Name: Morris Water Maze Prueba: Optimización de ratón Colar y entorno de pruebas (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2015-06-22T13:00:00.000+00:00
Duration: 10 min 24 s
Description: Aprende el protocolo del laberinto acuático de Morris optimizado para ratones modelo de Alzheimer. Este método evalúa déficits cognitivos mediante pruebas de plataforma visible, oculta y ensayos de sonda para medir memoria espacial.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Este trabajo fue apoyado por el Instituto Nacional de Ciencias Médicas Generales (Reed / Engler-Chiurazzi - U54GM104942), el Instituto Nacional de Trastornos Neurológicos y Accidentes Cerebrovasculares (Ashe - R01NS33249, R01NS63249 y R01NS79374), Cobre (Engler-Chiurazzi - P20GM109098), el Asociación de Alzheimer (Reed - NIRG-12 a 242.187), una WVU Facultad de Investigación del Senado Grant (Reed), una subvención WVU PSCOR (Reed), y los fondos internos de la Escuela WVU de la Oficina de Medicina Dean (Engler-Chiurazzi). El contenido es responsabilidad exclusiva de los autores y no representa necesariamente la opinión oficial de los NIH o la Asociación de Alzheimer.

<ol><li>Ramsden, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Age-dependent+neurofibrillary+tangle+formation%2C+neuron+loss%2C+and+memory+impairment+in+a+mouse+model+of+human+tauopathy+%28P301L%29%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Age-dependent neurofibrillary tangle formation, neuron loss, and memory impairment in a mouse model of human tauopathy (P301L).</a> The Journal of Neuroscience. 25, 10637-10647 (2005).</li>
<li>Attar, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+shortened+barnes+maze+protocol+reveals+memory+deficits+at+4-months+of+age+in+the+triple-transgenic+mouse+model+of+Alzheimer%27s+disease%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">A shortened barnes maze protocol reveals memory deficits at 4-months of age in the triple-transgenic mouse model of Alzheimer's disease.</a> PLoS One. 8, e80355(2013).</li>
<li>Johnson, J. M., Bailey, J. M., Johnson, J. E., Newland, M. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Performance+of+BALB%2Fc+and+C57BL%2F6+mice+under+an+incremental+repeated+acquisition+of+behavioral+chains+procedure%5BTitle%5D)+AND+%22Behavioural+Processes%22%5BJournal%5D)">Performance of BALB/c and C57BL/6 mice under an incremental repeated acquisition of behavioral chains procedure.</a> Behavioural Processes. 84, 705-714 (2010).</li>
<li>Crawley, J. N. What's wrong with my Mouse Behavioral phenotyping of transgenic and knockout mice. , 1st edition, Wiley-Liss. 94-95 (2000).</li>
<li>Westerman, M. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+relationship+between+abeta+and+memory+in+the+Tg2576+mouse+model+of+Alzheimer%27s+disease%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">The relationship between abeta and memory in the Tg2576 mouse model of Alzheimer's disease.</a> The Journal of Neuroscience. 22, 1858-1867 (2002).</li>
<li>D'Hooge, R., De Deyn, P. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Applications+of+the+morris+water+maze+in+the+study+of+learning+and+memory%5BTitle%5D)+AND+%22Brain+Research+Reviews%22%5BJournal%5D)">Applications of the morris water maze in the study of learning and memory.</a> Brain Research Reviews. 36, 60-90 (2001).</li>
<li>Santa Cruz, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tau+suppression+in+a+neurodegenerative+mouse+model+improves+memory+function%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Tau suppression in a neurodegenerative mouse model improves memory function.</a> Science. 309, 476-481 (2005).</li>
<li>Hunsberger, H. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effect+size+of+memory+deficits+in+mice+with+adult-onset+P301L+tau+expression%5BTitle%5D)+AND+%22Behavioural+Brain+Research%22%5BJournal%5D)">Effect size of memory deficits in mice with adult-onset P301L tau expression.</a> Behavioural Brain Research. 272, 181-195 (2014).</li>
