Paw-Arrastrar: una novela, Análisis sensible de la prueba Cilindro Ratón

Classical análisis de asimetría de la extremidad anterior de la prueba de cilindro se usa rutinariamente para evaluar los déficits de comportamiento en ratas después de la lesión cerebral o ictus; sin embargo, no puede detectar déficits consistentes en ratones. Este estudio demuestra que la cuantificación de comportamiento pata-arrastre es un análisis más sensible de la lesión cerebral en ratones.

Hola, soy el Dr. Jackie Vander Loot. Hola, y mi nombre es Brian Room. Hoy hablaremos de un análisis sensible de la pata de prueba del cilindro. Arrastrando.

La prueba del cilindro es una prueba de la función motora de cuatro extremidades en roedores. En esta prueba, los ratones exploran un cilindro de plexiglás criando y usando sus cuatro patas como apoyo postural contra la pared del cilindro. Examinar el uso de cuatro patas mientras el ratón explora el cilindro nos permite determinar si el ratón tiene déficits motores.

Específicamente, comparamos el uso de cada cuatro patas antes y después de la brazada. Después de un accidente cerebrovascular, las cuatro patas contralaterales al hemisferio lesionado se usan con menos frecuencia. Este cambio en el uso de las cuatro patas afectadas frente a las cuatro patas no afectadas es una medida de la asimetría de las cuatro extremidades.

Actualmente, el análisis de asimetría de cuatro extremidades se utiliza en ratones y ratas después de lesiones isquémicas grandes, como la oclusión de la arteria cerebral media, como determinante conductual del accidente cerebrovascular. A diferencia de las lesiones grandes, no se observa asimetría de cuatro extremidades en ratones con lesiones isquémicas focales pequeñas. Esto puede deberse al hecho de que el análisis de asimetría de cuatro extremidades de la prueba del cilindro es sensible a lesiones grandes, pero no es útil para detectar lesiones más pequeñas.

Las lesiones isquémicas focales pequeñas, como la fototrombosis y la isquemia inducida por endotelio uno, son cada vez más populares en la mayoría de los modelos. Esto pone de manifiesto la necesidad de realizar ensayos funcionales conductuales para evaluar estas lesiones corticales más pequeñas. En mi laboratorio, Brian Room ha desarrollado un análisis novedoso de la prueba de cilindros que llamamos arrastre de patas.

Al examinar cómo las cuatro patas del ratón entran en contacto con la pared del cilindro después de una lesión isquémica del endotelio uno, observamos un comportamiento novedoso con la pata afectada. Un arrastre de patas, los ratones no heridos entrarán en contacto con la pared del cilindro con una o ambas patas mientras crían, el ratón planta sus cuatro patas firmemente contra la pared para apoyarse mientras explora y luego usa sus patas para empujarse desde la pared. Al volver a ponerse a cuatro patas, después de una lesión isquémica final, la pata afectada no proporciona un apoyo firme a pesar de hacer contacto con la pared de este cilindro.

Más bien, después del contacto, la palma se levanta y los dedos se arrastran a lo largo de la pared del cilindro antes de soltarse por completo. Este movimiento de arrastre de la pata se produce con la pata moviéndose en una dirección horizontal hacia la línea media del cuerpo o en una dirección vertical hacia el suelo. Hemos cuantificado previamente el comportamiento de arrastre de la vaina en ratones después de una lesión isquémica inphi one y hemos demostrado un mayor comportamiento de arrastre de la vaina por parte de la extremidad afectada hasta dos semanas después de la isquemia.

Además, nuestros datos mostraron que el comportamiento de arrastre de la vaina se correlaciona con el daño a la corteza motora de cuatro. En este video, mostraremos cómo configurar la prueba del cilindro y analizar el comportamiento de arrastre de la vaina en videos grabados. La prueba del cilindro es fácil de configurar y realizar y tiene una sobrecarga de bajo costo.

Es necesario tener una mesa con un centro ahuecado, que esté cubierto con una lámina de plexiglás. Esto nos permite filmar la mayor parte desde abajo. El cilindro de plexiglás se coloca sobre la mesa.

En la parte inferior de la mesa, se dibujan cuatro líneas negras para indicar la posición del cilindro. Esto sirve como guía para que el cilindro pueda ser retirado y reemplazado entre ensayos sin afectar su posición. También en el fotograma del vídeo, las marcas se colocan en la parte inferior de la mesa para que la limpieza de la mesa con etanol al 70% no borre la tinta.

Para filmar al ratón desde abajo con una cámara y un trípode, incluimos un espejo en un ángulo de aproximadamente 45 grados por debajo de la mesa. Esto nos permite evitar las complicaciones de construir un aparato separado para mantener la cámara en su lugar debajo de la mesa. El espejo se mantiene en su lugar con soportes de soporte como se muestra aquí y aquí.

El tamaño de los soportes y el tamaño del espejo dependerán de las dimensiones del espacio entre las patas de la mesa. La cámara y el trípode están colocados a una distancia tal que toda la pared del cilindro se puede ver en el campo de visión. Esta distancia no suele ser más de unos pocos pies, pero puede variar debido al ángulo del espejo, la altura del trípode y las capacidades de zoom de la cámara.

