Name: Un método simple y barato para la Determinación de la sensibilidad al frío y Adaptación en ratones (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2015-03-17T15:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 35 s
Description: Aprende a medir la sensibilidad al frío y la adaptación en ratones mediante el ensayo de plantar frío. Este método económico evalúa hipersensibilidad y analgesia en neurociencia.

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Los autores desean agradecer las contribuciones de todo el Laboratorio Gereau para la edición de manuscritos. Este trabajo cuenta con el apoyo de los fondos NINDS 1F31NS078852 para DSB y el fondo NINDS NS42595 para RWG.

Todos los protocolos de ratón estaban de acuerdo con los Institutos Nacionales de Salud y fueron aprobados por el Comité de Estudios Animal de la Facultad de Medicina de la Universidad de Washington (St. Louis, MO). 1. Preparación de la Bandeja de Pruebas y Cajas <ol><li> Limpie la superficie del cristal. </li><li> Fije la sonda de termopar de tipo T filamento a la superficie en el medio de la placa de vidrio con cinta de laboratorio. </li><li> Coloca los recintos de los animales sobre la placa de vidrio en una sola línea a lo largo del centro de la placa. </li><li> Pase la sonda termopar a través del centro recinto de animales y enchufe en el registrador de datos. Gire el registrador de datos en tiempo de desactivar la función de apagado automático, y conecte el registrador de datos al ordenador con el cable suministrado. <ol><li> Si el registro de la temperatura de la placa durante el experimento, abra el software de registro de datos para comenzar a registrar temperaturas de placas. </li><li> Si es necesario, ajustar el software para volvercable de la temperatura de la placa una vez por segundo. </li><li> Comience a registrar temperaturas utilizando el software incluido con el registrador de datos térmica. </li></ol></li><li> Separar el recinto con inserciones en negro para evitar la interacción visual entre ratones. </li><li> Posición refleja debajo del vidrio de tal manera que la parte inferior de los recintos es visible desde una posición sentada cómoda. </li></ol> 2. El calentamiento / enfriamiento de la placa de vidrio <ol><li> Llenar cajas de aluminio con agua calentada, hielo húmedo, o hielo seco y la posición apropiada sobre la placa de vidrio (paquetes de papel de aluminio lleno de hielo seco se pueden utilizar también para enfriar el vidrio; Figura 1) 2. <ol><li> Para la prueba a 30 ° C, colocar las cajas de aluminio de aproximadamente 0,25 &#39;&#39; fuera de los recintos de los animales (Figura 2 B) 2. <ol><li> Establecer un circulador de agua caliente a cada lado de la placa de vidrio. Ajuste el termostato a 45 - 60 ° C, y nose para llenar las cajas de aluminio con un flujo constante de agua caliente (Figura 1 C) 2. </li><li> Coloque los circuladores de tal manera que el agua caliente de las cajas de aluminio drena directamente de vuelta al depósito de la bomba de circulación en cada lado (Figura 1 C) 2. </li></ol></li><li> Para la prueba a temperatura ambiente, deje los cuadros vacíos (Figura 2) 2. </li><li> Para la prueba a los 17 ° C, colocar las cajas de aproximadamente 0,25 &#39;&#39; fuera de los recintos de los animales de cada lado y se llenan de hielo húmedo (Figura 2) 2. </li><li> Para la prueba a 12 ° C, colocar las cajas de aproximadamente 1,25 &#39;&#39; fuera de los recintos de cualquier lado y se llenan de hielo seco (Figura 2) 2. </li><li> Para la prueba a 5 ° C, coloque las cajas de aproximadamente 0,25 &#39;&#39; fuera de los recintos de cualquier lado y se llenan de hielo seco (Figura 2) 2.<ol><li> Al enfriar el vaso con hielo seco, asegúrese de que haya suficiente ventilación para evitar la acumulación de CO 2 en la habitación. </li></ol></li></ol></li><li> Espere a que el vidrio para alcanzar el rango de temperatura deseado. </li><li> Añadir los ratones a los recintos de la placa. NOTA: un generador de ruido blanco puede ser utilizado para disminuir las perturbaciones de ruido. </li><li> Espere a que los ratones se aclimate. NOTA: En nuestras instalaciones de esto toma aproximadamente 2,5 horas, pero esto puede variar de forma significativa sobre la base de alojamiento de los animales y las condiciones de manejo. </li><li> Mantener el vidrio en el intervalo de temperatura deseado, garantizando que las cajas se