Utilizando el Electrorretinograma para evaluar la función en el Roedor Retina y los efectos protectores de distancia Limb Preacondicionamiento Isquémico

El objetivo general de este procedimiento es evaluar la función visual en ratas con lesiones normales ligeras y con lesiones isquémicas remotas, precondicionadas y con lesiones leves utilizando el ERG y, por lo tanto, demostrar los efectos protectores de la isquemia de las extremidades remotas en la retina. Esto se logra al anochecer primero, adaptando a las ratas durante 12 horas. El segundo paso es registrar el ERG básico adaptado a la oscuridad utilizando estímulos de luz LED y un amplificador digital.

A continuación, someta a las ratas a un estrés retiniano exponiéndolas a una luz brillante y continua. El paso final es comparar los registros ERG de las ratas con daño lumínico y las precondicionadas con isquemia remota de las extremidades, y medir las respuestas de los fotorreceptores como se ven en la onda A y las respuestas internas de la retina como se ven en la onda B. En última instancia, el ERG adaptado a la oscuridad se utiliza para evaluar la función visual escotópica.

Por lo tanto, este método puede proporcionar información sobre la neuroprotección basada en isquémicos remotos. También se puede aplicar a otras formas de lesiones y enfermedades de la retina, pruebas farmacológicas, y para el cribado de animales con defectos visuales. Para comenzar este procedimiento, adapte la rata en la oscuridad durante 12 horas, luego anestesiarla con la inyección de cóctel de ketamina xilacina.

Una vez que el animal esté inconsciente, verifique la profundidad de la anestesia pellizcando ligeramente su pata para asegurarse de que la respuesta refleja esté ausente. A continuación, aplique una gota de atropina y una gota de metano prox en su córnea. Cortar a hilo negro de 10 centímetros de largo.

A continuación, haz un bucle con el hilo y desliza el bucle sobre el ecuador del ojo, ligeramente apretado para llevar el globo ocular ligeramente hacia delante y mantener la córnea alejada del párpado. A continuación, aplique colirios de carmer en las córneas. Coloque la rata en la cama absorbente en la parte superior de la plataforma calentada con la cabeza colocada en la abertura del ganzfeld.

A continuación, inserte la sonda de temperatura interna en el recto para asegurarse de que la temperatura corporal se mantenga a 37 grados centígrados, y asegure la sonda de temperatura en su posición pegando su cordón a la cola de la rata. A continuación, inserte el electrodo de referencia por vía subcutánea en la extremidad posterior. Coloque el electrodo negativo de forma segura en la boca para evitar que el electrodo se salga de la boca.

Fije el cable de conexión a una superficie estable. A continuación, coloque el electrodo positivo sobre el centro de la córnea y asegúrese de que el electrodo toque la córnea suavemente con un manipulador de micrómetros. Una vez que los electrodos estén en su lugar, cubra el orificio configurado, incluido el ganzfeld y el animal, con un material opaco para preservar la adaptación a la oscuridad.

En el software de adquisición. Establezca dos kilohercios como frecuencia de muestreo con cinco milisegundos para el muestreo previo a la recolección y un tiempo de recolección de 100 a 1000 milisegundos. A continuación, ajuste los filtros de paso de banda a uno a 1000 hercios y asegúrese de que el muestreo se active durante un período de 100 milisegundos después de un destello.

Ahora, verifique la línea de base de grabación. Debe estar libre de ruido extraño, pero mostrar el ruido del amplificador y la oscilación respiratoria. A continuación, ejecute un flash de prueba.

Esta es una forma de onda ERG típica en respuesta al destello de prueba. Cuando esté listo, permita que el animal se readapte a la oscuridad durante 10 minutos. A continuación, vuelva a comprobar la línea de base para ver si la señal es estable.

Posteriormente, comience la grabación Al final de la sesión de grabación, verifique la estabilidad de la temperatura corporal del animal. Retire los electrodos y vuelva a aplicar el polímero de carmer a las córneas. Después, permita que el animal se recupere en una almohadilla térmica hasta que esté completamente móvil y activo antes de regresar al establo del animal.

Esta figura muestra la medición de una onda y una onda B a partir de un ERG adaptado a la oscuridad. El rastro que se muestra aquí se registra desde la córnea de un ojo oscuro adaptado a un destello brillante de luz dado en ese momento que se muestra como T cero. La amplitud de una onda se mide desde la línea de base hasta el primer valle.

La amplitud de la onda B se mide desde el valle de la onda A hasta el siguiente pico positivo. La latencia se mide desde el artefacto del estímulo hasta el punto de interés en la traza, como el valle de la onda A. La señal ERG dominada en bruto aumenta con el aumento del estímulo luminoso.

Una onda se hace evidente a aproximadamente 0,4 logs de segundos de candela escotópica por metro cuadrado, y se ha utilizado el paradigma de doble destello para separar la señal ERG mixta en respuestas de cono y varilla. Una vez dominado. Esta técnica se puede realizar en 30 minutos.