Name: Aislamiento de células mononucleares de la del sistema nervioso central de ratas con EAE (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2007-12-04T04:23:00.000+00:00
Duration: 20 min 51 s
Description: Aprende a aislar células mononucleares del sistema nervioso central de ratas con EAE mediante perfusión cardíaca y gradiente de Percoll. Este protocolo elimina la contaminación sanguínea y proporciona células viables para citometría de flujo y cultivos celulares.

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<ol><li> Profundamente anestesiar a las ratas. Rocíe con el 70% de etanol y hacer una perfusión cardiaca con PBS durante 10 minutos para eliminar las células de los vasos sanguíneos (corte de la aurícula derecha y la perfusión a través del ventrículo izquierdo). </li><li> Quitar el cerebro y la médula espinal y el lugar en un tubo de 50 ml que contiene helado de PBS. Cortar el cerebro y la médula espinal en un colador celular de 70 mm colocado en una placa de Petri de 10 cm con 10 ml de helado de PBS. Presione cada pieza de órgano a través del filtro de células usando la parte de atrás de un estéril de 1 ml émbolo de la jeringa. Recoger la única suspensión de células en un tubo de 50 ml en hielo. Lave el filtro de las células con PBS y añadir a la sonda hasta que la solución es clara. </li><li> Centrifugar durante 80-10 minutos a 390 g. </li><li> Resuspender las células en 20 ml de Percoll PBS + 30% y la superposición en 10 ml de Percoll PBS + 70%. </li><li> Centrifugar a 390 g durante 20 minutos a temperatura ambiente. </li><li> Quitar la grasa en la parte superior del tubo. Recoger las células de la interfaz y lavar dos veces con PBS. Contar. </li></ol>

<ol><li>Beeton, C., Chandy, K. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Induction+and+clinical+scoring+of+chronic-relapsing+experimental+autoimmune+encephalomyelitis%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%22%5BJournal%5D)">Induction and clinical scoring of chronic-relapsing experimental autoimmune encephalomyelitis.</a> Journal of Visualized Experiments. 5, Forthcoming.</li>
</ol>

Este procedimiento, como todos los procedimientos con animales vivos, deben ser aprobados por el uso de animales de su institución y el comité de atención. Le recomendamos que un veterinario o un técnico veterinario estar presente cuando se realiza la perfusión cardiaca primero en asegurar un nivel suficiente de anestesia se administra a los animales antes y durante el procedimiento, y que los animales no sufren dolor innecesario o sufrimiento.

<table><tbody><tr><td>PBS, 1x, estéril</td><td>Reactivo</td><td>GIBCO, por Life Technologies</td><td>14190-250</td><td></td></tr><tr><td>Filtro celular, 70 µm</td><td>Herramienta</td><td>Fisher Scientific</td><td>08-771-2</td><td></td></tr><tr><td>Percoll</td><td>Reactivo</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>P1644</td><td></td></tr></tbody></table>

aislamiento de células mononucleares de la del sistema nervioso central de ratas con eae

Isolation of Mononuclear Cells from the Central Nervous System of Rats with EAE

Si el estudio de una enfermedad autoinmune dirigido al sistema nervioso central (SNC), tales como la encefalomielitis autoinmune experimental (EAE, 1), o la respuesta inmunológica a una infección del sistema nervioso central, como la poliomielitis, neuroborreliosis de Lyme, neurosífilis o, a menudo es necesario aislar las células del SNC se infiltran inmunológico. En este video se demuestra cómo el protocolo para aislar células mononucleares (MNC) del sistema nervioso central de ratas con EAE. El primer paso de este procedimiento requiere una perfusión cardiaca de los roedores con una solución salina para asegurarse de que no sangre, permanece en los vasos sanguíneos de irrigación del sistema nervioso central. Cualquier contaminación de la sangre artificial se incrementará el número de aparente infiltración de las corporaciones multinacionales sobre el SNC y puede alterar la composición de la aparente inmunidad se infiltran. A continuación se muestra cómo extraer el cerebro y la médula espinal de la rata para dislaceración posterior para preparar una suspensión de una sola célula. Esta suspensión se separa en un gradiente de dos capas de Percoll para aislar a las multinacionales. Después del lavado, estas células están listas para someterse a cualquier procedimiento requerido. Las células mononucleares aisladas con este procedimiento son viables y pueden ser utilizados para la electrofisiología, la citometría de flujo (FACS), o la bioquímica. Si la técnica se realiza en condiciones estériles (con instrumentos estériles en una campana de cultivo de tejidos), las células también pueden ser cultivadas en un medio de cultivo de tejidos. Una población celular determinada puede ser purificado utilizando los procedimientos de separación magnética o un FACS.

En este video se demuestra la forma de aislar las células mononucleares del sistema nervioso central de ratones con encefalomielitis autoinmune experimental.

Aislamiento de células mononucleares de la del sistema nervioso central de ratas con EAE

Ya sea que se estudie una enfermedad autoinmune dirigida al sistema nervioso central (SNC), como la encefalomielitis autoinmune experimental (EAE, 1), o la ...