mantienen llenas de agua caliente, hielo húmedo, o hielo seco. NOTA: Con nuestro aparato de las cajas necesita ser rellenado con hielo aproximadamente cada 90 min. NOTA: Para obtener la condición de 17 ° C, es útil para vaciar la mayor parte del agua de las cajas de aluminio a través de los orificios de drenaje antes de rellenar con hielo. Esto estabilizará la temperatura mejor, y prdesbordamiento evento NOTA: La cantidad exacta del hielo seco variará según la temporada, pero en general mantener las cajas de más de ¼ completo a lo largo de toda la longitud de la caja va a mantener la temperatura constante. </li></ol> 3. Prueba de los ratones a temperaturas fijas <ol><li> Fuera de la sala de comportamiento, llenar un cubo de hielo alrededor de la mitad llena de hielo seco. </li><li> Con un martillo o mazo, machacar el hielo seco en un polvo fino. NOTA: Si sobrecarga el cubo hará que sea difícil para aplastar por completo el hielo seco en polvo. </li><li> Utilizando una hoja de afeitar recta o tijeras, corte la parte superior de una jeringa de 3 ml. </li><li> Utilizando una aguja de 21 G, meter 3 agujeros en los lados opuestos de la jeringa (total de 6 hoyos). NOTA: Estos agujeros se reducirá la presión generada por la sublimación mientras comprime el hielo seco. La jeringa de corte puede ser reutilizado para múltiples experimentos. </li><li> Tome la jeringa, polvo de hielo seco, y un cronómetro de mano en la sala de comportamiento. </li><li> Llene la cámara de la jeringa medio lleno de polvo de hielo seco. Mantenga el extremo cortado de la jeringa contra un objeto plano, y comprimir firmemente el polvo utilizando el émbolo. Ten cuidado; el émbolo de plástico puede doblarse o romperse por la presión. Si esto ocurre, vuelva a colocar el émbolo de una jeringa nueva. </li><li> Extender la punta de la pastilla de hielo seco comprimido más allá del borde de la jeringa. </li><li> Ratones de prueba que son totalmente en reposo. <ol><li> A 30 ° C, 23 ° C y 17 ° C, los ratones de prueba que tengan todas las 4 patas en el vidrio y no se mueve, pero no completamente dormido 19. </li><li> A los 12 ° C y 5 ° C, los ratones de prueba que se encuentran en 2 patas o 4 patas y no se mueven o saltan. </li></ol></li><li> El uso de los espejos para la orientación, con suavidad pero con firmeza, presione el rubor pellet plana contra la superficie de cristal debajo de la pata trasera del ratón (Figura 1) 2. Inicie la mano automático. </li><li> Detener el temporizador y retirar el sedimento cuando el ratón se aleja del vidrio enfriado. NOTA: El movimiento de retroceso puede ser vertical u horizontal. <ol><li> Si el ratón se mueve muy brevemente la pata y luego devuelve a la superficie de enfriamiento, continúe sincronización y la estimulación hasta que el ratón hace un movimiento permanente de distancia. NOTA: Nuestro laboratorio utiliza un tiempo máximo estímulo de 20 seg para ratones en la mayoría de los casos. </li></ol></li><li> Repita este procedimiento de prueba hasta que se recogen al menos 3 valores en cada pata de cada animal. Ensayos separados de prueba patas opuestas en el mismo ratón por al menos 7 min, y los ensayos consecutivos separados en una sola pata por al menos 15 min. </li><li> Si es necesario, utilizar diferentes espesores de vidrio para generar diferentes tasas de enfriamiento (Figura 3) 1. NOTA: La velocidad de enfriamiento se correlaciona inversamente con el espesor del vidrio. </li></ol> 4. Prueba de la Ratones Durante Fría Adaptación NOTA: Este es un protocolo alternativo que permite realizar pruebas como la plataforma de cristale enfría, en lugar de una vez que la placa se ha estabilizado y los ratones se han adaptado plenamente al ambiente frío. <ol><li> Siga las instrucciones que figuran en la Sección 1 para configurar el aparato. </li><li> Siga las instrucciones que figuran en la Sección 3 para tomar mediciones de referencia a RT (Figura 7A) 2. </li><li> Pre-enfriar las cajas de aluminio con hielo seco. </li><li> Una vez que se han medido las latencias de retirada de línea de base, coloque las cajas preenfriados en la placa de aproximadamente 1,25 &#39;&#39; fuera de los recintos de cualquier lado (Figura 7A, flecha etiquetada como &quot;hielo seco añadió&quot;) 2. </li><li> Siga las instrucciones que figuran en la Sección 3 para tomar medidas como la placa de vidrio se enfría, tomando medidas tan a menudo como sea posible. </li></ol>

