Morris Water Maze Prueba: Optimización de ratón Colar y entorno de pruebas

El objetivo de este procedimiento es identificar déficits cognitivos en un modelo de ratón de la enfermedad de Alzheimer mediante el uso de un protocolo de laberinto de agua de Morris, adaptado para su uso con la cepa de fondo 1 2 9 6 FBB. Esto se logra aclimatando primero a los ratones a la tarea de aliviar los déficits de rendimiento inducidos por el estrés. El segundo paso es utilizar la tarea de plataforma visual en la que una plataforma se eleva una pulgada por encima de la línea de flotación para evaluar el funcionamiento visual y motor.

A continuación, se llevan a cabo las pruebas de plataforma oculta en las que la plataforma se sumerge a cinco milímetros por debajo de la superficie del agua. El paso final es utilizar ensayos de sonda en los que se retira la plataforma para evaluar la memoria de referencia espacial y determinar el tipo de estrategia de búsqueda utilizada. En última instancia, este procedimiento personalizado de MA de agua permite la evaluación del aprendizaje espacial y la memoria en un modelo de ratón de la enfermedad de Alzheimer de uso común.

Por lo general, las personas nuevas en este método tendrán dificultades debido a la necesidad de optimizar los procedimientos de prueba, como el número de ensayos de entrenamiento y sondas utilizadas en función de la tensión de fondo de la línea de ratones y el entorno en el que se prueban los ratones. Esta parte del procedimiento aclimata a los ratones a la entrada y extracción de los ratones. Primero, coloque la caja de manera que se eleve a una altura cómoda y llénela con dos litros de agua a una temperatura de 21 grados centígrados y hasta un nivel de aproximadamente un centímetro.

Después de llevar a los ratones a la sala de pruebas, retire un sujeto de la jaula, verifique la identificación del sujeto y luego marque la cola con un marcador permanente no tóxico para distinguirla de los ratones que no han pasado por el procedimiento. Coloque un ratón en el vaso de precipitados de transferencia durante aproximadamente cinco segundos. A continuación, vierta suavemente el ratón fuera del vaso de precipitados en el tiempo de la piscina de premanipulación del ratón en la piscina durante 20 segundos.

Una vez transcurrido el tiempo, coloque suavemente una cuchara frente al mouse sin inclinarla. Permita que el ratón entre y explore la cuchara Si es necesario, anime al ratón a subirse a la cuchara deslizando suavemente la cuchara por debajo del ratón mientras la levanta lentamente. Tenga cuidado de no asustar a los ratones con la cuchara.

Repita estos procedimientos para cada ratón en la jaula una vez al día durante 10 días. Después de cada animal, recoja los boli fecales y la ropa de cama de la piscina, usando una red que sea el vaso de precipitados de transferencia entre jaulas. Realice un entrenamiento visible en los días uno, dos y tres de la prueba con seis pruebas cada día y aproximadamente 10 minutos entre cada prueba.

Primero, configure el software de seguimiento del rendimiento del mouse y cree las hojas de ejecución de acuerdo con las instrucciones en la parte de texto del protocolo. Una vez que el software esté configurado, configure la habitación colgando primero las cortinas para que se oscurezcan las señales espaciales. A continuación, prepare la bañera llenándola con agua del grifo a 21 grados centígrados.

Use un termómetro para asegurarse de que la temperatura del agua permanezca dentro de un grado de esta temperatura. A lo largo de las pruebas. Coloque la plataforma, que tiene una bandera montada que alcanza una altura de 13 centímetros y mide 4.5 por 4.5 centímetros con un carácter en forma de S en relieve en la primera ubicación predeterminada de la bañera, de modo que se eleve aproximadamente una pulgada por encima de la superficie del agua.

Ahora saca el primer ratón de la jaula. Verifique la identificación del sujeto, marque la cola con un marcador permanente del color correcto y colóquela en un vaso de precipitados de transferencia. Coloque suavemente el ratón en la bañera.

Inicie el temporizador y asegúrese de que el software de seguimiento esté rastreando al animal. Permita que el mouse alcance hasta dos minutos para ubicar la plataforma. Una vez que el ratón localice la plataforma, permita que el ratón permanezca 20 segundos en la plataforma.

Si el animal no logra encontrar la plataforma en el período de dos minutos, saque el ratón y colóquelo en la plataforma durante 20 segundos. Después de 20 segundos en la plataforma, retire el mouse de la plataforma como se hace en el entrenamiento de aclimatación, y colóquelo en una jaula calentada forrada con toallas de papel y caliente a aproximadamente 31 grados centígrados con una almohadilla térmica y una lámpara de calor durante 30 segundos. Luego, transfiera el mouse a la jaula de retención con solo una almohadilla térmica, pero sin una lámpara de calor para recuperarse entre ensayos.