<li>Yue, M., Hanna, A., Wilson, J., Roder, H., Janus, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sex+difference+in+pathology+and+memory+decline+in+rTg4510+mouse+model+of+tauopathy%5BTitle%5D)+AND+%22Neurobiology+of+Aging%22%5BJournal%5D)">Sex difference in pathology and memory decline in rTg4510 mouse model of tauopathy.</a> Neurobiology of Aging. 32, 590-603 (2011).</li>
<li>Sandi, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+role+and+mechanisms+of+action+of+glucocorticoid+involvement+in+memory+storage%5BTitle%5D)+AND+%22Neural+plasticity%22%5BJournal%5D)">The role and mechanisms of action of glucocorticoid involvement in memory storage.</a> Neural plasticity. 6, 41-52 (1998).</li>
<li>Hölscher, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((C.+impairs+performance+in+spatial+water+maze+learning+tasks%5BTitle%5D)+AND+%22Behavioural+Brain+Research%22%5BJournal%5D)">C. impairs performance in spatial water maze learning tasks.</a> Behavioural Brain Research. 100, 225-235 (1999).</li>
<li>Morris, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Developments+of+a+water-maze+procedure+for+studying+spatial+learning+in+the+rat%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Neuroscience+Methods%22%5BJournal%5D)">Developments of a water-maze procedure for studying spatial learning in the rat.</a> Journal of Neuroscience Methods. 11, 47-60 (1984).</li>
<li>Reed, M. N., Liu, P., Kotilinek, L. A., Ashe, K. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effect+size+of+reference+memory+deficits+in+the+morris+water+maze+in+Tg2576+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Behavioural+Brain+Research%22%5BJournal%5D)">Effect size of reference memory deficits in the morris water maze in Tg2576 mice.</a> Behavioural Brain Research. 212, 115-120 (2010).</li>
<li>Huang, Y., Zhou, W., Zhang, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Bright+lighting+conditions+during+testing+increase+thigmotaxis+and+impair+water+maze+performance+in+BALB%2Fc+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Behavioral+Brain+Research%22%5BJournal%5D)">Bright lighting conditions during testing increase thigmotaxis and impair water maze performance in BALB/c mice.</a> Behavioral Brain Research. 226, 26-31 (2012).</li>
<li>Baker, R. Water maze. , Available from: 
 <a target="_blank" href="http://www.watermaze.org">http://www.watermaze.org</a> (2013).</li>
<li>Ivonen, H., Nurminen, L., Harri, M., Tanila, H., Puolivali, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hypothermia+in+mice+tested+in+Morris+water+maze%5BTitle%5D)+AND+%22Behavioural+Brain+Research%22%5BJournal%5D)">Hypothermia in mice tested in Morris water maze.</a> Behavioural Brain Research. 141, 207-213 (2003).</li>
<li>Rubinow, M. J., Arseneau, L. M., Beverly, J. L., Juraska, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effect+of+estrous+cycle+on+water+maze+acquisition+depends+on+the+temperature+of+the+water%5BTitle%5D)+AND+%22Behavioral+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Effect of estrous cycle on water maze acquisition depends on the temperature of the water.</a> Behavioral Neuroscience. 118 (4), 863-868 (2004).</li>
</ol>

Los autores no tienen nada que revelar.

La tarea MWM es ampliamente utilizado para evaluar el aprendizaje espacial y la memoria. Sin embargo, la robustez de esta tarea puede estar influenciada por muchos factores y requiere la optimización tanto para la cepa de fondo y entorno de pruebas. Como se muestra en la Figura 4, el mismo protocolo de entrenamiento y aplicada señales visuales utilizadas en dos habitaciones de ensayo diferentes (tamaño equivalente y de diseño) produjo significativamente diferente rendimiento de la sonda. Dado que muchas...