<ol><li>Brenner, D. S., Golden, J. P., Gereau, R. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+Novel+Behavioral+Assay+for+Measuring+Cold+Sensation+in+Mice%5BTitle%5D)+AND+%22Plos+ONE%22%5BJournal%5D)">A Novel Behavioral Assay for Measuring Cold Sensation in Mice.</a> Plos ONE. 7 (6), 8(2012).</li>
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<li>Fujita, F., Uchida, K., Takaishi, M., Sokabe, T., Tominaga, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ambient+Temperature+Affects+the+Temperature+Threshold+for+TRPM8+Activation+through+Interaction+of+Phosphatidylinositol+4%2C5-Bisphosphate%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Ambient Temperature Affects the Temperature Threshold for TRPM8 Activation through Interaction of Phosphatidylinositol 4,5-Bisphosphate.</a> Journal of Neuroscience. 33 (14), 6154-6159 (2013).</li>
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</ol>

Los autores no tienen nada que revelar

El CPA se puede utilizar para evaluar la sensibilidad al frío y la adaptación al frío en ratones. Proporciona una forma asequible y eficiente de medir las respuestas al frío en animales aclimatados y sin restricciones en una amplia variedad de rangos de temperatura. También proporciona una respuesta conductual inequívoca con una variable de salida fácilmente cuantificada y analizada. Ya se ha utilizado para evaluar los cambios en la sensibilidad al frío inducida por la inflamación1, la lesión neuropática<s...

