Name: El uso del Sistema de Teton para estudiar los mecanismos moleculares de la regeneración de pez cebra (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2015-06-25T13:00:00.000+00:00
Duration: 10 min 22 s
Description: Aprende a utilizar el sistema TetON en Danio rerio para lograr expresión génica condicional y específica de tejido durante la regeneración de la aleta caudal mediante administración de doxiciclina.

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Los autores agradecen a Christa Haase, Doris Weber y Brigitte Korte para la asistencia técnica. El trabajo en el laboratorio Weidinger el apoyo de subvenciones de la Deutsche Forschungsgemeinschaft WE 4223 / 3-1, WE 4223 / 4-1 y por la Deutsche Gesellschaft für Kardiologie través de un Oskar-Lapp-Stipendium y Klaus-Georg-und-Sigrid- Hengstberger-Forschungsstipendium.

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Los autores no tienen nada que revelar.

El pez cebra adulto tiene una asombrosa capacidad para regenerar con éxito a muchos órganos y apéndices internos. Un conocimiento profundo de los mecanismos moleculares y celulares implicados requiere un análisis específico de tejido de las funciones de genes y vías de señalización. Hacia esto, el sistema de Teton ofrece una herramienta eficaz para la expresión génica espaciotemporalmente controlada en el pez cebra embrionarias y adultas. Las construcciones del sistema de Teton y la metodología descritos en este manuscr...

El pez cebra es un organismo vertebrado modelo bien establecido para estudiar muchos aspectos del desarrollo, fisiología, la enfermedad, y la regeneración. Con la creciente adopción de pez cebra como modelo para los procesos biológicos post-embrionarias, herramientas experimentales para la manipulación inducible, específico de tejido de la expresión génica o vías de señalización se han convertido cada vez más importante. En particular, los estudios sobre la regeneración de órganos y apéndice en el pez cebra adultos han sufrido de una falta de herramientas para la disección de los requisitos de espacio-temporales de las vías de señalización durante estos procesos regenerativos. Actualmente, tres sistemas diferentes se han utilizado para lograr condicional, expresión específica de tejido del gen en la regeneración de órganos del pez cebra adultos: el sistema Cre-lox, la expresión mosaico de choque térmico transgenes inducibles utilizando transgénesis somática mediada por transposón, y el sistema de téton 1 -3. Téton refiere a una variante de una tetraciclina-contsistema de activación transcripcional laminado, donde se activa la expresión en presencia del antibiótico tetraciclina o un derivado, por ejemplo, doxiciclina. El sistema Cre-lox, ya que hasta ahora se ha utilizado en peces adultos, se basa en una recombinasa Cre controlada por tamoxifeno (CreERT2), cuya expresión está restringida espacialmente por elementos reguladores específicos de tejido. Eliminación impulsado por Cre de un casete de STOP facilita la expresión del gen de interés dirigido por un promotor que debe ser activo en todos los tipos celulares 1. Creación transposón mediada de transgenes somáticas mosaically expresadas proporciona un sistema para la expresión del transgén inducible en linajes de células individuales. La inyección de embriones de pez cebra con un transposón Tol2 que lleva un gen de interés bajo el control transcripcional de un promotor de choque térmico resultados en individuos quiméricos típicamente llevan el transgén sólo en linajes de células discretas de un órgano de regeneración 2. Mientras que ambos sistemas permiten condicional tejido-spela expresión génica especí-, el sistema Cre-lox no es reversible, y la estrategia de etiquetado usando clonal basado en transposón sufre de su naturaleza estocástica. Por lo tanto, nosotros y otros han adaptado recientemente sistemas Teton transgénicas para su uso en el pez cebra, que facilitan temporal y la expresión génica controlada espacialmente que está en sintonizable Además y reversible 3-5. El sistema de Teton utilizado aquí comprende una línea piloto transgénico (TetActivator) en el que un doxiciclina (DOX) activador transcripcional inducible (mejoró transactivador de tetraciclina inversa, irtTA, corta TETA) está bajo el control de secuencias reguladoras genómicas específicas de tejido. En segundo lugar, se requiere una línea transgénica respondedor (TetResponder) que alberga un gen de interés bajo el control transcripcional del operador de tetraciclina (Tet elemento de respuesta; Tetre) (Figura 1A). Por lo tanto, el uso de combinaciones específicas de TetActivator y TetResponder líneas permite condicional tejido-específicaFIC manipulación de la expresión génica. Hemos utilizado recientemente el sistema téton para sondar para las funciones específicas de tejido de señalización Wnt / beta-catenina en el adulto regeneración de cola de pez cebra de la aleta 3. En el protocolo descrito aquí se describe un flujo de trabajo para la puesta a punto y la utilización del sistema de Teton en el pez cebra, en particular, para el estudio de la regeneración de la aleta. Esto incluye instrucciones detalladas sobre cómo generar líneas TetActivator y TetResponder transgénicas estables y un protocolo para la inducción del transgen en embriones de pez cebra y adulto. Además, se describen técnicas para la verificación de la expresión génica específica de tejido en los regenerados aleta, incluyendo un protocolo para la preparación de criosecciones de aletas de pez cebra adultos. Adicionalmente, se discuten consideraciones para el diseño del transgén TetActivator, la elección de un método de transgénesis, y detección de la expresión TetResponder. Por lo tanto, el objetivo general de este protocolo es la de servir como modelopara el establecimiento de un sistema de seguimiento téton funcional en el pez cebra para lograr la expresión de genes condicional específica de tejido, que se puede aplicar a cualquier tejido de interés. Hemos creado un vector TetActivator permitiendo I-SCE o la generación mediada Tol2 de líneas TetActivator estables utilizando secuencias reguladoras genómicas cortas (fragmentos potenciador; Weidinger base de datos plásmido laboratorio no 1247;. Figura 1B). Este constructo contiene un casete TetActivator que consiste en la variante mutante M2 del dominio inverso represor Tet fusionado con el virus Herpes simplex VP16 transactivación-dominio derivado 3F [irtTAM2 (3F)]. Expresión de la TetActivator (TETA) se puede monitorizar fácilmente ya que es co-expresada con la AmCyan fluoróforo desde el mismo marco de lectura abierto; un péptido p2a media saltar ribosomal, que debería dar lugar a la producción de la Teta y AmCyan como proteínas separadas en una relación 1: 5,6 1. El constructo también contiene un poylinker 5 &#39;de la TetActivator casete para facilitar la inserción de secuencias reguladoras genómicas de interés usando métodos de clonación convencionales. Además, hemos creado un constructo que consiste en el casete descrito anteriormente TetActivator además de un casete de selección de kanamicina (Weidinger base de datos plásmido laboratorio no 1180;. Figura 1C), que puede ser recombinado en un cromosoma artificial bacteriano (BAC) que contiene una gran región genómica ( por lo general en el codón de inicio de un gen cuya expresión patrón es para ser imitado por el transgén). Ambas construcciones están disponibles en el laboratorio de Weidinger bajo petición.