Modelos de ratones transgénicos han sido instrumentales en la evaluación de la fisiopatología de la enfermedad de Alzheimer (AD), así como el potencial de las intervenciones terapéuticas. Tareas cognitivas, como el laberinto de agua de Morris (MWM), son comúnmente utilizados con estos modelos para identificar los correlatos moleculares de los déficits de memoria y evaluar la eficacia de los fármacos preclínicos. Es crucial, sin embargo, que el rango dinámico de la tarea cognitiva ser lo suficientemente amplia como para detectar los efectos sutiles de tratamiento. Con modelos de ratones de AD, los déficits cognitivos son típicamente dependiente de la edad, y los ratones muestran descensos progresivos en el rendimiento (por ejemplo, 1). El uso de una tarea cognitiva sensible puede permitir la detección de diferencias sutiles temprano en la vida del animal, reduciendo así los costos asociados con el envejecimiento de los animales. Por ejemplo, reducir el número de ensayos de entrenamiento en los Barnes dependiente del hipocampo laberinto de 15 a 5 aumentó la dificultad de la tarea, lo que resulta en el detección de déficits en el modelo 3xTg a una edad más temprana que se informó anteriormente 2. La detección temprana de los déficits no sólo ofrece un considerable ahorro de tiempo y costes, sino que también aumenta la probabilidad de que los cambios moleculares que subyacen a los déficits cognitivos pueden ser identificados. Uno de los factores que influyen en la sensibilidad de las tareas cognitivas es la genética cepa fondo del modelo de ratón. Por ejemplo, los ratones BALB / c exhiben un rendimiento superior en las tareas de aprendizaje y memoria en comparación con otras cepas, tales como la C57BL / 6 3. La F1 FVB / N x 129S6 fondo se utiliza para dos de los modelos más ampliamente empleadas de la EA, la Tg2576 y RTG (TauP301L) 4510 modelos. Esta cepa exhibe la capacidad de aprendizaje superior en el MWM en relación con otras cepas, incluyendo B6 ratones SJL / 4. Debido a esta capacidad de aprendizaje superior, el uso de una única sonda después de una amplia formación puede enmascarar diferencias grupo resultante de un exceso de formación. Además, la SENSIBILIDADy de los ensayos de la sonda puede ser dependiente de la edad. Hemos demostrado anteriormente que los ensayos de sondas anteriores, después del entrenamiento plataforma oculta limitado, son más sensibles a las diferencias en la joven Tg2576 comparación con jóvenes controles littermate-transgénicos negativo que son ensayos de sondas insertadas después de más amplia capacitación 5. Por el contrario, los ensayos de sonda siguientes amplia formación son más sensibles en los mayores (20-25 meses) en comparación con los ratones Tg2576 camada son mayores de ensayos de sondas anteriores 5. Por intercalando ensayos de sonda a lo largo de la formación, la probabilidad de que un ensayo sensible será identificado se incrementa, sobre todo si la prueba se realiza longitudinal y la sensibilidad de un ensayo de sonda en particular es dependiente de la edad. La Figura 1 muestra el rendimiento superior de F1 FVB / N x ratones 129S6 bajo el protocolo optimizado para esta cepa en comparación con los ratones de los antecedentes B6 / SJL entrenado bajo un protocolo con una formación más amplia. El MWM espensado generalmente para proporcionar medidas confiables que son reproducibles en todo tiempo y laboratorios 6. Por ejemplo, el protocolo primario originalmente utilizado por nuestro laboratorio de 1,7 Minnesota se aplicó con éxito, con modificaciones menores en West Virginia University 8. Del mismo modo, se observaron niveles equivalentes de deterioro en RTG (TauP301L) 4,510 ratones relación con el control de camada si alojados en condiciones libres de patógenos o convencionales 9. Sin embargo, el entorno de prueba puede influir en la sensibilidad de la tarea MWM. Factores tales como la iluminación de la habitación, las salidas de aire, los gradientes de temperatura y ruidos contribuyen a señales ambientales 4 que en última instancia pueden influir en el rendimiento. Cuando nuestro laboratorio y vivero de Minnesota fueron trasladados a un nuevo edificio, hasta una reducción del 38% en el rendimiento de tipo salvaje se observó, lo que reduce considerablemente el rango dinámico de la tarea y la capacidad de detectar los déficits relacionados con transgenes. Este cambio en el performance ocurrió a pesar de el diseño de la sala de pruebas para ser de tamaño y configuración equivalente, y utilizando las mismas claves visuales aplicadas. Un &quot;re-optimización&quot; del protocolo original se requiere para aumentar el rango dinámico de la tarea MWM en el nuevo entorno de prueba. Aquí el protocolo original adaptado para su uso con la F1 FVB / N x 129S6 fondo 5 se describe. Debido a que algunos estudios sugieren estrés está asociado con pobre desempeño MWM 10 y pre-tratamiento puede aliviar este déficit inducido por estrés en el rendimiento de 11, un protocolo de pre-tratamiento fue diseñado para aclimatar los ratones a la introducción y la eliminación de la piscina antes de la prueba MWM . Después de pre-tratamiento, los ratones sometidos a entrenamiento plataforma visible, en el que una plataforma elevada está marcado con una bandera. Capacitación plataforma visible se utiliza para identificar los ratones con problemas de rendimiento relacionados con anomalías sensoriomotoras. El uso de los criterios de exclusión descritos en la protsección ocol, ratones rendimiento incompetente se eliminan de los exámenes posteriores de los ensayos de formación de la plataforma y de la sonda ocultos. Deficiencias en los ensayos de formación de la plataforma y de la sonda ocultos se interpretan como déficits cognitivos porque el rendimiento sensoriomotor es factor de los datos. Después de la terminación de la formación plataforma visible, los ratones comienzan la formación plataforma oculta donde la plataforma se sumerge en agua y permanece en la misma posición relativa a las señales externas. Ensayos en los que se elimina la plataforma (ensayos de sonda) se intercalan a lo largo de la formación plataforma oculta para evaluar la influencia de la formación adicional. Dado que los ensayos de sondas se producen al comienzo de cada día, antes del entrenamiento plataforma oculta adicional, ensayos de sondas miden la capacidad del animal para recordar la localización de la plataforma después de un retardo de 20 hr, considerada una medida de la memoria de referencia 12. Finalmente, formas en que fue re-optimizados este protocolo original cuando los cambios en el entorno de pruebasse describen el rendimiento del control perturbado.