Medición de la capacidad de respuesta frío en roedores es importante para mejorar la comprensión de los mecanismos potenciales de sensibilidad al frío en los seres humanos, tanto en condiciones normales y patológicas. El Plantar Ensayo Fría (CPA), originalmente desarrollado hace varios años 1, está diseñado para generar respuestas reproducibles, sin ambigüedades murinos de comportamiento a un estímulo frío entregado a temperatura ambiente. Más recientes mejoras de este ensayo han permitido la medición reproducible de sensibilidad al frío en una amplia gama de temperaturas de 2. Ambas versiones también están diseñados para ser relativamente de alto rendimiento, y barato de usar. Una gran parte de los avances se han logrado en la comprensión de los mecanismos de la sensibilidad al frío utilizando otros métodos de comportamiento. Un método es la prueba de la evaporación de acetona, que implica frotando o pulverización acetona en la pata del ratón y midiendo la cantidad de tiempo que gasta el ratón agitando el 3,4 pata. Desafortunadamente,las respuestas a la evaporación de acetona son confundidos por la sensación de humedad y el olor de la acetona. Además, el estímulo frío que se aplica en la prueba de la evaporación de acetona puede variar en función de la cantidad de acetona aplicado, y es difícil de cuantificar. Finalmente, los ratones no lesionados tienen respuestas mínimas a acetona al inicio del estudio, por lo que es imposible medir la analgesia en ausencia de hipersensibilidad con este método. Otro ensayo clásico para las respuestas frías es el ensayo de retirada de la cola, donde se mide la latencia a la retirada después de la cola se encuentra inmersa en 5,6 agua fría. Mientras que las respuestas de comportamiento en este ensayo son inequívocos y el ensayo mide las respuestas a una temperatura específica, los animales deben estar sujetos durante la prueba, lo que puede alterar la capacidad de respuesta fría a través de bien descritos mecanismos analgésicos inducidos por el estrés 7. Otra herramienta comúnmente usada es la prueba de la placa fría, que mide el comportamientorespuestas de los ratones después de que se colocan en una placa Peltier enfriado 8-10. Mientras que esta herramienta proporciona información sobre respuestas de los animales a temperaturas específicas, también se ha utilizado de manera incompatible; diferentes grupos han medido diferentes tipos de respuestas, incluyendo el número de saltos 8,11, la latencia hasta la primera respuesta 8,11- 13, y el número de la pata ascensores 11,13,14 con resultados muy diferentes. El ensayo de placa de frío es también relativamente bajo rendimiento, ya que sólo un animal puede ser probado a la vez, y requiere un dispositivo peltier caros y frágiles. La prueba de preferencia la temperatura de la placa 2 es un derivado de uso común de la prueba de la placa fría que mide la cantidad relativa de tiempo que los animales pasan en 2 placas conectadas de diferentes temperaturas 9,15- 17. Otro ensayo comúnmente utilizado similar es el ensayo de gradiente térmico, donde la cantidad de tiempo que los ratones que pasan en diferentes zonas de temperaturaque oscila entre 5 ° C y 45 ° C en una placa de metal larga se mide 16. Si bien estos ensayos permiten la comparación de temperaturas, no está claro si el comportamiento representa la temperatura o la aversión a la preferencia de la temperatura. Por último, el ensayo de placa fría dinámica ha sido utilizado para medir cómo los ratones responden a los cambios de temperatura ambiente 18. Este método consiste en colocar los ratones en un dispositivo peltier RT y el aumento gradual de abajo a 1 ° C, mientras que la medición de la cantidad de los ratones saltan o se lamen las patas a diferentes temperaturas de la placa. Si bien esta prueba cómo los ratones adaptarse a un entorno de enfriamiento, que no proporciona una forma de probar cómo los ratones responden a un estímulo frío en la configuración de un refrigerador de temperatura ambiente. Adicionalmente, se requiere un equipo costoso para llevar a cabo y no proporciona una manera para aclimatarse a los ratones el equipo de prueba antes de medir su sensibilidad al frío. Para complementar estos ensayos, el CPA pone a prueba la ACCLIMAted respuestas a un estímulo frío bien definido en una variedad de rangos de temperatura, o durante el proceso de adaptación a climas fríos. Se puede probar hasta 14 ratones a la vez con nuestro aparato actual, con el potencial de ser económicamente a escala para ensayos de alto rendimiento.

<table><tbody><tr><td>Sonda de termopar tipo T</td><td>Physitemp</td><td>IT-24p</td><td>Se utiliza para medir la temperatura de la superficie del vidrio (http://www.physitemp.com/products/probesandwire/)</td></tr><tr><td>Placa de vidrio</td><td>Empresa de vidrio local (en St. Louis, Stemmerich Inc)</td><td></td><td>Utilizamos vidrio pyrex (flotador de borosilicato). Nuestro laboratorio generalmente usa 1/4'', pero 3/16'' y 1/8'' también son útiles</td></tr><tr><td>Registrador de datos térmicos</td><td>Extech</td><td>EA15</td><td>Termologger para realizar un seguimiento de la temperatura del vidrio (http://www.extech.com/instruments/product.asp?catid=64&prodid=408)</td></tr><tr><td>3 ml Jeringa</td><td>BD</td><td>309657</td><td>La parte superior se corta y el hielo seco se comprime en la jeringa para generar una sonda fría</td></tr><tr><td>Computadora</td><td>Si usa un registrador Extech, cualquier caja de aluminio Pcwill work</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Las cajas del</td><td>taller mecánico de la Universidad de Washington en St. Louis miden</td> 3' de largo, 4.5'' de ancho y 3'' de alto con una tapa sellada.<td></td><td> Hay un agujero de 1/2'' perforado en un lado corto de cada caja, cerca de la parte inferior. Estos agujeros se llenan con llaves de paso de goma cuando las cajas se llenan con hielo húmedo o agua caliente.</td></tr><tr><td>Circulador de agua calefactada</td><td>VWR</td><td></td><td>Cualquier modelo de circulador de agua con bomba funcionará</td></tr><tr><td>Aguja de 21 G</td><td>BD</td><td>305165</td><td>El tamaño exacto de la aguja no es importante</td></tr><tr><td>Temporizador</td><td></td><td></td> de mano <td>Cualquier temporizador de mano funcionará</td></tr><tr><td>Espejo</td><td></td><td></td><td>Cualquier espejo plano funcionará</td></tr></tbody></table>