<table><tbody><tr><td>Cajas de cría</td><td>Aqua Schwarz</td><td>AquaBox 1</td><td></td></tr><tr><td>Microscopio fluorescente compuesto</td><td>, p. ej., Leica, Zeiss</td><td>varía según el fabricante</td><td>para obtener imágenes de secciones de tejido fluorescentes</td></tr><tr><td>Microscopio confocal</td><td>, p. ej., Leica, Zeiss</td><td>varía según el fabricante</td><td>para obtener imágenes de secciones de tejido fluorescentes</td></tr><tr><td>Cryostat</td><td>, p. ej., Leica, Thermo-Scientific</td><td>varía según el fabricante</td><td>para la criosección</td></tr><tr><td>de 4', 6-diamidino-2-fenilinodol (Dapi)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>D9542</td><td>uso 1/5.000 en PBS para la visualización de núcleos</td></tr><tr><td>Doxiciclina</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>D9891</td><td>prepara existencias en 50% EtOH a 50 mg/ml (97 mM) para la inducción de TetResponder</td></tr><tr><td>Paraformaldehído (PFA)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>P6148</td><td>4% (p/v) de paraformaldehído en PBS, pH 7,5 para la fijación</td></tr><tr><td>1x Solución salina tampón de fosfato (PBS)</td><td></td><td></td><td>1,7 mM KH2PO4, 5,2 mM Na2HPO4, 150 mM NaCl, pH 7,5</td></tr><tr><td>1x solución salina tampón de fosfato + Tween 20 (PBT)</td><td></td><td></td><td>1x PBS con 0,1% de</td></tr><tr><td>portaobjetos de microscopio de adhesión Tween 20 Superfrost Ultra Plus</td><td>Thermo Scientific&nbsp;</td><td>1014356190</td><td>para la recolección de secciones de tejido</td></tr><tr><td>Microscopio fluorescente estereoscópico</td><td>, p. ej., Leica, Zeiss</td><td>varía según el fabricante</td><td>para el genotipado basado en fluorescencia</td></tr><tr><td>Termociclador</td><td>, p. ej., Biorad, Applied Biosystems</td><td>varía según el fabricante</td><td>para el genotipado basado en PCR</td></tr><tr><td>Medio de congelación de tejidos (TFM)</td><td>Triangel Biomedical Sciences</td><td>TFM-C</td><td>para la inclusión de tejidos </td></tr><tr><td>muestras de tricaína (L-etil-m-amino-benzoato-sulfonato de metano/MS-222)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>E10521</td><td>para anestesia uso a 1 mg/ml en medio embrionario E3</td></tr></tbody></table>

