Name: Toma de muestras de sangre de la vena lateral de la cola de la rata (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2015-05-18T15:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 11 s
Description: Aprende a tomar muestras de sangre de la vena lateral de la cola en ratas mediante catéter mariposa. Esta técnica minimiza el estrés del animal y permite muestreos repetidos para estudios fisiológicos y análisis de biomarcadores in vivo.

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Agradecemos a Virginia Doherty y Junmei Yao para la asistencia técnica. Esta investigación fue financiada por el NIMH (R01 MH084966), y la Oficina de Investigación del Ejército de Estados Unidos y la Agencia de Proyectos de Investigación Avanzada de Defensa (conceder W911NF-10-1-0059) a KAG.

Todos los experimentos se realizaron utilizando adulto ratas macho Long-Evans. Todos los procedimientos fueron de acuerdo con los Institutos Nacionales de Salud (NIH) Guía para el Cuidado y Uso de Animales de Laboratorio y fueron aprobados por el Comité Institucional Cuidado de Animales y el empleo del Instituto de Tecnología de Massachusetts y el Cuidado de Animales y el Empleo Oficina de Revisión de el USAMRMC. 1. Preparación <ol><li> Heparinise el catéter y la jeringa mediante la colocación de la aguja blindado en un tubo que contenía heparina 500 l (1.000 unidades USP / ml) y, a continuación aspirando y expulsando solución de heparina a través de la aguja. <ol><li> Adjuntar un catéter de mariposa a la jeringa. Mantenga el escudo sobre la aguja del catéter para proteger la punta afilada de los daños. </li><li> Retirar un volumen de heparina que es ligeramente mayor que el volumen de sangre que se recoge. Separe la jeringa y llenarlo con aire. </li><li> Vuelva a colocar la jeringa al catéter y utilizar elde aire para expulsar el exceso de solución de heparina; garantizan solamente trazas permanecen en los tubos, agujas y jeringas. </li><li> Coloque el catéter estéril, con la jeringa todavía unida, sobre una superficie estéril. </li></ol></li><li> Asegurar rápidamente la rata en un paño limpio asegurando que delanteras y patas traseras se encuentran en una posición cómoda y la respiración es irrestricta. <ol><li> Asegure la envoltura con gancho y lazo de cinta; asegurar que los genitales externos no están constreñidos. </li><li> Tener un ayudante con suavidad y firmeza frenar la rata (abdomen y base de la cola) sobre una superficie sólida con la cola colgando del borde del mostrador. </li></ol></li></ol> Muestreo 2. Sangre <ol><li> Sumerja la cola de 42 ° C el agua para 40 a 50 segundos para dilatar los vasos sanguíneos y seque la cola con una toalla de papel. Localice la vena de la cola para ser desangrado (girar todo el cuerpo con la cola para evitar torcer la cola). Nota: el calentamiento suficiente de la cola es crítico para la rápida collection de una muestra de sangre. Si se estrecha la vasculatura, la colocación apropiada del catéter es difícil, y el flujo sanguíneo se reduce enormemente. Una almohadilla de calentamiento puede ser utilizado como una alternativa a la inmersión en agua. </li><li> Identificar el punto de muestreo. Nota: La arteria se encuentra a lo largo del aspecto mediados de dorsal de la cola; no utilice este para el muestreo. <ol><li> Objetivo, ya sea las venas de la cola izquierda y derecha que se encuentran lateral a la arteria. La pigmentación de la cola, que varía por la tensión y aumenta con la edad, puede oscurecer algunos de la vasculatura. Objetivo a una porción de la vena en la parte inferior de la cola. </li><li> Limpie el área objetivo con clorhexidina al 2% solución antiséptica. </li></ol></li><li> Crear una presión negativa en la jeringa y el catéter al retirar el émbolo de cero a aproximadamente 50 l. </li><li> Mantenga la cola suave y firmemente cerca de la punta para mantener la cola recta durante la recogida de muestras. Asegúrese de que el flujo sanguíneo no está ocluida por un agarre demasiado apretado.