Después de limpiar la tina de escombros con una red, repita estos pasos para cada ratón del grupo. Cuando se completa cada mouse, la primera prueba, mueva la plataforma a la segunda ubicación predeterminada. Realice el entrenamiento de plataforma oculta desde el cuarto hasta el décimo día después de colgar las cortinas.

Al igual que antes, coloque tacos estratégicamente en las cortinas. Asegúrese de que los tacos sean grandes y contengan colores contrastantes para una mejor visibilidad, y que estén configurados a una distancia y altura donde sean visibles para los ratones desde el interior de la bañera. Configure el software de acuerdo con las instrucciones de la parte escrita del protocolo.

A continuación, prepare la bañera llenándola primero con agua de modo que la plataforma quede aproximadamente cinco milímetros por debajo de la superficie del agua. Coloque la plataforma en la ubicación predeterminada. La ubicación de la plataforma seguirá siendo la misma para casi todas las pruebas durante todos los días y pruebas.

It.It es esencial variar la ubicación de inicio para que los animales no desarrollen una estrategia motora no espacial ni hipocampal. Para resolver el laberinto, use pintura blanca templada no tóxica para hacer que el agua sea opaca. Haga esto para asegurarse de que la parte superior de la plataforma sea invisible desde el nivel de los ojos del animal mientras nada.

Después de identificar y marcar a los ratones antes, vierta suavemente el ratón en el laberinto, de modo que el otorrinolaringólogo mire hacia la pared. Cada ratón se colocará en la misma ubicación de inicio para una prueba única. Al soltar el mouse por primera vez, inicie el temporizador y párese en un área donde el probador no sea fácilmente visible para los ratones.

Una vez que el animal llegue a la plataforma, permita que permanezca en la plataforma durante 15 segundos para orientar su ubicación espacial dentro de la habitación. Si el ratón no localiza la plataforma en 60 segundos, recoja suavemente el ratón y colóquelo en la plataforma. Después de 15 segundos en la plataforma, retira al ratón del laberinto y devuélvelo a la jaula climatizada.

Después de limpiar el laberinto de escombros antes, repita estos procedimientos para los ratones restantes en el grupo. Por lo tanto, para los días cuatro a nueve de la prueba, realice cuatro pruebas de entrenamiento de plataforma oculta por día con aproximadamente 20 minutos entre cada prueba. Realice pruebas de sondeo antes del entrenamiento de la plataforma en el día seis, siete y ocho, y la prueba de sondeo final.

El día 10, realice las pruebas de sondeo de manera similar al entrenamiento de plataformas ocultas, con la excepción de que no haya ninguna plataforma en el laberinto. Libere un ratón de un punto de liberación predeterminado y permita que el ratón nade 60 segundos en el laberinto Después de la prueba de sonda en el día 10, no se realizan pruebas adicionales durante las pruebas de sondeo. Utilice el software de seguimiento de animales para rastrear la longitud del camino del animal, el porcentaje de tiempo que el animal pasa en cada cuadrante del laberinto y la cantidad de veces que un animal nada sobre el área previamente cubierta con plataformas.

Abra la pestaña de la lista experimental y obtenga las mediciones de la pestaña de análisis de datos y la pestaña de laberinto de agua. Exporte directamente a una hoja de cálculo de Excel. A continuación, analice los datos de acuerdo con las instrucciones de la parte escrita del protocolo.

Se evaluaron 41 ratones TP 3 0 1 L que contenían el gen humano P 3 0 1 LTL y 46 controles utilizando este protocolo aproximadamente a los 6,5 meses de edad. Esto representa tres meses de expresión de Tau P 3 0 1 L en los transgénicos. Cada grupo contenía aproximadamente el mismo número de machos y hembras a lo largo del camino.

El entrenamiento de la plataforma invisible no difirió entre los controles y los ratones TP 3 0 1 L. Esta falta de diferencia indica que el control y el tau P 3 0 1 LM no difieren en la capacidad visual o locomotora, y que, por lo tanto, los déficits de rendimiento en las pruebas de prueba ocultas pueden atribuirse a deficiencias de la memoria. Sin embargo, durante el entrenamiento de plataforma oculta, TP 3 0 1 LM demostró longitudes de trayectoria significativamente más largas en todos los bloques de entrenamiento.

Por último, los controles mejoraron en los cuatro ensayos de sonda. Mientras que los ratones Tau P 3 0 1 L no controlaron, los ratones fueron más capaces de utilizar una estrategia espacial para resolver la tarea y aprendieron mejor a localizar la plataforma en la zona objetivo. Al adaptar este procedimiento para su uso con otras líneas de ratón, es importante evaluar la tasa de aprendizaje de los controles, identificar el número de ensayos de entrenamiento de golpeo necesarios y determinar cuándo se debe insertar el primer ensayo de sondeo.