el uso del sistema de teton para estudiar los mecanismos moleculares de la regeneración de pez cebra

Use of the TetON System to Study Molecular Mechanisms of Zebrafish Regeneration

El pez cebra se ha convertido en un organismo modelo muy importante para estudiar el desarrollo de los vertebrados, la fisiología, las enfermedades y la regeneración de tejidos. Una comprensión profunda de los mecanismos moleculares y celulares involucrados requiere herramientas experimentales que permitan la manipulación inducible y específica de tejido de la expresión génica o las vías de señalización. Por lo tanto, nosotros y otros hemos adaptado recientemente el sistema TetON para su uso en el pez cebra. El sistema TetON facilita la expresión génica controlada temporal y espacialmente, y recientemente hemos utilizado esta herramienta para investigar las funciones específicas de los tejidos de la señalización de Wnt/beta-catenina durante la regeneración de la aleta de la cola del pez cebra. Aquí describimos el flujo de trabajo para usar el sistema TetON para lograr la expresión génica inducible y específica del tejido en la aleta de la cola del pez cebra adulto en regeneración. Esto incluye la generación de líneas transgénicas estables TetActivator y TetResponder, la inducción de transgenes y técnicas para la verificación de la expresión génica específica de tejido en la aleta regenerada. Por lo tanto, este protocolo sirve como modelo para establecer un sistema TetON funcional en el pez cebra y su posterior uso, en particular para estudiar la regeneración de las aletas.

Establecer un sistema de Teton funcional para la expresión génica inducible específico de tejido, TetActivator transgénicos y líneas TetResponder necesitar ser generado (Figura 1A). Esto se logra mediante la microinyección de TetActivator (Figura 1B - C) o TetResponder (Figura 1E) constructos en embriones de pez cebra temprana y posterior integración de la línea germinal. Construcciones TetActivator funcionales pueden ser generados ya sea por clonación ...

Aquí describimos el flujo de trabajo para usar el sistema TetON para lograr la expresión génica específica del tejido en la aleta de la cola del pez cebra adulto en regeneración.

El uso del Sistema de Teton para estudiar los mecanismos moleculares de la regeneración de pez cebra

The zebrafish has become a very important model organism for studying vertebrate development, physiology, disease, and tissue regeneration. A thorough ...