</li><li> Lentamente insertar el catéter en la vena en un ángulo superficial de aproximadamente 5 cm de la punta de la cola. Cuando se penetra la vena, la sangre fluirá en el catéter. Retire lentamente el émbolo de la jeringa para recoger el volumen deseado a un ritmo constante (~ 20 l por segundo). <ol><li> Consulte al personal veterinario para obtener información sobre el volumen de sangre máxima que se puede recoger. La cantidad máxima de sangre que debe ser recogido depende del estado de peso y la salud de la rata. No retirar más de 15% del volumen total de sangre en un período de 14 días. Nota: La sangre es mucho más difícil de cobrar a los animales que se destacaron de forma aguda en los minutos previos a la recogida de muestras, porque las hormonas del estrés constriñen los vasos. Por ejemplo, mover jaula de la rata a una habitación novela, teniendo varios minutos para envolver el animal, o inserción repetida del catéter en una vena son todos propensos a desencadenar una respuesta de estrés agudo. </li><li> Facilitar blooflujo d por &quot;ordeñar&quot; la vena. Ejecutar un dedo a lo largo de la longitud de la vena, desde la base hacia la punta de la cola, pero siguen siendo más de 2 cm desde la punta de la aguja que se inserta el catéter o puede desprenderse de la vena. </li><li> Si la sangre no puede ser recogido con éxito desde el sitio inicial de la penetración del catéter, vuelva a insertar la aguja más arriba en la vena. Si la sangre se recogió en el lugar inicial, re-presurizar la aguja desconectando y volviendo a conectar el catéter y la jeringa antes de la re-inserción en la vena. En general, evitar las penetraciones adicionales. </li><li> Como múltiples penetraciones pueden causar colapso vena de la cola, en el que el suministro de sangre a la cola se corta y el tejido blando de la cola se vuelve necrotizado, la eutanasia la rata si hay cola colapso vena. </li></ol></li><li> Cuando se recoge el volumen de muestra adecuado, liberar la presión en la jeringa al desconectar y volver a conectar el catéter. Aspirar ligeramente mediante el émbolo de la jeringa (~ 50 &amp; #181; l), y retirar la aguja de la vena. Nota: Si se retira la aguja sin primero liberando la presión en la jeringa, la sangre gotea desde la aguja. </li><li> Brevemente aplique presión en el sitio de inserción para detener el sangrado, y limpie el área con solución antiséptica. Regreso a la rata a su jaula. </li></ol> 3. Procesamiento de la muestra de sangre <ol><li> Aspirar el aire para asegurar que no sangre permanece dentro de la aguja del catéter, y el uso de las tijeras para cortar el tubo del catéter justo por encima de la aguja. Expulsar la sangre en un tubo de microcentrífuga de 1,5 ml estéril. Nota: Si la sangre es empujada a través de la aguja, la fuerza de cizallamiento puede causar que las células rojas de la sangre a la ruptura que puede interferir con muchos ensayos aguas abajo. Retire la aguja para evitar la hemólisis. <ol><li> Para recoger el plasma sanguíneo, las trompas de uso que contienen EDTA como anticoagulante (en este caso, utilice 10 l de EDTA 0,1 M de 200 a 400 l de sangre; garantizar la concentración de EDTA empleada no interfiere won el ensayo de aguas abajo) y el lugar en el hielo. <ol><li> Girar muestras de sangre entera a 2100 xg en una centrífuga refrigerada (4 ° C) durante 10 min a menos de 10 min de la recolección. Eluir el plasma, evitando molestar a las capas de glóbulos rojos y blancos. </li></ol></li><li> Para recoger el suero sanguíneo, lugar muestras (sin anticoagulante) a temperatura ambiente durante un máximo de 30 minutos para permitir la coagulación. Haga girar los tubos de recogida en una centrífuga refrigerada (4 ° C) a 2000 x g. El suero puede entonces ser eluido. </li></ol></li><li> Use muestras de inmediato, o tienda a -80 ° C durante un máximo de un año. </li></ol>

