Name: Sincronización de Caulobacter crescentus Para la Investigación del Ciclo Celular Bacteriana (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2015-04-08T15:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 2 s
Description: Aprende a sincronizar Caulobacter crescentus mediante centrifugación por densidad diferencial para estudios del ciclo celular bacteriano. Este protocolo permite aislar células nadadoras para ensayos bioquímicos y microscopía.

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Los autores agradecen a los miembros del laboratorio de Shapiro y a Erin Schrader por sus comentarios sobre el manuscrito. Los autores agradecen el apoyo financiero de: la beca postdoctoral de los NIH F32 GM100732 a JMS y las subvenciones de los NIH R01 GM51426 y R01 GM32506 a LS.

1. Sincronía a gran escala - óptimo para el Western Blot, Microarray / RNA-Seq, y otros ensayos intensivos de materiales <ol><li> De una acción congelador o una placa, crecer un 5 ml O / N de la cultura NA1000 cepa por agitación a 28 ° C en medio PYE. </li><li> Inocular 0,5 ml de las células de la etapa 1 en 25 ml de M2G (Tablas 1-2) y agitar a 28 ° C hasta que el cultivo alcanza una OD 600 entre 0,5 y 0,6. </li><li> Se inoculan las células en 1 l de M2G y agitar a 28 ° C. </li><li> Una vez DO600 alcanza de 0,5 a 0,6, confirmar la presencia de swarmer células utilizando microscopía fase líquida montada. Punto 1 l de células sobre un portaobjetos de vidrio, cubierta con una hoja de la cubierta, y la imagen por microscopía de fase. Confirmar la presencia de células swarmer mediante la visualización de las células que nadan rápidamente en la población. </li><li> Girar las células durante 15 min a 7 kxg a 4 ° C en un rotor JA-10. </li><li> Descartar el sobrenadante y añadir 180 ml de frío M2 (Tablas 1-2) y cosa suavementeuspend todas las células utilizando una pipeta serológica. Deseche células poco granuladas; que son las células predivisional y acechado. </li><li> Añadir 60 ml de solución de sílice coloidal frío (asegúrese de mezclar la suspensión de sílice coloidal bien antes de añadir a las células) y mezclar bien la suspensión celular. </li><li> Verter la suspensión de células en ocho tubos de 30 ml y centrifugar durante 30 min a 6,4 kxg a 4 ° C en un rotor JA-20. NOTA: Hay que ver a dos bandas distintas; la banda swarmer es la banda más baja mientras acechadas células / predivisional están en la banda superior (Figura 1B). </li><li> Aspirar con cuidado la banda superior y retire el líquido a ~ 1 cm por encima de la banda swarmer (la banda inferior). </li><li> (Crítica) Con una pipeta Pasteur, retire con cuidado la banda swarmer y colocar en un tubo limpio. Para lavar la sílice coloidal, parte superior del tubo con frío M2 y centrifugado durante 10 minutos a 6,4 kxg a 4 ° C en un rotor JA-20. </li><li> Desechar cuidadosamente el sobrenadante y resuspender ellas células en 20 ml de frío M2 y centrifugado durante 10 minutos a 6,4 kxg a 4 ° C en un rotor JA-20. </li><li> Resuspender todas las pastillas en 30 ml de frío M2 y medir la OD 600 usando un espectrofotómetro y en blanco utilizando medio M2 frío. Guardar 1 l para la imagen de fase para comprobar swarmer células; 90-95% de las células debería ser enjambres. </li><li> Centrifugar las células durante 5 minutos a 6,4 kxg a 4 ° C en un rotor JA-20. Resuspender las células en 28 ° C M2G medio de modo que el A 600 es de ~ 0,3-0,4 y comenzar agitación a 28 ° C. NOTA: Los rendimientos típicos son entre 30 y 60 ml de swarmer cultivo celular de 1 litro de células no sincronizadas. </li><li> Comience a tomar los puntos de tiempo (la cultura de tipo salvaje tomará aproximadamente 135-140 minutos para dividir) 8,9. En cada punto de tiempo, medir el OD 600. Compruebe que el OD 600 después de la división es de aproximadamente 2 veces la DO inicial 600. </li><li> Para ensayos de transferencia o de expresión génica occidentales, retirar alícuotas de 1 ml de la culture en los tiempos deseados, de girar a velocidad máxima en una centrífuga de mesa durante 30 segundos, rápidamente decantar o aspirar el medio, y el flash congelar el sedimento de células en nitrógeno líquido. Guarde las células a -80 ° C hasta el análisis de aguas abajo. </li></ol> 2. Sincronía pequeña escala - Óptimo para Microscopía <ol><li> De una acción congelador o una placa, crecer un cultivo de 5 ml O / N agitación a 28 ° C en M2G. </li><li> Diluir en 15 ml de M2G (Tablas 1-2) y crecer hasta mediados de log (OD 600 = 0,5 a 0,6). </li><li> Giran a 6,4 kxg durante 10 min a 4 ° C en un rotor JA-20, y se vuelve a suspender en 1 ml M2 frías (Tablas 1-2) y transferir a un tubo de microcentrífuga de 2 ml. </li><li> Giran a 15 kxg durante 3 min en un tubo de microcentrífuga para sedimentar las células, aspirar el sobrenadante, el sedimento se puso en hielo, y resuspender en 900 l de frío M2. </li><li> Añadir 900 l de PVP frío recubierto de sílice coloidal y centrifugado durante 20 minutos a 15 kxg a 4 ° C en un microtubo rocentrifuge. </li><li> (Crítica) Aspirar o una pipeta de la parte superior de banda celular acechado / predivisional y recoger la parte inferior swarmer banda en un nuevo tubo de microcentrífuga. </li><li> Lavar las células dos veces en swarmer 1 ml de frío, mientras que M2 centrifugación a 15 kxg durante 3 min. </li><li> Antes de que el centrifugado final, mover las células en un tubo de ensayo de vidrio de 1 ml pre-enfriada y medir la OD 600 de las células en comparación con un blanco de M2. </li><li> Resuspender el precipitado celular final a 28 ° C M2G a una DO entre 0,3 a 0,4 y agitar células / rollo a 28 ° C. NOTA: Los rendimientos típicos son entre 2 y 4 ml de cultivo celular swarmer. </li><li> Para los experimentos de microscopía, a la deseada puntos temporales lugar 1 l de células sobre una almohadilla de agarosa M2G para la imagen. </li></ol>