El objetivo general de este procedimiento es establecer un sistema TED funcional en pez cebra para lograr una expresión génica específica de tejido y condicional, como se demuestra en esta video con la aleta caudal en regeneración. Esto se logra primero generando líneas transgénicas de activador Tet que expresan un activador transcripcional inducible por tetraciclina marcado con am cyan en el tejido de interés, y líneas transgénicas de respuesta Tet que contienen un gen de interés con etiqueta ype bajo el control de elementos responsivos a Tet. A continuación, se establecen combinaciones específicas de peces doble transgénicos Tet activador y Tet respuesta.Luego, se induce la expresión del transgén regulado por Tet específica para el tejido mediante la administración de doxiciclina. Finalmente, se verifica la expresión del transgén regulado por Tet mediante la preparación de secciones de tejido de los rebrotes de aleta. En última instancia, se utiliza inmunofluorescencia para visualizar la expresión del transgén regulado por Tet específica para el tejido.La principal ventaja de esta técnica frente a otros métodos, como la expresión génica inducida por choque térmico, es que el sistema deed on permite una expresión génica inducible y reversible de manera específica para cada tejido. Este método puede ayudar a obtener una comprensión más profunda de las redes de señalización molecular que guían la regeneración de la aleta de pez S, ya que permite el análisis de la vía de señalización y la función génica en tejidos individuales. Aunque utilizamos esta tecnología para estudiar la regeneración de aletas en pez cebra, también puede ser fundamental en muchos otros contextos que requieran la manipulación específica de la función génica en tejidos.Después de generar líneas de peces respondedores a Tet según el protocolo descrito, evalúe la integración en la línea germinal y la inducibilidad del transgén mediante el cruce de peces individuales de la generación cero con una línea previamente establecida de activador Tet. Luego, recolecte embriones y críelos hasta una etapa en la que se pueda evaluar la inducción del respondedor Tet. Prepare una solución stock de doxiciclina 2000 x utilizando etanol al 50 % para disolver dox para obtener una concentración de 50 miligramos por mililitro.Almacene alícuotas de docks protegidas de la luz a menos veinte grados Celsius. A continuación, prepare el medio para embrión E tres que contenga docks a una concentración final de 25 microgramos por mililitro. Luego, deseche la mayor parte del medio E tres de los embriones.Sustitúyalo por dos conteniendo medio E3 y devuelva los embriones a 28,5 grados Celsius durante un mínimo de seis horas. Tras la incubación, utilice un microscopio estereoscópico fluorescente para seleccionar embriones con fluorescencia Y pet. Establezca varias líneas transgénicas estables de respuesta Tet a partir de los fundadores recién identificados.Seleccione líneas que induzcan fuertemente y muestren poca mosaicidad dentro del dominio de expresión esperado, así como poca variación entre embriones individuales. Una vez establecidas las líneas de peces con el activador Tet y el respondedor Tet, cruce portadores del activador Tet con portadores del respondedor Tet para generar transgénicos dobles. Seleccione embriones que porten el transgén del activador Tet mediante la detección de fluorescencia cian am en un microscopio estereoscópico, y críe los embriones positivos para cian am hasta la edad adulta.Identifique peces adultos doble transgénicos que porten el sistema Tet responder además del activador Tet mediante genotipificación basada en PCR o por su capacidad para inducir la expresión del Tet Responder en el tejido de interés para realizar la amputación de la aleta caudal. Anestesie el pez cebra adulto en un vaso de precipitados lleno con agua para peces que contenga 160 microgramos por mililitro de trica. Cuando el pez deje de moverse, utilice pinzas para transferirlo cuidadosamente sobre una placa de Petri invertida y use un escalpelo para realizar una amputación parcial de la aleta caudal para tratar con docs. Prepare cajas de apareamiento con un litro de agua del sistema para peces que contenga 25 microgramos por mililitro de doxiciclina.Como control negativo, agregue 250 microlitros de etanol en lugar de doxiciclina a cajas de reproducción con un litro de agua del sistema para peces, transfiera hasta 10 peces doble transgénicos a cada caja de reproducción y coloque las cajas en la oscuridad para reducir el estrés. Después de un mínimo de seis horas, anestesie y transfiera los peces tratados a una placa recubierta con papel de filtro húmedo y use pinzas para separar la aleta caudal. A continuación, bajo un microscopio de fluorescencia, examine los peces en busca de la aparición de Y PET en el tejido en regeneración.Posteriormente, los peces