<ol><li>Vausort, M., Wagner, D. R., Devaux, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Long+Noncoding+RNAs+in+Patients+with+Acute+Myocardial+Infarction%5BTitle%5D)+AND+%22Circ+Res%22%5BJournal%5D)">Long Noncoding RNAs in Patients with Acute Myocardial Infarction.</a> Circ Res. 115 (7), 668-677 (2014).</li>
<li>Shah, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Biomarkers+for+Early+Detection+of+Colorectal+Cancer+and+Polyps%3A+Systematic+Review%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Epidemiol+Biomarkers+Prev%22%5BJournal%5D)">Biomarkers for Early Detection of Colorectal Cancer and Polyps: Systematic Review.</a> Cancer Epidemiol Biomarkers Prev. 23 (9), 1712-1728 (2014).</li>
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<li>Knoll, A. T., Carlezon, W. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dynorphin%2C+stress%2C+and+depression%5BTitle%5D)+AND+%22Brain+Res%22%5BJournal%5D)">Dynorphin, stress, and depression.</a> Brain Res. 1314 (56-73), (2010).</li>
<li>Harvey, B. H., Brand, L., Jeeva, Z., Stein, D. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cortical%2Fhippocampal+monoamines%2C+HPA-axis+changes+and+aversive+behavior+following+stress+and+restress+in+an+animal+model+of+post-traumatic+stress+disorder%5BTitle%5D)+AND+%22Physiol+Behav%22%5BJournal%5D)">Cortical/hippocampal monoamines, HPA-axis changes and aversive behavior following stress and restress in an animal model of post-traumatic stress disorder.</a> Physiol Behav. 87 (5), 881-890 (2006).</li>
</ol>

Los autores no tienen nada que revelar.

Aquí se describe un procedimiento rápido y sencillo para la obtención de una muestra de sangre de una rata que ofrece importantes ventajas sobre otras técnicas de uso común. En primer lugar, no requiere anestesia, en contraste con el muestreo de la vena yugular o seno retroorbital. Cuando se recogen muestras de sangre que rodea procedimientos conductuales, la administración de anestésicos no es deseable porque puede interferir con el aprendizaje y 4,5 memoria. En segundo lugar, ofrece la posibilidad de recoger volúmenes de sangre más grandes que otras técnicas de venopunción, como la recogida de las venas safena pedal o dorsales. Usando la técnica descrita aquí, hasta 1,5 ml de sangre se puede recoger de una rata en un solo punto de tiempo, un volumen que permite fácilmente múltiples ensayos que se ejecutan en paralelo. Por último, este procedimiento minimiza el potencial de daño a los tejidos en comparación con la amputación punta de la cola o sangrado retroorbital. El uso de este procedimiento facilita el cumplimiento del Animal WLey elfare y la Guía para el Cuidado y Uso de Animales de Laboratorio, el cual requiere reducir al mínimo el dolor y la angustia que resultan de procedimientos de laboratorio realizadas en los animales. Se recomienda que los investigadores nuevos para este método practican las técnicas de inmovilización y de sangrado de la cola con el fin de minimizar el tiempo que los animales experimentales son restringidos. La sangre recogida en menos de 3 minutos desde el inicio de la restricción proporciona resultados óptimos. El protocolo descrito aquí puede utilizarse para el muestreo de 1 a 4 veces por semana, pero no más de dos veces por día. Mientras que las colecciones de sangre repetidas pueden llevar a cabo, diferentes sitios de muestreo que se mueven hacia arriba desde la base de la cola deben ser utilizados, y las venas de la cola izquierda y derecha deben alternarse como sitios de muestreo. El volumen total de sangre de los roedores es 6-7% de su peso corporal, y no más de 15% del volumen total de la sangre se debe recoger dentro de un período de 2 semanas. Sueroo plasma comprende aproximadamente un 40-60% del volumen de muestra recogida. Las muestras de sangre a través de las venas de la cola laterales también se puede realizar en el ratón como se describe aquí con algunas modificaciones menores. En primer lugar, se pueden usar sólo pequeñas de calibre (27 G) catéteres. En segundo lugar, se recomienda utilizar un tubo de contención, en lugar de una envoltura, para inmovilizar los ratones. El volumen de sangre que se puede obtener desde el ratón usando venopunción del haz vascular submandibular (200-500 l) es mayor que se pueden recoger de forma segura desde la vena de la cola (200 l máximo). Debido a que el muestreo de sangre del paquete vascular submandibular requiere restricción mínima y puede producir más sangre, ésta es la ruta preferida para el muestreo en el ratón. La rapidez con la que se puede realizar este procedimiento, junto con su naturaleza mínimamente invasiva, también minimiza la perturbación potencial de las medidas basadas en la sangre por la respuesta de estrés agudo 6. Losrespuesta al estrés agudo puede alterar los niveles circulantes de muchas moléculas, incluyendo las interleucinas y otros factores inmunes activa 7, hormonas del eje hipotálamo-hipófisis-suprarrenal 8, hormonas en el sistema nervioso simpático 9, 10 grelina, opioides endógenos 11, dopamina, y serotonina 12. Si se desean medidas de reposo circulantes de estas moléculas u otros regulados por estas moléculas, es importante para minimizar la respuesta al estrés, que se activa dentro de tan poco como un minuto del inicio de la exposición factor estresante. Las respuestas al estrés no sólo alteran la composición de la sangre, sino que también representan un obstáculo técnico para el muestreo debido a la constricción de los vasos de la sangre a través de una mayor unidad del sistema nervioso simpático. Se vuelve cada vez mayor dificultad para obtener el flujo de sangre constante de una rata que está montando una respuesta de estrés agudo. Por lo tanto, la angustia del animal debe ser minimzado con el fin de obtener rápidamente muestras que reflejan el estado fisiológico de interés.