<table><tbody><tr><td>Visor Software de seguimiento</td><td>Biobserve</td><td></td><td>Este software en particular no es un requisito: hay otros sistemas de seguimiento disponibles</td></tr><tr><td>Piscina</td><td></td><td></td> de premanipulación <td>Dimensiones: aproximadamente 1 pie de ancho x 2 pies de largo x 1,5 pies de profundidad</td></tr><tr>Vaso <td></td><td></td> de<td>precipitados de plástico</td><td>1</td></tr><tr><td>L Scoop</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Red</td><td></td><td></td><td></td></tr> <tr>pequeña<td>Cronómetro</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Témpera</td><td></td><td></td> blanca no tóxica <td>Se puede utilizar cualquier color de pintura; sin embargo, la mayoría de los programas de software de seguimiento requieren que la pintura contraste con el color del animal.</td></tr><tr><td>Plataforma</td><td></td><td></td> visible <td>El color debe contrastar con el del laberinto</td></tr><tr><td>Barra</td><td></td><td></td><td></td>de cortina</tr><tr><td>Cortinas</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Bañera</td><td></td><td></td> circular <td>Por lo general, de color blanco; aproximadamente 4 pies de diámetro</td></tr><tr><td>Plataforma</td><td></td><td></td> oculta <td>Pintado del mismo color que el agua</td></tr></tbody></table>