<ol><li>McAdams, H. H., Shapiro, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((System-level+design+of+bacterial+cell+cycle+control%5BTitle%5D)+AND+%22FEBS+Lett%22%5BJournal%5D)">System-level design of bacterial cell cycle control.</a> FEBS Lett. 583, 3984-3991 (2009).</li>
<li>McAdams, H. H., Shapiro, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+architecture+and+conservation+pattern+of+whole-cell+control+circuitry%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Mol.+Biol%22%5BJournal%5D)">The architecture and conservation pattern of whole-cell control circuitry.</a> J. Mol. Biol. 409, 28-35 (2011).</li>
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<li>Quon, K. C., Yang, B., Domian, I. J., Shapiro, L., Marczynski, G. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Negative+control+of+bacterial+DNA+replication+by+a+cell+cycle+regulatory+protein+that+binds+at+the+chromosome+origin%5BTitle%5D)+AND+%22Proc.+Natl.+Acad.+Sci.+U.+S.+A%22%5BJournal%5D)">Negative control of bacterial DNA replication by a cell cycle regulatory protein that binds at the chromosome origin.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U. S. A. 95, 120-125 (1998).</li>
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<li>Quon, K. C., Marczynski, G. T., Shapiro, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cell+cycle+control+by+an+essential+bacterial+two-component+signal+transduction+protein%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">Cell cycle control by an essential bacterial two-component signal transduction protein.</a> Cell. 84, 83-93 (1996).</li>
<li>Ferullo, D. J., Cooper, D. L., Moore, H. R., Lovett, S. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cell+cycle+synchronization+of+Escherichia+coli+using+the+stringent+response%2C+with+fluorescence+labeling+assays+for+DNA+content+and+replication%5BTitle%5D)+AND+%22Methods%22%5BJournal%5D)">Cell cycle synchronization of Escherichia coli using the stringent response, with fluorescence labeling assays for DNA content and replication.</a> Methods. 48, 8-13 (2009).</li>
<li>Degnen, S. T., Newton, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chromosome+replication+during+development+in+Caulobacter+crescentus%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Mol.+Biol%22%5BJournal%5D)">Chromosome replication during development in Caulobacter crescentus.</a> J. Mol. Biol. 64, 671-680 (1972).</li>
<li>Bates, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+Escherichia+coli+baby+cell+column%3A+a+novel+cell+synchronization+method+provides+new+insight+into+the+bacterial+cell+cycle%5BTitle%5D)+AND+%22Mol.+Microbiol%22%5BJournal%5D)">The Escherichia coli baby cell column: a novel cell synchronization method provides new insight into the bacterial cell cycle.</a> Mol. Microbiol. 57, 380-391 (2005).</li>
<li>Abel, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Bi-modal+distribution+of+the+second+messenger+c-di-GMP+controls+cell+fate+and+asymmetry+during+the+caulobacter+cell+cycle%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+Genet%22%5BJournal%5D)">Bi-modal distribution of the second messenger c-di-GMP controls cell fate and asymmetry during the caulobacter cell cycle.</a> PLoS Genet. 9, e1003744(2013).</li>
<li>Johnson, R. C., Ely, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Isolation+of+spontaneously+derived+mutants+of+Caulobacter+crescentus%5BTitle%5D)+AND+%22Genetics%22%5BJournal%5D)">Isolation of spontaneously derived mutants of Caulobacter crescentus.</a> Genetics. 86, 25-32 (1977).</li>
<li>Britos, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Regulatory+response+to+carbon+starvation+in+Caulobacter+crescentus%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Regulatory response to carbon starvation in Caulobacter crescentus.</a> PLoS One. 6, e18179(2011).</li>
<li>Boutte, C. C., Crosson, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+complex+logic+of+stringent+response+regulation+in+Caulobacter+crescentus%3A+starvation+signalling+in+an+oligotrophic+environment%5BTitle%5D)+AND+%22Mol.+Microbiol%22%5BJournal%5D)">The complex logic of stringent response regulation in Caulobacter crescentus: starvation signalling in an oligotrophic environment.</a> Mol. Microbiol. 80, 695-714 (2011).</li>
</ol>