Biomarcadores obtenidos a partir de sangre proporcionan utilidad de diagnóstico, predicción y estratificación medidas en muchos contextos clínicos, incluyendo la enfermedad cardiovascular 1, ciencias cáncer 2 y enfermedad psiquiátrica 3. También pueden ser utilizados en la ciencia básica para evaluar el &quot;estado&quot; de un organismo, incluyendo el grado de hambre, la inflamación, o el estrés presente. Estas medidas pueden ser influenciados por variables que pueden o no pueden ser críticos a la pregunta de interés, incluyendo la hora del día en que se obtiene la muestra y el sexo de los sujetos. También puede estar influenciada por la tensión inducida durante el propio procedimiento de muestreo de sangre. Las hormonas del estrés y la percepción del dolor pueden alterar rápidamente la composición de la sangre. Los roedores son el animal de laboratorio más comúnmente utilizado, y múltiples métodos han sido desarrollados para la recogida de sangre. El método ideal de muestreo de sangre debe tener physiologica mínimol impacto sobre el animal, no requieren anestesia, permite muestreo rápido y repetido, y proporcionar el volumen de sangre suficiente para numerosas aplicaciones posteriores. Técnicas populares para la recogida de la sangre, como la cateterización de la vena yugular o la amputación de la cola de punta no cumplen con estos criterios. El objetivo de este protocolo es describir una técnica de muestreo de sangre para su uso en ratas que es mínimamente estresante, no requiere anestesia, permite múltiples colecciones de sangre dentro de un mismo tema, y ​​ofrece un volumen de muestra relativamente grande tal que varios ensayos pueden realizarse en una sola muestra. El objetivo de este método es la obtención de muestras de sangre que están mínimamente influenciados por la respuesta de estrés agudo.

