jaula limpia con tapa de alambre y sin botella de agua.

Coloque la jaula en un área sin olores ni ruidos inusuales y permita que el ratón se aclimate a la nueva jaula durante 45 minutos. Al final del período de aclimatación, traslade al ratón en su jaula al área de prueba e inicie la aclimatación de otro ratón. Coloque al ratón ya aclimatado en su jaula sobre el mostrador a una altura cómoda para observarlo cuando se esté sentado.

A continuación, prepare uno de los olores en el orden descrito en el protocolo escrito para los olores no sociales, aplicando 100 microlitros del aroma en la punta de un hisopo nuevo. Hágalo inmediatamente antes de usarlo. Para los olores sociales, retire y utilice uno de los hisopos previamente preparados de sus frascos respectivos.

Levante la parte superior de alambre de la jaula e inserte el extremo sin olor del hisopo de algodón en la abertura del frasco de agua desde la parte inferior de la tapa de alambre. Evite tocar la punta de algodón con cualquier superficie, incluyendo los dedos, para prevenir contaminación por olores. Cuando quede aproximadamente una pulgada del hisopo con olor dentro de la jaula, sujete el extremo de madera del hisopo a la parte inferior de la jaula utilizando cinta adhesiva de laboratorio.

Luego, baje suavemente la tapa de nuevo sobre la jaula. Para evitar molestar al ratón de prueba, comience inmediatamente a cronometrar durante dos minutos. Utilizando el primer cronómetro junto con el segundo reloj, registre el tiempo acumulado que el ratón de prueba pasa olfateando el olor.

Se define como olfateo activo cuando el ratón orienta su nariz hacia el hisopo de algodón mientras se encuentra a menos de dos centímetros del mismo. Cuando finalice el ensayo, levante la tapa de alambre y retire cuidadosamente el hisopo de algodón jalándolo hacia abajo a través del lado inferior de la tapa. Para evitar que el extremo del hisopo que contiene el olor haga contacto con la tapa, selle el hisopo usado en el frasco de desecho y, mientras el ratón descansa durante un minuto, prepare el siguiente hisopo donante.

Presente cada aroma tres veces seguidas durante dos minutos. Cuando se completen todos los ensayos, deseche el frasco de desecho que contiene los hisopos usados en un bote de basura ubicado fuera de la sala de pruebas y devuelva al ratón a su jaula de origen. Cada uno de los odorantes se presentó primero a ratones con fondo genético C 57 black six J, con presentaciones sucesivas de cada odorante.

Los ratones pasaron menos tiempo investigando el olor que sugería habitación. El mismo patrón de habitación y discriminación puede observarse con los olores sociales, al igual que con los olores no sociales. Sin embargo, los ratones pasaron más tiempo investigando los olores sociales.

Cuando se presentaron los mismos olores no sociales a un macho de la cepa FVB de fondo mixto, se observó un patrón similar de habituación. Cada nuevo olor introducido provocó un aumento en el olfateo activo, que disminuyó con cada presentación del mismo olor. Sin embargo, los ratones FVB mostraron un patrón diferente con los olores sociales, ya que no hubo una disminución significativa en el tiempo dedicado al olfateo con exposiciones repetidas.

Los datos sugieren que los ratones no se habitúan a las presentaciones repetidas de los dos olores sociales. Después de ver este video, debería tener una buena comprensión de cómo evaluar la capacidad de un ratón para detectar un olor nuevo o social, habituarse a ese olor y luego deshabituarse cuando se presenta un olor nuevo.