pueden utilizarse para tratamientos adicionales o devolverse al sistema de alojamiento de peces para finalizar la inducción del transgén respondiente tras la amputación parcial de la aleta y el tratamiento con docs. Vuelva a amputar los rebrotos de aleta aproximadamente cuatro a cinco segmentos óseos proximales al plano de amputación inicial y en un punto temporal que dependerá de su configuración experimental, como se describió previamente en este video. Con pinzas, y manipulando únicamente la parte del muñón del tejido, coloque cuidadosamente los rebrotos de tejido en posición plana sobre una pequeña placa de Petri que contenga un 4% peso por volumen de PFA en PBS y fíjelos durante toda la noche a cuatro grados Celsius. Al día siguiente, use PBS para lavar los rebrotos dos veces antes de transferirlos a EDTA 0,5 M en PBS con el fin de descalcificar la matriz ósea a cuatro grados Celsius durante toda la noche. A continuación, incube los rebrotos en una serie de sacarosa en PBS a temperatura ambiente, 30 minutos cada vez, y finalmente en partes iguales de sacarosa al 30% en PBS y medio de congelación tisular durante 30 minutos adicionales.Transfiera las aletas al medio de congelación de tejidos e incube a cuatro grados Celsius durante al menos dos horas. Luego coloque moldes criogénicos sobre un portaobjetos y llénelos con medio de congelación de tejidos. Transfiera los tejidos en regeneración a los moldes criogénicos y oriente el tejido para obtener secciones longitudinales o transversales.Asegúrese de que el regenerado esté recto para facilitar el corte en secciones. Junto con la placa de microscopio, transfiera los moldes criogénicos a una rejilla metálica colocada sobre una cama de hielo seco para iniciar el proceso de congelación. Cuando el medio esté sólido, transfiera los moldes criogénicos de regreso a temperatura ambiente para permitir que el medio se derrita en la interfase con el plástico. Luego, utilizando un instrumento como un bolígrafo, empuje el bloque congelado fuera del molde criogénico y almacénelo a menos 80 grados Celsius hasta su seccionamiento con un microtomo criogénico. Recopile secciones de 10 a 14 micrómetros sobre portaobjetos microscópicos adhesivos y almacene los portaobjetos a menos 20 grados Celsius hasta su uso. Para caracterizar la expresión del respondedor Tet en secciones de aleta, trate las secciones con MEOH al 100% enfriado a menos 20 grados Celsius durante 30 minutos.Retire cuidadosamente el líquido utilizando una toalla de papel. Luego lave los cortes dos veces con PBT y una vez con PBS durante cinco minutos cada lavado. Incube los cortes durante 10 minutos en dappy antes de lavar con PBS dos veces durante 10 minutos cada vez.Luego, utilice el medio de montaje Antifa y una lámina de cubierta para montar las muestras antes de usar microscopía de fluorescencia confocal o de campo amplio para obtener imágenes de las muestras, tras haber establecido un sistema TET funcional en pez cebra. Este sistema puede utilizarse para evaluar la función de genes o vías de señalización en tejidos individuales. Como se muestra aquí, el activador tet impulsado por el promotor HER 4.3 induce la expresión del respondedor TED únicamente en un subconjunto de tejidos; se detecta fluorescencia de YFP en la blástula proximal proliferativa, mientras que la blástula distal y el epidermis carecen de expresión.La expresión del antagonista de beta-catenina WINT actúa en uno de los dominios HER 4.3 que contiene las células proliferativas de la blástula, pero sorprendentemente no tiene efecto sobre la proliferación celular regenerativa. Esto sugiere que la señalización de wind betaine en la blástula proximal proliferativa no desempeña un papel esencial en la regulación de la proliferación de células ML de la blástula. En contraste, el uso de la línea activadora Tet controlada por el promotor de ubiquitina para inducir la expresión de axin uno en todos los tejidos del rebrote de la aleta interfiere fuertemente con la proliferación celular regenerativa.Además, la expresión de axón uno en el dominio HER 4.3, que no incluye osteoblastos, interfiere fuertemente con la formación ósea en el tejido regenerado. Por lo tanto, la interferencia específica en tejidos con la señalización de wind mediante el sistema TE on revela funciones indirectas inesperadas de la señalización de wind en la regulación de la proliferación celular y la regeneración ósea. Una vez dominada, esta técnica puede utilizarse para lograr una expresión génica dirigida e inducible en cualquier tejido de interés.Hemos aplicado con éxito este método para investigar las funciones específicas de los tejidos en la señalización de nicotina en la aleta caudal en regeneración del pez S. El uso de este método ayudará a obtener una comprensión más completa de los determinantes moleculares que regulan la regeneración de tejidos.