<table><tbody><tr><td>Heparina sódica (1.000 unidades USP/ml)</td><td>Patternson Veterinary Supply</td><td>25021040010</td><td></td></tr><tr><td>Ácido etilendiaminotetraacético (EDTA)</td><td>JT Taylor</td><td>JT2020-01</td><td></td></tr><tr><td>Dermachlor rinse-clorhexadine</td><td>Butler Schein</td><td>6356</td><td>Solución antiséptica tópica, gluconato de clorhexidina al 2%</td></tr><tr><td>SURFLO Winged Infusion Sets, Terumo, catéteres de mariposa</td><td>VWR Scientific</td><td></td><td></td>TESV25BLK</tr><tr><td>BD Tuberculin 1 cc jeringas</td><td>VWR Scientific</td><td>BD309659</td><td></td></tr><tr><td>tubos de microcentrífuga de 1,5 ml</td><td>VWR Scientific</td><td>89202-682</td><td></td></tr><tr><td>500 &mu; l tubos de microcentrífuga</td><td>VWR Scientific</td><td>21150-330</td><td></td></tr><tr><td>Tijeras, acero inoxidable, 5"</td> <td>VWR Scientific</td><td>82027-586</td><td></td></tr><tr><td>Vaso de precipitados de plástico de 500 ml</td><td>VWR Scientific</td><td>414004-149</td><td></td></tr><tr><td>Envoltura de tela limpia</td><td>Butler Schein</td><td>2993</td><td></td></tr><tr><td>Velcro cinta, 0,75 pulgadas de ancho</td><td>Monoprice</td><td>B004AF9II6</td><td>Cinta de</td></tr> <tr><td>velcroTemporizador</td><td>VWR Scientific</td><td>62344-641</td><td></td></tr></tbody></table>

toma de muestras de sangre de la vena lateral de la cola de la rata

Sampling Blood from the Lateral Tail Vein of the Rat

Las muestras de sangre se obtienen comúnmente en muchos contextos experimentales para medir objetivos de interés, incluyendo hormonas, factores inmunes, factores de crecimiento, proteínas y glucosa, sin embargo, la composición de la sangre está regulada dinámicamente y es fácilmente perturbable. Un factor que puede cambiar la composición de la sangre es la respuesta al estrés desencadenada por el procedimiento de muestreo, lo que puede contribuir a la variabilidad en las medidas de interés. Aquí describimos un procedimiento para la toma de muestras de sangre de la vena lateral de la cola en la rata. Este procedimiento ofrece ventajas significativas sobre otras técnicas más utilizadas. Permite la toma de muestras rápidas con un mínimo dolor o invasividad, sin anestesia ni analgesia. Además, se puede utilizar para obtener muestras de gran volumen (más de 1 ml en algunas ratas) y se puede utilizar repetidamente a lo largo de los días experimentales. Al minimizar la respuesta al estrés y el dolor resultante de la toma de muestras de sangre, las medidas pueden reflejar con mayor precisión el verdadero estado basal del animal, con una influencia mínima del propio procedimiento de muestreo.