Vale. Hola, soy Christine Beaton. Soy investigadora asistente en el laboratorio de George Chen, del Departamento de Fisiología y Biofísica de la Universidad de California en Irvine. Y hoy les mostraré cómo aislar células mononucleares del sistema nervioso central de ratas.Este procedimiento consiste en anestesiar profundamente a la rata para realizar una perfusión cardíaca, de modo que no tengamos sangre contaminante en el sistema nervioso central. Cuando la extraigamos, retiraremos el cerebro y la médula espinal, prepararemos una suspensión de células individuales utilizando un filtro celular y, a continuación, mediante un gradiente de doble capa de percol, aislaremos las células mononucleares. Comencemos.Ahora estoy listo para realizar la perfusión cardíaca, así que voy a mostrar todos los materiales que necesito para ello. Lo primero que necesitamos es un frasco de Bell, y aquí abajo hemos colocado toallas de papel empapadas con anestésico volátil. Puede utilizarse halano o isoflurano.Lo siguiente que necesitamos es algo para sostener la rata y algo para recolectar la sangre. Por lo tanto, tenemos esta instalación improvisada para perfundir a las ratas. Se utilizará una aguja de

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Investigación

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Biología

El presente artículo describe un protocolo rápido para aislar eficazmente células mononucleares de tejidos de la médula espinal y el cerebro que puede ser efectivamente utilizado para el análisis de citometría de flujo.

Aislamiento de células del cerebro y la médula espinal mononucleares uso de gradientes de Percoll

En este video, realizamos el aislamiento de células mononucleares del cerebro de un ratón utilizando centrifugación por gradiente de densidad. La suspensión de célula mononuclear aislada se puede utilizar para análisis posteriores posteriores.

Aislamiento de células mononucleares a partir de cerebro de ratón: una técnica de centrifugación de gradiente de densidad para aislar células mononucleares residentes en el cerebro

Este video muestra el proceso de aislar microvasos cerebrales de ratas sacrificadas. Incluye la disección del cerebro, la limpieza del tejido y la digestión mecánica, seguida de una centrifugación repetida para aislar la fracción pura de los microvasos.

Un método para el aislamiento de unidades neurovasculares a partir de cerebro de rata

Este manuscrito describe los métodos para la inducción y puntuación del modelo experimental de encefalomielitis autoinmune (EAE), junto con la evaluación de la distribución de células inmunitarias y los niveles de citocinas de ARNm en ganglios linfáticos, bazo, sangre y médula espinal mediante citometría de flujo y PCR cuantitativa, respectivamente, en varias fases de la enfermedad.

La inducción de la encefalomielitis autoinmune experimental en ratones y evaluación de la distribución de la enfermedad dependiente de las células inmunes en diversos tejidos

Esfuerzos para comprender la función microglial en detalle han impedido por la falta de modelos de cultura microglial que recapitular las propiedades de microglia maduros en vivo . Este protocolo describe un acercamiento aislamiento y cultura diseñado para mantener la supervivencia robusta de microglia altamente ramificados de rata maduro medio definido en condiciones.

Aislamiento y cultivo de Microglia roedor para promover una dinámica ramifican morfología en medio libre de suero

El objetivo de este protocolo es aislar los microvasculares de múltiples regiones del sistema nervioso central de vertebrados lisencéfalos y gyrencéfalos.

Aislamiento confiable de microvasculares del sistema nervioso central en cinco grupos de vertebrados

Proporcionamos un protocolo para el aislamiento de la microglia de diferentes regiones diseccionadas de un hemisferio cerebral de ratón adulto, seguido de la preparación de la biblioteca semiautomática para la secuenciación profunda de ARN de una sola célula de transcriptomes de longitud completa. Este método ayudará a dilucidar la heterogeneidad funcional de la microglia en salud y enfermedad.

Aislamiento de microglia específica de la región del hemisferio cerebral de un ratón adulto para la secuenciación profunda del ARN de una sola célula

Este manuscrito presenta un protocolo para inducir la encefalomielitis autoinmune experimental activa (EAE) en ratones. También se presenta un método para el aislamiento y caracterización de los linfocitos infiltrados en el sistema nervioso central (SNC) para mostrar cómo los linfocitos participan en el desarrollo de la enfermedad autoinmune del SNC.

Análisis citométrico de flujo de infiltración de linfocitos en el sistema nervioso central durante la encefalomielitis autoinmune experimental

Aquí se presenta un método para el aislamiento de células madre neurales y células progenitoras de oligodendrocitos del cerebro de ratas vivas en detalle experimental. Permite múltiples colecciones de estas células de los mismos animales sin comprometer su bienestar.

El método de "ordeño cerebral" para el aislamiento de células madre neurales y células progenitoras de oligodendrocitos de ratas vivas

Esta investigación describe dos técnicas para aislar abundantes trampas extracelulares de neutrófilos (TNE) de la médula ósea de rata. Un método combina un kit comercial de aislamiento de neutrófilos con centrifugación en gradiente de densidad, mientras que el otro emplea solo centrifugación en gradiente de densidad. Ambos enfoques producen TNE funcionales que superan a los de los neutrófilos de sangre periférica.

Enfoque único para aislar neutrófilos de médula ósea de rata con capacidad comparable

Hasta la fecha, los protocolos para el aislamiento simultáneo de todos los principales tipos de células residentes en el sistema nervioso central del mismo ratón son una demanda insatisfecha. El protocolo muestra un procedimiento aplicable en ratones con encefalomielitis autoinmune naïve y experimental para investigar redes celulares complejas durante la neuroinflamación y, al mismo tiempo, reducir el número de ratones requerido.

Aislamiento simultáneo de los principales tipos de células residentes en el sistema nervioso central de ratones adultos con encefalomielitis autoinmune

Aprende a aislar células mononucleares del sistema nervioso central de ratas con EAE mediante perfusión cardíaca y gradiente de Percoll. Este protocolo elimina la contaminación sanguínea y proporciona células viables para citometría de flujo y cultivos celulares.

Aislamiento de células mononucleares de la del sistema nervioso central de ratas con EAE

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