morris water maze prueba: optimización de ratón colar y entorno de pruebas

Morris Water Maze Test: Optimization for Mouse Strain and Testing Environment

El laberinto acuático de Morris (MWM) es una tarea comúnmente utilizada para evaluar el aprendizaje espacial y la memoria dependientes del hipocampo en modelos de enfermedades de ratones transgénicos, incluidos los trastornos neurocognitivos como la enfermedad de Alzheimer. Sin embargo, la cepa de fondo del modelo de ratón utilizado puede tener un efecto sustancial en el fenotipo de comportamiento observado, ya que algunas cepas exhiben una capacidad de aprendizaje superior en relación con otras. Para garantizar que se puedan detectar las diferencias entre los ratones transgénicos negativos y los ratones transgénicos positivos, es esencial identificar un procedimiento de entrenamiento sensible a la cepa de fondo. Si no se adapta el protocolo MWM a la cepa de fondo del modelo de ratón, se puede producir un entrenamiento insuficiente o excesivo, enmascarando así las diferencias de grupo en los ensayos de sonda. Aquí, se describe un protocolo MWM adaptado para su uso con el fondo F1 FVB/N x 129S6. Se trata de una cepa de fondo utilizada con frecuencia para estudiar los efectos dependientes de la edad de los ratones mutantes P301L tau (rTg(TauP301L)4510) sobre los déficits de memoria asociados con la enfermedad de Alzheimer. También se describe una estrategia para volver a optimizar, según lo dictado por el entorno de prueba particular utilizado.

Hemos utilizado el laberinto acuático de Morris para estudiar los efectos de beta-amiloide (ratones Tg2576) y mutante tau P301L (RTG (TauP301L) 4,510 ratones) en la memoria de referencia espacial (por ejemplo, 1,5,7,8). Figura 3 es el resultado representante informó en nuestro estudio que examinó el efecto de comienzo adulto expresión tau P301L en el aprendizaje y la memoria 8, utilizando pruebas de Medio Ambiente A. Evaluar las capacidades motoras y visuales, los ratones ...

Este manuscrito describe un protocolo de laberinto acuático de Morris (MWM) adaptado para su uso con un modelo de ratón de la enfermedad de Alzheimer de uso común. El MWM es ampliamente utilizado en modelos de ratones transgénicos. La implementación de un procedimiento sensible a la cepa de fondo del modelo de ratón es esencial para detectar diferencias de grupo.

Morris Water Maze Prueba: Optimización de ratón Colar y entorno de pruebas

 The Morris water maze (MWM) is a commonly used task to assess hippocampal-dependent spatial learning and memory in transgenic mouse models of disease, ...