Plasma de la sangre obtenida de la vena lateral de la cola como se describe en el protocolo da una muestra de plasma que era translúcida y de color amarillo pálido en apariencia. Como se muestra en la Figura 1, la hemólisis en una muestra imparte un tinte rojo a la plasma. La respuesta de estrés agudo puede alterar rápidamente la composición de la sangre. Por ejemplo, la concentración de corticosterona circulante puede aumentar notablemente dentro de 10 minutos de exposición factor de estrés, como se muestra en la Figura 2. Los bajos niveles basales de corticosterona obtenidos con este método antes de la exposición estresores revelan que el procedimiento de muestreo en sí no es una fuente significativa de estrés. <img alt="Figura 1" src="/files/ftp_upload/52766/52766fig1.jpg" /> Figura 1: se muestra el aspecto de la muestra (A) Una muestra hemolizada.. Después de la centrifugación, el plasma o suero capa (superficie indicada por la ar negrofila) aparece teñida de color rosa o rojo. Tintes más oscuros indican mayores niveles de hemólisis. (B) Después de la centrifugación, una muestra recogida correctamente tendrá un claro, aspecto amarillento a la banda superior (superficie indicada por la flecha negro), que corresponde a la del plasma no hemolizado o suero. Cuando la eliminación de esta capa, es importante para no molestar a la sangre entera subyacente, ya sea empujando la punta de la pipeta en toda la capa de sangre o por aspiración de algunos de toda la sangre en la punta. Cualquier plasma o suero contaminado con sangre entera deben desecharse. <img alt="Figura 2" src="/files/ftp_upload/52766/52766fig2.jpg" /> Figura 2: corticosterona plasma se eleva rápidamente después de una experiencia estresante Se obtuvo sangre de la vena lateral de la cola de ratas adultas Long-Evans hembra antes y 10 min tras la exposición a 4 tonos (10 seg, 2 kHz, 85 dB) co-terminación. con footshocks (1 seg, 350 mu). Corticosterona en plasma de sangre al inicio del estudio (290,4 ± 138,8 pg / ml) fue significativamente menor que los niveles observados 10 min después de la presentación de la tensión de descarga en las patas (2204,8 ± 454,5 pg / ml, p = 0,02, n = 4), según lo determinado por t pareada -test. *, P &lt;0,05

Las muestras de sangre son útiles para evaluar biomarcadores de estados fisiológicos o enfermedades in vivo. Aquí describimos la metodología para muestrear sangre de la vena lateral de la cola en la rata. Este método proporciona muestras rápidas con un mínimo de dolor e invasión.

Toma de muestras de sangre de la vena lateral de la cola de la rata

Blood samples are commonly obtained in many experimental contexts to measure targets of interest, including hormones, immune factors, growth factors, ...