un método simple y barato para la determinación de la sensibilidad al frío y adaptación en ratones

A Simple and Inexpensive Method for Determining Cold Sensitivity and Adaptation in Mice

La hipersensibilidad al frío es un problema clínico grave, que afecta a un amplio subconjunto de pacientes y causa disminuciones significativas en la calidad de vida. El ensayo plantar frío permite la evaluación objetiva y económica de la sensibilidad al frío en ratones, y puede cuantificar tanto la analgesia como la hipersensibilidad. Los ratones se aclimatan en una placa de vidrio y una bolita de hielo seco comprimido se sostiene contra la superficie de vidrio debajo de la pata trasera. La latencia hasta la retirada del vidrio refrigerante se utiliza como medida de la sensibilidad al frío.
La sensación de frío también es importante para la supervivencia en regiones con cambios estacionales de temperatura, y para mantener la sensibilidad, los animales deben ser capaces de ajustar sus umbrales de respuesta térmica para que coincidan con la temperatura ambiente. El Cold Plantar Assay (CPA) también permite estudiar la adaptación a los cambios en la temperatura ambiente mediante la prueba de la sensibilidad al frío de ratones a temperaturas que oscilan entre 30 °C y 5 °C. Los ratones se aclimatan como se describe anteriormente, pero la placa de vidrio se enfría a la temperatura inicial deseada utilizando cajas de aluminio (o paquetes de papel de aluminio) llenas de agua caliente, hielo húmedo o hielo seco. La temperatura de la placa se mide en el centro utilizando una sonda de termopar tipo T de filamento. Una vez que la placa ha alcanzado la temperatura inicial deseada, los animales se someten a pruebas como se ha descrito anteriormente.
Este ensayo permite realizar pruebas con ratones a temperaturas que van desde inocuas hasta nocivas. El CPA produce respuestas conductuales inequívocas y consistentes en ratones no lesionados y se puede utilizar para cuantificar tanto la hipersensibilidad como la analgesia. Este protocolo describe cómo usar el CPA para medir la hipersensibilidad al frío, la analgesia y la adaptación en ratones.

Las respuestas de comportamiento inducidos a partir de ratones a partir de 30 ° C, 23 ° C, 17 ° C, y 12 ° C son altamente reproducible (Figura 4A) 20. Con el fin de medir el estímulo frío que se genera bajo la pata trasera, los ratones fueron anestesiados con una mezcla de ketamina / xilazina / acepromazina cóctel y sus patas fueron asegurados en el cristal en la parte superior de un termopar de tipo T filamento (Figura 4B) 20. El vidrio se enfría o se calienta a l...

El ensayo plantar en frío (CPA) mide la respuesta al frío entre 30 °C y 5 °C, y también puede medir la adaptación al frío. Este protocolo describe cómo usar el CPA para medir la hipersensibilidad al frío, la analgesia y la adaptación en ratones.

Un método simple y barato para la Determinación de la sensibilidad al frío y Adaptación en ratones

Cold hypersensitivity is a serious clinical problem, affecting a broad subset of patients and causing significant decreases in quality of life.  The cold ...