El objetivo de este procedimiento es identificar déficits cognitivos en un modelo murino de la enfermedad de Alzheimer mediante el uso de un protocolo de laberinto acuático de Morris, adaptado para su uso con la cepa de fondo 1 2 9 6 FBB. Esto se logra primero aclimatando a los ratones a la tarea para aliviar los déficits de desempeño inducidos por el estrés. El segundo paso consiste en utilizar la tarea de la plataforma visual, en la cual una plataforma se eleva una pulgada por encima del nivel del agua para evaluar la función visual y motora.A continuación, se realizan las pruebas con la plataforma oculta, en las que la plataforma se sumerge cinco milímetros por debajo de la superficie del agua. El paso final consiste en utilizar pruebas de sondeo, en las que se retira la plataforma para evaluar la memoria espacial de referencia y determinar el tipo de estrategia de búsqueda utilizada. En definitiva, este procedimiento de MAs en agua adaptado permite evaluar el aprendizaje espacial y la memoria en un modelo murino comúnmente utilizado de la enfermedad de Alzheimer.Generalmente, las personas nuevas en este método tendrán dificultades debido a la necesidad de optimizar los procedimientos de prueba, como la cantidad de ensayos de entrenamiento y las sondas utilizadas, según la cepa genética de referencia de la línea de ratones y el entorno en el que se prueban los animales. Esta parte del procedimiento sirve para acostumbrar a los ratones a la entrada y extracción manual. Primero, coloque la caja a una altura elevada que resulte cómoda, y llénela con dos litros de agua a una temperatura de 21 grados Celsius y a un nivel de aproximadamente un centímetro.Después de llevar los ratones a la sala de pruebas, retire un sujeto de la jaula, verifique la identificación del sujeto y marque luego la cola con un marcador permanente no tóxico para distinguirlo de los ratones que aún no han pasado por el procedimiento. Coloque un ratón en el vaso de transferencia durante aproximadamente cinco segundos. A continuación, vierta suavemente el ratón fuera del vaso hacia la piscina, y mida el tiempo previo al manejo que el ratón permanece en la piscina durante 20 segundos.Una vez transcurrido el tiempo, coloque suavemente una pala delante del ratón sin inclinarla. Permita que el ratón entre y explore la pala. Si es necesario, anime al ratón a subirse a la pala deslizándola suavemente debajo del animal mientras lo levanta lentamente. Tenga cuidado de no asustar al ratón con la pala.Repita estos procedimientos para cada ratón en la jaula una vez al día durante 10 días. Después de cada animal, recoja las heces y el enriquecimiento del recipiente utilizando una red, manteniendo el vaso de transferencia entre jaulas. Realice el entrenamiento visible los días de prueba uno, dos y tres, con seis ensayos cada día y aproximadamente 10 minutos entre cada ensayo.Primero, configure el software de seguimiento del desempeño del ratón y cree las hojas de registro según las instrucciones de la sección de texto del protocolo. Una vez configurado el software, prepare la habitación colgando cortinas para que cualquier indicio espacial quede oculto. A continuación, prepare la tina llenándola con agua del grifo a 21 grados Celsius.Utilice un termómetro para asegurarse de que la temperatura del agua permanezca dentro de un grado de esta temperatura durante toda la prueba. Coloque la plataforma, que tiene una bandera montada que alcanza una altura de 13 centímetros y mide 4,5 por 4,5 centímetros, con un carácter en forma de S en negrita en relieve, en la primera ubicación predeterminada de la tina, de modo que sobresalga aproximadamente una pulgada por encima de la superficie del agua.Ahora tome el primer ratón de la jaula. Verifique la identificación del sujeto, marque la cola utilizando un rotulador permanente del color correcto y colóquelo en un vaso de precipitados de transferencia. Coloque suavemente al ratón en la tina.Inicie el temporizador y asegúrese de que el software de seguimiento esté rastreando al animal. Permita que el ratón hasta dos minutos para localizar la plataforma. Una vez que el ratón encuentre la plataforma, permita que permanezca 20 segundos sobre ella.Si el animal no logra encontrar la plataforma en el período de dos minutos, retire el ratón y colóquelo sobre la plataforma durante 20 segundos. Tras 20 segundos sobre la plataforma, retire el ratón de la misma como se hizo durante el entrenamiento de aclimatación, y colóquelo en una jaula calentada forrada con toallas de papel y mantenida a aproximadamente 31 grados Celsius mediante una almohadilla calefactora y una lámpara de calor durante 30 segundos. A continuación, transfiera el ratón a la jaula de espera con solo una almohadilla calefactora, pero sin lámpara de calor, para que se recupere entre ensayos.Después de limpiar el recipiente de escombros con una red, repita estos pasos para cada