El objetivo general de este procedimiento es minimizar el estrés asociado a la recolección de sangre de ratas mediante la extracción por la vena lateral de la cola. Esto se logra primero restringiendo a la rata y calentando la cola. En el segundo paso, se inserta un catéter tipo mariposa en una de las venas laterales de la cola dilatadas, y luego se extrae la sangre en el paso final.Se retira el catéter y se detiene el flujo sanguíneo procedente del sitio de punción. En definitiva, obtener muestras de sangre de la vena lateral de la cola provoca un estrés mínimo en la rata durante la recolección de sangre, reduciendo así la influencia de la respuesta al estrés agudo sobre la composición sanguínea. Las principales ventajas de esta técnica frente a métodos existentes, como la amputación del extremo de la cola, son que la extracción de muestras de la vena lateral de la cola resulta mucho menos angustiosa para el animal y que permite realizar muestreos repetidos en el mismo sujeto.El procedimiento será demostrado por dos miembros de mi laboratorio, Graham Lee, un posdoctorado, y Elia Harmatz, un técnico. Para comenzar, conecte un catéter tipo mariposa a la jeringa, manteniendo la protección de la jeringa sobre la aguja para proteger la punta. Luego, aspire un volumen de heparina ligeramente mayor que el volumen de sangre que se recolectará. Desconecte la jeringa y llene la jeringa con aire.Vuelva a conectar la jeringa al catéter y expulse todo el contenido de la solución de heparina, excepto cantidades traza, del tubo, la aguja y la jeringa. Luego coloque el catéter y la jeringa sobre una superficie estéril. Ahora, sujete rápidamente la rata en un paño limpio, teniendo cuidado de que las patas delanteras y traseras queden en una posición cómoda y de que la respiración no esté restringida.Sujete el envoltorio con cinta de gancho y bucle. Luego, sobre una superficie de trabajo sólida, pida a un ayudante que restrinja suavemente y firmemente la rata por el abdomen y la base de la cola, dejando la cola colgando fuera del borde de la mesa para obtener la muestra de sangre. A continuación, dilate los vasos sanguíneos de la cola en agua a 42 grados Celsius durante 40 a 50 segundos.Luego, seque la cola con una toalla de papel y gire suavemente todo el cuerpo sujetando la cola para localizar la vena derecha o izquierda, ubicada lateralmente a la arteria, para la extracción de sangre. Seleccione un tramo de la vena en la porción inferior de la cola y limpie la zona con una solución antiséptica al 2% de clorhexidina. A continuación, retire el émbolo de la jeringa desde cero hasta aproximadamente 50 microlitros para crear presión negativa dentro de la jeringa, y sujete la cola suave pero firmemente cerca de la punta para mantenerla recta durante la recolección de la muestra.Ahora, inserte lentamente el catéter en la vena con un ángulo poco profundo, aproximadamente a cinco centímetros desde la punta de la cola. Cuando se penetre la vena, la sangre fluirá hacia el catéter; retire lentamente el émbolo de la jeringa para recoger el volumen deseado a una velocidad constante de aproximadamente 20 microlitros por segundo. Para facilitar el flujo sanguíneo, pase un dedo a lo largo de la vena desde la base hacia la punta de la cola, manteniéndose siempre a más de dos centímetros de la punta de la aguja insertada, para favorecer el drenaje de la sangre.Si no se puede recolectar sangre exitosamente desde el sitio inicial de penetración del catéter, vuelva a insertar la aguja más arriba en la vena. Una vez recolectado un volumen adecuado de muestra, desconecte y reconecte el catéter para liberar la presión en la jeringa. Luego retire la aguja de la vena y aplique brevemente presión sobre el sitio de inserción para detener la hemorragia cuando esta haya cesado.Limpie el área con solución antiséptica y devuelva el animal a su jaula de alojamiento. Para procesar la muestra de sangre, aspire el aire para asegurarse de que no quede sangre dentro de la aguja del catéter y use tijeras para cortar el tubo del catéter justo por encima de la aguja. Retire la aguja, luego recoja el plasma sanguíneo y expulse la sangre en tubos de microcentrífuga que contengan EDTA.Como anticoagulante. Agite suavemente el tubo para mezclar el anticoagulante con la sangre y luego coloque las muestras en hielo. Dentro de los 10 minutos posteriores a la recolección, centrifugue la sangre completa y eluya el plasma, teniendo cuidado de no perturbar las capas de glóbulos rojos y blancos para recolectar el suero sanguíneo.Coloque la sangre en tubos de microcentrífuga sin anticoagulante a temperatura ambiente durante hasta 30 minutos. Luego, una vez que la sangre haya coagulado, centrifugue los tubos de recolección en una centrífuga refrigerada y eluya el suero. Ambos tipos de muestras pueden usarse inmediatamente o almacenarse a menos 80 grados Celsius durante hasta un año.El plasma sanguíneo recolectado de la vena caudal lateral, como se muestra, proporciona una muestra de plasma que es translúcida y de color amarillo pálido. Si ha ocurrido hemólisis, el plasma adquirirá un tinte rojizo. Una respuesta aguda al estrés puede alterar rápidamente la composición de una muestra de sangre.Por ejemplo, la concentración circulante de corticosterona aumenta marcadamente dentro de los 10 minutos posteriores a la exposición a un agente estresante, como se observa en este experimento representativo. Sin embargo, es importante destacar que el bajo nivel basal de corticosterona obtenido mediante este método antes de la exposición al agente estresante revela que el procedimiento de muestreo en sí no constituye una fuente significativa de estrés. Sugerimos que practique este procedimiento en animales anestesiados hasta dominar la inserción de la aguja y la recolección de sangre.Luego, una vez dominada, la técnica puede completarse en cinco minutos si se realiza correctamente. Durante la realización de este procedimiento, es importante recordar minimizar cualquier fuente potencial de estrés, como el ruido ambiental, y completar el procedimiento lo más rápidamente posible.