Los autores no tienen nada que revelar.

El ciclo celular bacteriano es un proceso fundamental en la vida y es importante para el estudio del crecimiento y como objetivo de los antibióticos de próxima generación. Aquí, detallamos los procedimientos de sincronización rápida para C. crescentus NA1000, un organismo modelo para el estudio del ciclo celular bacteriano y la división celular asimétrica. Este método se puede modificar a western blot, perfiles de expresión génica y ensayos de microscopía de fluorescencia para investigar la regulación espaciote...

El ciclo celular bacteriana controla tanto la replicación del genoma y la división de las células hijas. Es importante destacar que, como la resistencia a los antibióticos es una amenaza creciente para la salud pública, el ciclo celular bacteriana presenta un objetivo sin explotar para el desarrollo de antibióticos. En la bacteria Caulobacter crescentus, cada ciclo celular conduce a una división asimétrica, produciendo dos células hijas de diferentes destinos (Figura 1A) 1,2. Una célula hija hereda un flagelo y es móvil, mientras que la otra hija hereda un tallo y es sésiles. Un circuito genético integrado controla la progresión del ciclo celular y destino celular mediante la regulación transcripcional, fosfo-señalización, y proteólisis regulada 3. Además, la replicación de cromosomas y células hijas rendimiento segregación concurrentes que contienen exactamente una copia del cromosoma 4. Es importante destacar que estos dos tipos de células se pueden separar rápidamente por colloidal partícula de sílice centrifugación de densidad en la cepa NA1000 sincronizable 5-7 permitiendo el aislamiento de las células swarmer del resto de la población con altos rendimientos (Figura 1B). Aislado swarmer células luego proceder de forma sincrónica a través de la división celular asimétrica. Aquí, detallamos el protocolo utilizado para sincronizar Caulobacter cepa NA1000. Proporcionamos protocolos y sugerencias para solucionar problemas comunes para ambos de gran y pequeña escala sincronizaciones. Este procedimiento experimental proporciona una poderosa herramienta para interrogar el control espacio-temporal del ciclo celular Caulobacter y destino celular.