ratón del grupo. Cuando se complete cada ratón, en el primer ensayo, mueva la plataforma a la segunda ubicación predeterminada. Realice el entrenamiento con plataforma oculta desde el día cuatro hasta el diez después de colgar las cortinas.Como antes, coloque las señales estratégicamente en las cortinas. Asegúrese de que las señales sean grandes y contengan colores contrastantes para una mejor visibilidad, y colóquelas a una distancia y altura desde donde sean visibles para los ratones desde dentro del recipiente. Configure el software según las instrucciones incluidas en la parte escrita del protocolo.Luego prepare el recipiente llenándolo primero con agua de manera que la plataforma quede aproximadamente cinco milímetros por debajo de la superficie del agua. Coloque la plataforma en la ubicación predeterminada. La ubicación de la plataforma permanecerá igual para casi todos los ensayos realizados durante todos los días y pruebas.Es esencial variar la ubicación de inicio para que los animales no desarrollen una estrategia motriz no espacial y no dependiente del hipocampo. Para resolver el laberinto, utilice pintura blanca temperada no tóxica para hacer que el agua sea opaca. Haga esto para asegurar que la parte superior de la plataforma sea invisible desde el nivel de los ojos del animal mientras nada.Después de identificar y marcar los ratones previamente, vierta suavemente al ratón en el laberinto, orientando el oído externo (ENT) hacia la pared. Cada ratón se colocará en la misma posición inicial para un ensayo único. Al soltar inicialmente al ratón, active el cronómetro y colóquese en un lugar donde el evaluador no sea fácilmente visible para los ratones.Una vez que el animal alcance la plataforma, permítale permanecer en ella durante 15 segundos para orientar su ubicación espacial dentro de la habitación. Si el ratón no localiza la plataforma en 60 segundos, colóquelo suavemente sobre la plataforma. Tras 15 segundos en la plataforma, retire al ratón del laberinto y devuélvalo a la jaula calentada.Después de limpiar el laberinto de escombros previamente, repita estos procedimientos para los ratones restantes en el grupo. Por lo tanto, para los días de prueba del cuatro al nueve, realice cuatro ensayos de entrenamiento con plataforma oculta por día con aproximadamente 20 minutos entre cada ensayo. Realice ensayos de sonda antes del entrenamiento con plataforma en los días seis, siete y ocho, y el ensayo de sonda final.El día 10, realice las pruebas de sondeo de manera similar al entrenamiento con plataforma oculta, con la excepción de que no hay plataforma en el laberinto. Suelte un ratón desde un punto de liberación predeterminado y permita que nade durante 60 segundos en el laberinto. Tras la prueba de sondeo del día 10, no se realizan más pruebas durante las sesiones de sondeo. Utilice el software de seguimiento de animales para registrar la longitud del recorrido del animal, el porcentaje de tiempo que el animal pasa en cada cuadrante del laberinto y el número de veces que el animal nada sobre la zona donde anteriormente se ubicaba la plataforma.Abra la pestaña de lista experimental y obtenga las mediciones desde la pestaña de análisis de datos y la pestaña del laberinto acuático. Exporte directamente a una hoja de cálculo de Excel. Luego analice los datos según las instrucciones en la sección escrita del protocolo.Se probaron 41 ratones TP 3 0 1 L que contienen el gen humano P 3 0 1 LTL y 46 controles utilizando este protocolo a una edad aproximada de 6,5 meses. Esto representa tres meses de expresión de la proteína Tau P 3 0 1 L en los ratones transgénicos. Cada grupo contenía aproximadamente igual número de machos y hembras según la longitud del trayecto.El entrenamiento con plataforma invisible no mostró diferencias entre los controles y los ratones TP 3 0 1 L. Esta ausencia de diferencias indica que los controles y los ratones tau P 3 0 1 LM no difieren en capacidades visuales o locomotoras, y que, por lo tanto, los déficits de desempeño en las pruebas con plataforma oculta pueden atribuirse a alteraciones de la memoria. Sin embargo, durante el entrenamiento con plataforma oculta, los ratones TP 3 0 1 LM mostraron longitudes de recorrido significativamente más largas en todos los bloques de entrenamiento.Finalmente, los controles mejoraron a lo largo de los cuatro ensayos de sonda. Mientras que los ratones Tau P 3 0 1 L no controlados no fueron capaces de utilizar una estrategia espacial para resolver la tarea, los controles mostraron una mayor capacidad para emplear dicha estrategia y habían aprendido mejor cómo localizar la plataforma en la zona objetivo. Al adaptar este procedimiento para su uso con otras líneas de ratones, es importante evaluar la tasa de aprendizaje de los controles, identificar el número de ensayos de entrenamiento necesarios y determinar cuándo debe incluirse el primer ensayo de sonda.