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Research

Investigación

JoVE Journal

Biology

Biología

La extracción de sangre son necesarias en un gran número de estudios, por ejemplo para estudiar el perfil farmacocinética de un compuesto. En este sentido, se muestra cómo extraer la sangre de las ratas mediante dos técnicas: extracción de sangre de la vena safena o por punción cardiaca.

La extracción de sangre de las ratas a través de la vena safena y por punción cardiaca

Aquí, describimos un método de tomar muestras de sangre de la vena de cola simple en ratas no anestesiados mediante un sistema de tubo de aspiración. Este método reduce el riesgo de exposición directa a sangre y simplifica la toma de muestras múltiples de una sola venopunción.

Repetidos de muestras de sangre de vena de la cola de las ratas no anestesiados con un sistema de colección de sangre vacío

Aquí, presentamos un protocolo para recolectar muestras de sangre de la vena subclavia de rata.

Punción de la vena subclavia como método alternativo de recogida de muestras de sangre en las ratas

Este estudio divulga la muestra de sangre de vena de la cola en ratones usando un sistema de tubo de aspiración con la lupa de lente. Nuestro método es fácil de practicar y podría utilizarse para tomar muestras de sangre de repetición en ratones.

Colección de sangre modificada de las venas de la cola de los ratones no anestesiados con un sistema de colección de sangre vacío y gafas lupa

El presente protocolo describe un método simple y eficiente para recolectar sangre de la vena subclavia en ratas. Permite un muestreo rápido, oportuno y fácilmente identificable sin anestesia y obtiene sangre de alta calidad a través de la recolección repetitiva de muestras.

Muestreo repetitivo de sangre de la vena subclavia de rata consciente

Aquí, presentamos un protocolo para ofrecer alternativas de recolección de sangre rápidas, fáciles y confiables para el modelo de rata. Describimos tres métodos diferentes de muestreo de sangre según el contexto: punción de la vena de la cola bajo anestesia o en un animal consciente, y punción de la vena dorsal del pene bajo anestesia.

Punción modificada de la vena de la cola y la vena del pene para el muestreo de sangre en el modelo de rata

El protocolo muestra repetidas recolecciones de líquido cefalorraquídeo y sangre de ratas epilépticas realizadas en paralelo con un monitoreo continuo de video-electroencefalograma (EEG). Estos son fundamentales para explorar posibles vínculos entre los cambios en varias moléculas de fluidos corporales y la actividad convulsiva.

Toma de muestras de líquido cefalorraquídeo y sangre de la vena lateral de la cola en ratas durante los registros de EEG

Aquí presentamos una combinación de métodos efectivos de restricción en ratas y punción de la vena subclavia que permiten la recolección de sangre rápida, segura y repetida en ratas sin anestesia.

Muestreo de sangre de la vena subclavia en ratas conscientes

Las células asesinas naturales son una pequeña población de linfocitos. Aquí se muestra la forma de aislar estas células de la sangre humana por selección negativa, utilizando un kit de StemCell Technologies. Las células obtenidas son viables y sin tocar por los anticuerpos, y por lo tanto, listo para ser utilizado para una serie de procedimientos.

Enriquecimiento de las células NK a partir de sangre humana con el Kit de RosetteSep de Tecnologías de la StemCell

El cangrejo de herradura de América, Limulus polyphemus, es sin duda la fuente más conveniente para grandes cantidades de sangre de cualquier invertebrado. La sangre es simple en su composición, con un solo tipo de células en la circulación general, los amebocitos granular, y sólo tres abundantes proteínas en el plasma, la hemocianina, la proteína C-reactiva, y la α2-macroglobulina. La sangre se recoge desde el corazón y las células de la sangre y el plasma se separa por centrifugación.

Extracción de sangre del cangrejo herradura de América, Limulus polyphemus

Aprende a tomar muestras de sangre de la vena lateral de la cola en ratas mediante catéter mariposa. Esta técnica minimiza el estrés del animal y permite muestreos repetidos para estudios fisiológicos y análisis de biomarcadores in vivo.

Toma de muestras de sangre de la vena lateral de la cola de la rata

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