El objetivo general de este procedimiento es medir la respuesta al frío en ratones. Esto se logra primero enfriando o calentando el vidrio hasta la temperatura deseada. El segundo paso consiste en aclimatar a los ratones hasta que estén en reposo.El tercer paso consiste en comprimir el polvo de hielo seco en un comprimido dentro de una jeringa. El paso final es probar a los ratones utilizando el comprimido de hielo seco y un cronómetro para medir la latencia de retirada. En última instancia, el ensayo del plato frío se utiliza para medir la respuesta al frío y la adaptación en ratones con comportamiento libre.La principal ventaja de nuestro ensayo frente a los ensayos existentes actualmente, como la prueba de acetona y la prueba de placa fría, es que podemos evaluar tanto la hipersensibilidad como la analgesia en condiciones basales bajo diversas circunstancias ambientales. Aunque este método puede proporcionar información sobre la respuesta al frío de los ratones, también puede utilizarse en otros sistemas, como el mono, la rata y los seres humanos. El procedimiento será demostrado por Daniel Brenner, un estudiante de posgrado en mi laboratorio.Después de limpiar la superficie de vidrio, sujete la sonda del termopar de tipo T a la superficie en el centro de la placa de vidrio con cinta de laboratorio. Coloque los recintos para animales sobre la placa de vidrio en una sola línea a lo largo del centro. Luego pase la sonda del termopar a través del recinto central para animales y conéctela al registrador de datos.Encienda el registrador de datos y desactive la función de apagado automático. Conecte el registrador de datos al ordenador con el cable proporcionado. Separe los recintos para animales con separadores negros para evitar interacciones visuales entre los ratones y coloque espejos debajo del vidrio para permitir la visualización de la parte inferior de los recintos.Para comenzar las pruebas, coloque cajas de aluminio sobre la placa de vidrio a ambos lados del animal, con los recintos a una distancia fija. Si se realiza la prueba a 30 grados Celsius, conecte circuladores de agua caliente a las cajas de aluminio colocadas a 0,25 pulgadas de distancia del recinto del animal. Llene las cajas con agua hasta la mitad mientras los orificios de drenaje están tapados.Coloque los circuladores de manera que el agua caliente de las cajas de aluminio drene directamente de vuelta al depósito del circulador en cada lado. Deberá añadir agua a cada circulador. Una vez que las cajas metálicas estén llenas, ajuste los circuladores a entre 45 y 60 grados Celsius y llene las cajas de aluminio con un flujo constante de agua caliente.Cuando los vasos alcancen el rango de temperatura deseado, coloque los ratones en los recintos sobre la placa. Permita que los ratones se aclimaten al aparato y a la temperatura. Estos ratones se aclimatarán durante 2,5 horas.Cuando se esté acercando el final del período de aclimatación, llene un cubo de hielo aproximadamente hasta la mitad con hielo seco y utilice un martillo o maza para triturar el hielo seco hasta convertirlo en polvo. Haga esto fuera de la sala de comportamiento para evitar molestar a los ratones. A continuación, utilice una cuchilla de afeitar o tijeras para cortar la parte superior de una jeringa de tres mililitros.Luego, use una aguja de calibre 21 para hacer dos grupos de tres orificios en lados opuestos de la jeringa con el fin de reducir la presión generada por la sublimación mientras se comprime el hielo seco nuevamente en la sala de comportamiento; llene la cámara de la jeringa hasta la mitad con polvo de hielo seco. Sostenga el extremo cortado de la jeringa contra un objeto plano y comprima firmemente el polvo utilizando el émbolo. Extienda la punta de la paleta de hielo seco comprimido más allá del borde de la jeringa.Ahora, pruebe con aquellos ratones que tienen las cuatro patas sobre el vidrio y no se están moviendo, pero que no están completamente dormidos. Usando los espejos para apuntar, presione suavemente pero con firmeza el comprimido plano contra la superficie de vidrio debajo de la pata trasera del ratón. Simultáneamente, presione el botón de inicio en un cronómetro.Cuando el ratón se aleje del vidrio enfriado, ya sea vertical u horizontalmente, detenga el cronómetro