<table><tbody><tr><td>Sílice coloidal recubierta de PVP (Percoll)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>P4937</td><td></td></tr><tr><td>Sílice coloidal (Ludox AS-40)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>420840</td><td></td></tr><tr><td>Rotor JA10</td><td>Beckman-Coulter</td><td>369687</td><td></td></tr><tr><td>Rotor JA20</td><td>Beckman-Coulter</td><td>334831</td><td></td></tr><tr><td>solución de quelato de sulfato ferroso</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>F0518</td><td></td></tr><tr><td>Tubos de centrífuga de 30 ml</td><td>Corning</td><td>8445</td><td></td></tr><tr><td>Na2HPO4</td><td>EMD</td><td>SX0720-1</td><td></td></tr><tr><td>KH2PO4</td><td>VWR</td><td>BDH9268-500G</td><td></td></tr><tr><td>NH4Cl</td><td>Amresco</td><td>0621-500g</td><td></td></tr></tbody></table>

sincronización de<em&gt; caulobacter crescentus</em&gt; para la investigación del ciclo celular bacteriana

Synchronization of Caulobacter Crescentus for Investigation of the Bacterial Cell Cycle

El ciclo celular es importante para el crecimiento, la replicación del genoma y el desarrollo en todas las células. En las bacterias, los estudios del ciclo celular se han centrado en gran medida en células no sincronizadas, lo que dificulta el orden de los eventos temporales necesarios para la progresión del ciclo celular, la replicación del genoma y la división. Caulobacter crescentus proporciona un excelente sistema modelo para el ciclo celular bacteriano mediante el cual las células pueden sincronizarse rápidamente en un estado G0 mediante centrifugación por densidad. Los experimentos de sincronización del ciclo celular se han utilizado para establecer los eventos moleculares que gobiernan la replicación y segregación de cromosomas, para mapear una red reguladora genética que controla la progresión del ciclo celular y para identificar el establecimiento de complejos de señalización polar necesarios para la división celular asimétrica. Aquí proporcionamos un protocolo detallado para la sincronización rápida de las células Caulobacter NA1000. La sincronización se puede realizar en un formato a gran escala para el perfil de expresión génica y los ensayos de Western blot, así como en un formato a pequeña escala para los ensayos de microscopía o FACS. La rápida sincronizabilidad y el alto rendimiento celular de Caulobacter hacen de este organismo un poderoso sistema modelo para estudios del ciclo celular bacteriano.

Sincronización típicamente produce dos bandas de células (Figura 1B): la banda swarmer, que tiene una densidad más alta, y una banda de células tallo / predivisional de menor densidad. Para asegurar los controles comunes de sincronización eficiente incluyen la supervisión de la OD 600 y la medición de los niveles de proteína CtrA por Western blot en momentos distintos del ciclo celular. La OD 600 debería aumentar en aproximadamente 2 veces durante el curso del ciclo celular <strong...

La sincronización de las células bacterianas es esencial para los estudios del ciclo y desarrollo de las células bacterianas. Caulobacter crescentus es sincronizable a través de la centrifugación por densidad, lo que permite una herramienta rápida y potente para el estudio del ciclo celular bacteriano. Aquí proporcionamos un protocolo detallado para la sincronización de las células Caulobacter.

Sincronización de<em&gt; Caulobacter crescentus</em&gt; Para la Investigación del Ciclo Celular Bacteriana

The cell cycle is important for growth, genome replication, and development in all cells.  In bacteria, studies of the cell cycle have focused largely on ...