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Research

Investigación

JoVE Journal

Developmental Biology

Biología del Desarrollo

Se describe un método para derribar condicionalmente la expresión de una proteína diana durante la regeneración de la aleta del pez cebra adulto. Esta técnica implica la inyección de micro y electroporación morfolinos antisentido de oligonucleótidos en el tejido de la aleta, que permite probar el papel de la proteína en varias etapas de regeneración de la aleta, incluyendo la curación de heridas, la formación blastema, y ​​consecuencia regenerativa.

En electroporación in vivo de Morpholinos en la regeneración de adultos de pez cebra Aleta de cola

El método que aquí se presenta incluye el daño exacto de embriones de pez cebra en vivo con pulsos láser de alta energía y el posterior análisis de estas lesiones y su recuperación con el tiempo. También mostramos cómo genéticamente etiquetado individual o grupos de células del músculo esquelético se puede seguir durante y después de la luz láser daño inducido.

Laser-infligido lesiones de músculo esquelético embrionario de pez cebra

Después de la transección de la médula, el pez cebra adulto tenga la recuperación funcional a las seis semanas posteriores a la lesión. Para aprovechar las ventajas de la transparencia de las larvas y una recuperación más rápida, se presenta un método para seccionar la médula espinal de las larvas. Después de transección, se observa la recuperación sensorial a partir de los 2 días después de la lesión, y el movimiento C-doble por 3 días después de la lesión.

La transección de la médula espinal en el pez cebra larval

Un método de genética inversa adaptable para el pez cebra para evaluar la función de genes durante las etapas posteriores del desarrollo y la homeostasis fisiológica, tales como la regeneración de tejidos usando inyecciones intraventriculares de morfolinos de genes específicos.

Invierta genética Enfoque Morpholino Usando ventricular cardíaca inyección para transfectar múltiples tejidos difíciles de conectar por objetivo en el pez cebra Larva

Para arrojar luz sobre los mecanismos celulares y moleculares de la neurogénesis y regeneración del pez cebra adulto, desarrollamos un protocolo para la cirugía invasiva que causa lesiones mecánicas en el telencéfalo adulto del pez cebra y el posterior seguimiento de los cambios en el hemisferio apuñalado mediante inmunohistoquímica o hibridación in situ.

Puñalada de Lesiones de la herida del pez cebra Telencéfalo adultos: un método para investigar Vertebrados Cerebro neurogénesis y Regeneración

Aquí presentamos un método fiable para estudiar la regeneración renal adulta mediante la inducción de una lesión renal aguda mediante la inyección de gentamicina. Demostramos que la lesión depende de la dosis de gentamicina y de la temperatura ambiental utilizando hibridación in situ para marcar lhx1a+ desarrollando nuevas nefronas.

La regeneración renal en adultos de pez cebra por gentamicina lesión inducida

Presentamos un protocolo para capturar la dinámica de la regeneración de la aleta caudal de las larvas de pez cebra a escala de tejido completo utilizando estereomicroscopía basada en campo claro. Esta técnica permite capturar la dinámica de regeneración con resolución de una sola célula. Esta metodología se puede adaptar a cualquier microscopio estereoscópico equipado con una cámara CCD y software de lapso de tiempo.

La captura de Reparación de Tejidos en pez cebra larvas con Time-lapse Brightfield Estereomicroscopía

La regeneración del músculo esquelético es impulsada por las células madre musculares residentes en el tejido, que se ven afectadas en muchas enfermedades musculares, como la distrofia muscular, y esto resulta en la incapacidad del músculo para regenerarse. Aquí, describimos un protocolo que permite el examen de la regeneración muscular en modelos de pez cebra de enfermedad muscular.

Examinando la regeneración muscular en modelos de pez cebra de enfermedad muscular

Se describe un modelo mecánico de lesión cerebral en el pez cebra adulto para investigar los mecanismos moleculares que regulan su alta capacidad regenerativa. El método explica crear una lesión por arma blanca en el tectum óptico de múltiples especies de peces pequeños para evaluar las respuestas regenerativas utilizando inmunotinción fluorescente.

Modelo de lesión por puñalada del Tectum óptico adulto utilizando pez cebra y medaka para el análisis comparativo de la capacidad regenerativa

El presente protocolo describe un método para inducir lesiones específicas de tejido y altamente reproducibles en larvas de pez cebra utilizando un sistema de lesiones láser combinado con una plataforma microfluídica automatizada para el manejo de larvas.

Lesiones controladas semiautomatizadas inducidas por láser para estudiar la regeneración de la médula espinal en larvas de pez cebra

En este trabajo se presenta un protocolo para trasplantar células con alta resolución espacial y temporal en embriones y larvas de pez cebra en cualquier etapa entre al menos 1 y 7 días después de la fertilización.

Trasplante celular de alta resolución en embriones y larvas de pez cebra

Aprende a utilizar el sistema TetON en Danio rerio para lograr expresión génica condicional y específica de tejido durante la regeneración de la aleta caudal mediante administración de doxiciclina.

El uso del Sistema de Teton para estudiar los mecanismos moleculares de la regeneración de pez cebra

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