y retire el pellet de hielo seco. Sin embargo, si el ratón mueve brevemente la pata y luego la regresa a la superficie de enfriamiento, continúe midiendo el tiempo y estimulando hasta que el ratón se aleje permanentemente. Si el ratón no se aleja del vidrio enfriado, detenga el estímulo después de 20 segundos.Repita este procedimiento de prueba hasta obtener al menos tres valores en cada pata del animal para probar a los ratones a 17 grados Celsius. Repita el experimento como se acaba de mostrar, pero en lugar de llenar las cajas de aluminio con agua caliente, utilice hielo húmedo y coloque las cajas aproximadamente a 0,25 pulgadas de distancia de los recintos para probar a los ratones. A 12 grados Celsius, se utiliza hielo seco, pero las cajas se colocan a 1,25 pulgadas de distancia de los recintos.Este protocolo alternativo evalúa a los ratones mientras la temperatura de la placa disminuye, en lugar de hacerlo tras alcanzar la estabilidad. Esto nos permite evaluar la adaptación de los ratones mientras ocurre. Tras configurar el equipo, realice el experimento según se describió anteriormente para tomar mediciones a temperatura ambiente.Una vez que se hayan medido las latencias basales a temperatura ambiente, utilizando el procedimiento mostrado previamente, llene las cajas de aluminio vacías con hielo seco y colóquelas a 1,25 pulgadas de los recintos a ambos lados. Finalmente, repita el experimento para obtener mediciones de latencia a medida que la placa de vidrio se enfría.Tomar mediciones con la mayor frecuencia posible. Este gráfico muestra la latencia media de retirada en ratones a partir de 12 grados Celsius, 17 grados Celsius, 23 grados Celsius o 30 grados Celsius. Las latencias de retirada son consistentes en todas las temperaturas.Los efectos analgésicos pueden medirse utilizando el ensayo de placa fría como se muestra aquí. La inyección subcutánea de 1,5 miligramos por kilogramo de morfina aumenta la latencia de retirada de los ratones a los 30 minutos posteriores a la inyección, según se mide mediante una prueba estadística de dos vías innova con la prueba post hoc de Bonferroni a los 60 minutos después de la inyección. No hay diferencia significativa entre los ratones inyectados con morfina y los inyectados con solución salina.La hipersensibilidad en ratones también puede medirse aquí. La inyección intraplantar de 10 microlitros de adyuvante completo de Freund disminuye significativamente la latencia de retirada de los ratones a las dos y tres horas posteriores a la inyección, según se midió mediante un análisis de varianza de dos vías con prueba post hoc de Bonferroni. A los mismos ratones se les administraron inyecciones subcutáneas de morfina a las cuatro horas, y todas las latencias de retirada a las 4,5 horas fueron significativamente mayores en comparación con las tres horas, según se midió mediante un análisis de varianza de una vía con prueba post hoc de Dunnett.Una vez que la morfina fue metabolizada a las 5,5 horas posteriores a la inyección, los ratones inyectados con CFA aún presentaban latencias de retirada más bajas que los ratones inyectados con solución salina, según se midió mediante una prueba de varianza de dos vías con la prueba post hoc de Bonferroni. La adaptación a los cambios ambientales de enfriamiento puede medirse en tiempo real con este ensayo. Los ratones de tipo silvestre presentan la misma latencia de retirada mientras la placa de vidrio se enfría, lo que sugiere que se adaptan a las temperaturas más frías más rápidamente de lo que puede medirse con la CPA, la cual no mostró diferencias significativas entre ninguno de los grupos.Sin embargo, cuando los ratones han sido inyectados con U 7 3 1 2 2 para bloquear la hidrólisis de PIP dos, su latencia disminuye conforme la temperatura de la placa desciende, lo que sugiere una adaptación deteriorada. Una vez dominada, esta técnica puede realizarse en cinco horas, incluyendo el tiempo de aclimatación. Después de ver este video, debería tener una buena comprensión de cómo medir la sensación de frío y la adaptación en ratones despiertos y con comportamiento libre. No olvide que trabajar con hielo seco puede ser excepcionalmente peligroso y que debe asegurar una ventilación adecuada y la circulación de aire durante este método.