El objetivo general de este procedimiento es aislar células nadadoras de Coob backer con el fin de establecer un cultivo celular sincronizado. Esto se logra primero cultivando un cultivo mixto de células de Coob backer, y luego deteniendo brevemente el crecimiento mediante la suspensión de las células en medio frío. El segundo paso consiste en separar las células nadadoras mediante centrifugación diferencial de densidad. El siguiente paso consiste en resuspender las células de esporas en medio tibio, lo que permite que las células ingresen al ciclo celular. Finalmente, las células de esporas aisladas pueden seguirse a lo largo del ciclo celular mediante el uso de ensayos bioquímicos o microscopía. La principal ventaja de esta técnica frente a otros métodos, como la máquina de células hijas, es que las células pueden aislarse rápidamente y obtener cantidades suficientes para estudios bioquímicos.Este método puede ayudar a responder preguntas clave en el campo de la biología celular, como qué controla la segregación cromosómica y el ciclo de división celular asimétrica. Para comenzar, inocule cinco mililitros de medio PYE con bacterias procedentes de una placa de la cepa colo backer CSIS, NA 1000. Incube el cultivo durante la noche a 28 grados Celsius con agitación; al día siguiente, transfiera 0,5 mililitros del cultivo nocturno a un matraz que contenga 25 mililitros de medio M2G y agite el matraz a 28 grados Celsius hasta que el cultivo alcance una densidad óptica entre 0,5 y 0,6.A continuación, diluya el cultivo en un litro de medio M dos G para obtener la densidad óptica inicial deseada y agite el matraz a 28 grados Celsius. Cuando la densidad óptica del cultivo alcance 0,5, pipete un microlitro del cultivo sobre un portaobjetos y luego cubra el líquido con un cubreobjetos. Observe las células mediante microscopía de contraste de fase para confirmar la presencia de células en movimiento rápido. Transfiera el cultivo a un tubo de centrífuga estéril y luego centrifugue las células a 7.000 ×g durante 15 minutos a cuatro grados Celsius.A continuación, deseche las células ligeramente sedimentadas al verter el sobrenadante y agregue 180 mililitros de medio M dos frío. Utilice una pipeta serológica para resuspender suavemente las células. Luego, añada 60 mililitros de solución fría de sílice coloidal a la suspensión celular y mezcle bien.Vierta la suspensión celular en ocho tubos de 30 mililitros y centrifúgelos a 6.400 ×g durante 30 minutos. Ajuste a cuatro grados Celsius. Retire cuidadosamente los tubos del centrifugador y revise el tubo en busca de dos bandas distintas.La banda inferior contiene las células nadadoras y las células predivisorias se encuentran en la banda superior. A continuación, aspire cuidadosamente la banda superior y el líquido hasta aproximadamente un centímetro por encima de la banda inferior. Utilice una pipeta Pasteur para retirar la banda de nado y transfiérala a un tubo limpio.Llene el tubo con medio M dos frío y luego centrifugue el tubo para eliminar la sílice coloidal. A continuación, deseche cuidadosamente el sobrenadante y re suspenda las células en 20 mililitros de medio M dos frío y centrifugue nuevamente para obtener el sedimento celular. Vuelva a suspender los sedimentos en 30 mililitros de medio M dos frío y luego mida la densidad óptica de la suspensión.Coloque un microlitro de la suspensión celular sobre un portaobjetos y utilice la imagen de contraste de fase para verificar la presencia de células en estado de enjambre. A continuación, centrifugue las células y resuspenda en medio M two G hasta una densidad óptica entre 0,3 y 0,4. Incube el cultivo con agitación a 28 grados Celsius para ensayos de inmunotransferencia o expresión génica.Retire alícuotas de un mililitro cada 10 a 30 minutos durante aproximadamente 140 minutos, hasta que la densidad óptica del cultivo se duplique. Utilice una centrífuga de mesa para sedimentar las células durante 30 segundos y luego aspire rápidamente el medio. Congele los pellet celulares en nitrógeno líquido y almacénelos a menos 80 grados Celsius para sincronización a pequeña escala. Inocule cinco mililitros de medio M2G con 1000 células NA y cultive las células durante la noche con agitación a 28 grados Celsius. Al día siguiente.Diluya el cultivo en 15 mililitros de medio M2G y cultive las células hasta que la densidad óptica esté entre 0,5 y 0,6. Centrifugue las células y luego resuspenda en un mililitro de medio M2 frío. Transfiera las células a un tubo microcentrífugo de dos mililitros, forme el pellet celular por centrifugación y aspire el sobrenadante.Luego, coloque el tubo en hielo y resuspenda el botón celular en 900 microlitros de medio M dos frío. A continuación, agregue 900 microlitros de sílice coloidal recubierta con PVP fría y centrifugue el tubo durante 20 minutos. Aspire cuidadosamente la banda superior de células predivisorias y luego recoja la banda inferior de células nadadoras en un nuevo tubo de microcentrifugado.Lave las células nadadoras dos veces en un mililitro de medio M2 frío, centrifugando durante tres minutos entre cada lavado, justo antes de la centrifugación final. Coloque la suspensión celular en un tubo de ensayo de vidrio de un mililitro previamente enfriado y mida la densidad óptica de las células. Luego, transfiera las células a un tubo para microcentrífuga y centrifugue tras la centrifugación.Reese, suspenda el pellet celular final en medio M dos G precalentado a una densidad óptica entre 0,3 y 0,4 y agite las células a 28 grados Celsius. Si se desea microscopía, coloque un microlitro de la cultura sobre una placa de agar M dos G en los puntos temporales apropiados. La centrifugación por gradiente de densidad de una cultura asincrónica produce dos bandas de células.La banda inferior contiene células migradoras, que tienen una mayor densidad, y la banda superior contiene células en estado de reserva y predivisorias, que tienen una menor densidad. La densidad óptica del cultivo aumenta aproximadamente el doble durante el transcurso del ciclo celular. Durante este tiempo, las células migradoras se diferencian en células en estado de reserva, y estas últimas luego se replican y experimentan una división celular asimétrica.Con cada división que produce una nueva célula nadadora y la célula progenitora reabastecida, una inmunotransferencia para el regulador maestro del ciclo celular CTRA es un control útil para verificar la sincronización; CTRA bloquea la replicación del ADN en las células nadadoras y se degrada al iniciarse la replicación del ADN. Luego, CTRA se sintetiza nuevamente en una fase posterior del ciclo celular, impidiendo la reanudación de la replicación del ADN y activando la transcripción de muchos genes de desarrollo. Este patrón oscilante en los niveles de la proteína CTRA indica una sincronización exitosa.Después de ver este video, debería tener una buena comprensión de cómo sincronizar células de *Caulobacter crescentus* NA1000 para investigar el ciclo celular bacteriano. Este procedimiento de sincronización celular puede realizarse en una a dos horas si se lleva a cabo correctamente. Es importante recordar trabajar rápidamente durante la realización de este procedimiento.