Para realizar la prueba, los ratones se cargan desde la parte superior del cilindro antes de filmar. Las tarjetas de referencia se utilizan para indicar qué ratón está funcionando. Esto puede incluir el número del ratón o un nombre en clave para que la persona que califique los videos del cilindro sea ciega al tratamiento.

La fecha de rodaje y el número de prueba también se pueden incluir en la tarjeta. Los ratones son filmados hasta que se han criado 20 veces. El conteo de esta manera debe implicar ambas patas, dejando el piso los atrasos no contados.

Si el ratón toca la pared con una pata mientras la otra permanece en el suelo, los vídeos de los cilindros se analizan con el reproductor multimedia VLC. Aunque cualquier reproductor multimedia con modulación de velocidad de reproducción estaría bien para usar, los arrastres de vainas se pueden contar usando recuentos mecánicos o escribiendo un conteo en papel. Registramos los recuentos en papel y luego transferimos los datos a una hoja de cálculo.

Reproducción de vídeo a 0,5 veces lo normal. Se recomienda la velocidad para poder contar de manera efectiva. A veces, puede ser necesario pausar y reproducir a una velocidad más baja.

Tenga en cuenta que un mouse también puede mover su cuerpo alrededor del cilindro durante una parte trasera haciendo más de dos contactos. Estos contactos se cuentan, uno para cada toque de bote izquierdo y uno para cada uno. A la derecha, cuatro arrastres de patas táctiles se cuentan como un porcentaje del número total de toques de patas con la pared del cilindro Para cada pata, los toques de pata se evalúan contando el número de veces que el ratón hace contacto con la pared del cilindro con una o ambas cuatro patas.

Tenga en cuenta que un mouse también puede mover su cuerpo alrededor del cilindro durante una parte trasera haciendo más de dos contactos. Estos contactos se cuentan, uno para cada cuatro puntos de contacto izquierdos y uno para cada uno. El comportamiento de arrastre de la cuantificación de la pata con el toque de cuatro po derecho es distinto de la cuantificación de los toques normales de la pata: el arrastre de la pata puede ocurrir con una pata de arrastre vertical u horizontal.

El arrastre a menudo implica un ligero temblor en la pata afectada, ya que sale de la pared del cilindro, lo que sugiere debilidad y falta de control motor. A menudo se observan variaciones en el arrastre estereotipado de la pata con la pata afectada. Un ejemplo es un arrastre incompleto de la pata en el que la palma levanta el arrastre de los dedos contra el cilindro, pero ambas patas finalmente rompen el contacto con la pared al mismo tiempo. Al evaluar el comportamiento de arrastre de la pata, es importante no confundir el movimiento exploratorio lateral de un ratón alrededor del cilindro con un déficit en la función motora de cuatro extremidades.

Durante la exploración lateral, el ratón se mueve lateralmente alrededor del cilindro y las cuatro patas traseras se tiran siguiendo la dirección del torso del ratón. Por ejemplo, el ratón se encabrita y toca la pared con ambas patas, reposiciona una de sus patas y luego se mueve lateralmente hacia la reposición de la pata. Cuando esto ocurre, las patas arrastradas a lo largo de la pared hasta que se replanta para apoyarse.

La torsión del torso del ratón es otra señal de comportamiento exploratorio lateral. Este comportamiento es claramente diferente del arrastre de la pata, ya que el arrastre de la pata no implica un movimiento lateral alrededor de la pared del cilindro durante o directamente antes del arrastre. Nuestros estudios han examinado el arrastre de patas después de una pequeña lesión isquémica focal en la corteza motora de las cuatro extremidades.

Aquí mostramos que el comportamiento de arrastre de la pata con las cuatro P afectadas alcanza su punto máximo un día después del accidente cerebrovascular y disminuye a siete días después del accidente cerebrovascular, donde se estabiliza y permanece elevado hasta cuatro semanas después del accidente cerebrovascular, ya que el déficit parece prolongarse. Esto permitirá a los investigadores estudiar los efectos del accidente cerebrovascular crónico después de una pequeña lesión cortical. Además, los tratamientos para el ictus pueden estudiarse a corto o largo plazo en ratones con pequeñas lesiones corticales.

Nuestro nuevo análisis de arrastre de PO de la prueba celular tiene potencial como ensayo conductual para el accidente cerebrovascular isquémico focal en ratones, como los inducidos por fototrombosis o endofilina. Uno en ratones con lesiones como la oclusión de la arteria cerebral media, donde la asimetría de lam ocurre la mayor parte del tiempo. El arrastre de POD se puede utilizar para determinar el alcance de lesiones más pequeñas y demás.

Los experimentos como el arrastre de la vaina se elevan hasta 28 días después del accidente cerebrovascular inclusive. Tiene potencial para ser utilizado en varios estudios de tratamiento de accidentes cerebrovasculares a corto y largo plazo.