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Research

Investigación

JoVE Journal

Neuroscience

Neurociencia

A continuación, describimos un procedimiento rápido fiable y sencillo para determinar la temperatura más baja en la que las ratas o ratones muestran un comportamiento...

Determinación rápida del umbral nociceptivo térmico en ratas diabéticas

Las mediciones electrónicas de von Frey son una alternativa eficaz y mejorada a los filamentos clásicos de von Frey, ya que permiten una medición rápida y precisa de los cambios en los umbrales de retirada mecánica de los roedores a los estímulos de presión aplicados continuamente antes y después de un evento inflamatorio.

Medición de los cambios en la sensibilidad táctil en la pata trasera de ratones utilizando un aparato electrónico de von Frey

Las respuestas alérgicas, caracterizados por la activación de los mastocitos y basófilos, están impulsados ​​por la reticulación de IgE y liberación de mediadores proinflamatorios. Una evaluación cuantitativa de las respuestas alérgicas se puede lograr mediante el uso de colorante azul de Evans para monitorear los cambios en la permeabilidad vascular después de la provocación con alergeno.

Medición anafilaxia local en ratones

Este manuscrito describe un protocolo para examinar el sistema olfativo de los roedores. La prueba de habituación/deshabituación olfativa permitirá a los investigadores determinar si un ratón se habitúa a un olor presentado repetidamente y si el ratón demuestra deshabituación cuando se le presenta un olor nuevo.

Las pruebas para detectar olor Discriminación y habituación en ratones

Presentamos una prueba olfativa sencilla e imparcial en ratones. Con este protocolo, la discriminación olfativa, la preferencia, la evitación y la sensibilidad a un olor nuevo en comparación con el agua se pueden evaluar en sesiones conductuales únicas. Este método está indicado para un solo experimentador y el análisis se basa en el procesamiento de vídeo asistido por ordenador.

Simple y asistida por ordenador de pruebas olfativas para Ratones

Aquí se demuestra un nuevo ensayo para estudiar la nocicepción frío en larvas de Drosophila. Este ensayo utiliza una sonda Peltier hecha a la medida capaz de aplicar un estímulo frío nocivo focal y da lugar a comportamientos específicos de frío cuantificables. Esta técnica permitirá además disección celular y molecular de la nocicepción frío.

Ensayo novedoso para la nocicepción en frío<em&gt; Drosophila</em&gt; Las larvas

En este trabajo ofrecemos detalles de los métodos de producción y control de calidad de una proteína de fusión recombinante de IL4-10. También mostramos cómo probar la efectividad de esta proteína para resolver el dolor en un modelo murino de dolor inflamatorio.

Desarrollo de proteínas recombinantes para el tratamiento de dolor crónico

Aquí presentamos un nuevo método para medir con precisión las diferencias de temperatura del cuerpo en pasiva Anafilaxia sistémica (PSA) y modelos de ratón de alergia de alimentos utilizando un termómetro infrarrojo. Este procedimiento ha sido duplicado exactamente en resultados anteriores de PSA.

Medición de la temperatura del cuerpo de ratón con termómetro infrarrojo pasiva Anafilaxia sistémica y evaluación de la alergia alimentaria

Los ratones y las ratas se implantan quirúrgicamente con transpondedores de temperatura remotos y luego se habitúan al entorno y procedimiento de prueba. Los cambios en la temperatura muscular se miden en respuesta a estímulos farmacológicos o contextuales en la jaula del hogar o durante la actividad física prescrita (es decir, caminar en la cinta a una velocidad constante).

Medición de la termogénesis del músculo esquelético en ratones y ratas

La hipersensibilidad de contacto (CHS) es un modelo experimental murino de dermatitis alérgica de contacto (ACD). El CHS se basa en la sensibilización con hapteno reactivo mediante la pintura de la piel afeitada del pecho y el abdomen, con un posterior desafío de la piel del oído con un hapteno diluido, causando una reacción de hinchazón que se evalúa de varias maneras.

Hipersensibilidad de contacto como modelo murino de dermatitis alérgica de contacto

Aprende a medir la sensibilidad al frío y la adaptación en ratones mediante el ensayo de plantar frío. Este método económico evalúa hipersensibilidad y analgesia en neurociencia.

Un método simple y barato para la Determinación de la sensibilidad al frío y Adaptación en ratones

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