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Biología

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Fuente: Murata, K. et. al., Visualización de la compactación del ADN en cianobacterias mediante tomografía crioelectrónica de alto voltaje. J. Vis. Exp. (2018)Este video demuestra el cultivo sincrónico de cianobacterias bajo ciclos de luz-oscuridad para estudiar la compactación del ADN regulada por el circadiano. La microscopía de fluorescencia revela ADN condensado en puntos de tiempo definidos, lo que confirma la alineación del ciclo celular en toda la población.

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Imágenes en vivo de la célula de fluorescencia de ciclo completo de células vegetativas de la lento-crecimiento Social bacteria Myxococcus xanthus

Se describe aquí es un método para el análisis de expresión génica bacteriana en los tejidos animales a nivel celular. Este método proporciona un recurso para el estudio de la diversidad fenotípica que ocurre dentro de una población bacteriana en respuesta al ambiente de tejido durante una infección.

Un método basado en la fluorescencia para el estudio de regulación de los genes bacterianos en los tejidos infectados

Este artículo proporciona una guía paso a paso para investigar la dinámica de localización subcelular de proteínas y para monitorear los cambios morfológicos usando microscopía de fluorescencia de alta resolución en Bacillus subtilis y Staphylococcus aureus.

Microscopía de Fluorescencia de Células Vivas para Investigar la Localización de Proteínas Subcelulares y Cambios de Morfología Celular en Bacterias

Este trabajo presenta un método de microscopía que permite la toma de imágenes en vivo de una sola célula de Escherichia coli para el análisis y cuantificación del comportamiento estocástico de los circuitos genéticos sintéticos.

Medición continua del ruido biológico en Escherichia Coli mediante microscopía de lapso de tiempo

Muchas bacterias utilizan la motilidad provocada por flagelos para navegar por su entorno y colonizar entornos favorables tanto individualmente como colectivamente. Aquí se demuestra el uso de tres métodos establecidos que explotan la motilidad como una herramienta de selección para identificar componentes / vías que contribuyen a la natación y la motilidad de enjambre.

Investigación De La Motilidad Impulsada Por Flagelos En Escherichia coli mediante la Aplicación De Tres Técnicas Establecidas En Una Serie

La persistencia de antibióticos describe la capacidad de pequeñas subpoblaciones dentro de una población isogénica sensible para tolerar transitoriamente altas dosis de antibióticos bactericidas. El presente protocolo combina enfoques para caracterizar el fenotipo de persistencia antibiótica a nivel molecular y celular después de exponer a Escherichia coli a dosis letales de ofloxacino.

Análisis poblacional y unicelular de la persistencia antibiótica en Escherichia coli

Un desafío de analizar experimentos sincronizados de series de tiempo es que los experimentos a menudo difieren en la duración de la recuperación de la sincronía y el período del ciclo celular. Por lo tanto, las mediciones de diferentes experimentos no pueden analizarse en conjunto o compararse fácilmente. Aquí, describimos un método para alinear experimentos para permitir comparaciones específicas de fase.

Alineación de datos sincronizados de series temporales utilizando el modelo de caracterización de la pérdida de sincronía del ciclo celular para comparaciones entre experimentos

Aprende a sincronizar Caulobacter crescentus mediante centrifugación por densidad diferencial para estudios del ciclo celular bacteriano. Este protocolo permite aislar células nadadoras para ensayos bioquímicos y microscopía.

Sincronización de

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