morris-water-maze-test-optimization-for-mouse-strain-testing

Research

Investigación

JoVE Journal

Behavior

Comportamiento

El laberinto acuático de Morris es una herramienta de gran aceptación para documentar la participación del hipocampo en una tarea de comportamiento.

Agua Morris laberinto Experimento

El laberinto Lashley III es una tarea de la ruta de aprendizaje que no se basa en estímulos adversos o las señales visuales. Por tanto, es una opción muy atractiva para evaluar el aprendizaje y la memoria, especialmente en los ratones envejecidos o de otra manera donde el estrés es un factor.

De baja tensión Ruta de Aprendizaje Usando el laberinto Lashley III en ratones

Variantes de agua poco profundos (para niños) de las pruebas de laberinto de agua en ratones

El laberinto acuático de Morris es una tarea para poner a prueba el comportamiento dependiente del hipocampo aprendizaje y la memoria. Ha sido ampliamente utilizada en el estudio de la neurobiología, la neurofarmacología y trastornos neurocognitivos en modelos de roedores.

Agua Morris laberinto de prueba para los déficits de aprendizaje y memoria en ratones de Alzheimer modelo de enfermedad

Deterioro cognitivo como resultado de la gestión de radioterapia de los tumores cerebrales representa una condición clínicamente intratable que afecta negativamente a la calidad de vida. La capacidad de evaluar críticamente las posibles intervenciones para aminorar inducidos por la radiación disminuye cognitivo depende en última instancia la capacidad para llevar a cabo rigurosas evaluaciones cuantitativas de la cognición.

Disminuye la cuantificación cognitivos causados ​​por la radioterapia craneal

El secano Barnes laberinto es ampliamente utilizado para medir la capacidad de navegación espacial en respuesta a estímulos aversivos ligeramente. Durante días consecutivos, el rendimiento (por ejemplo, la latencia para localizar huida jaula) de los sujetos de control mejora, indicativo de aprendizaje normal y la memoria. Las diferencias entre las ratas y ratones necesitan aparatos y la metodología de los cambios que se detallan aquí.

Barnes Maze estrategias de ensayo con pequeñas y grandes modelos de roedores

Una batería de pruebas de comportamiento integral de las habilidades motoras, estado de ánimo, incluyendo la interacción social, depresión y ansiedad — y cognición está diseñada para la evaluación repetida de cambios de comportamiento relacionados con la neurodegeneración en ratones.

Una batería de pruebas de comportamiento para la evaluación repetida de la motricidad, humor y cognición en ratones

Aquí, se describe un protocolo para llevar a cabo las pruebas de laberinto de agua Morris para evaluar la capacidad de aprendizaje y memoria de los ratones modelo de la enfermedad de Alzheimer y para evaluar el efecto de la acupuntura manual para tratarlos.

Análisis de la capacidad de aprendizaje y memoria en un modelo de ratón de la enfermedad de Alzheimer usando el laberinto de agua Morris

Aquí, presentamos un protocolo para inducir hipoxia en ratones neonatos administrándolos en ambientes controlados con diferentes concentraciones de oxígeno. Los modelos de ratón sometidos a variaciones de oxígeno al nacer han variado de forma duradera la expresión de miRNAs implicados en la inducción de cambios fenotípicos del comportamiento como el autismo.

La hipoxia altera los niveles de miRNAs implicados en la herencia no mendeliana del trastorno del espectro autista en ratones

El laberinto de agua radial de ocho brazos está diseñado para evaluar el rendimiento de la memoria de referencia y de trabajo simultáneamente al requerir que los sujetos usen señales extra-laberinto para localizar plataformas de escape y remedia las limitaciones observadas en los diseños de laberintos de brazos radiales terrestres.

Uso de un laberinto acuático radial de ocho brazos para evaluar la memoria de trabajo y de referencia después de una lesión cerebral neonatal

Aprende el protocolo del laberinto acuático de Morris optimizado para ratones modelo de Alzheimer. Este método evalúa déficits cognitivos mediante pruebas de plataforma visible, oculta y ensayos de sonda para medir memoria espacial.

Morris Water Maze Prueba: Optimización de ratón Colar y entorno de pruebas

Explorar más videos