Name: Protocolo papilas Denver para el Análisis Objetivo de papilas fungiformes (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2015-06-08T14:00:00.000+00:00
Duration: 10 min 50 s
Description: Aprende a cuantificar papilas fungiformes de forma estandarizada mediante el protocolo Denver con tinción azul y clave dicotómica. Este método reduce la subjetividad entre observadores en estudios de neurociencia gustativa.

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Este trabajo fue financiado en parte por el Premio de Ciencias de la Educación Asociación (SEPA) R25 RR025066 entre 2008-2012 de los Institutos Nacionales de Salud y el Centro Nacional de Recursos para investigación. Gracias a los colegas en el campo gusto por la discusión seria de la literatura, los resultados y la retroalimentación sobre el uso de DPP en varios escenarios de laboratorio: John Hayes, Sue Coldwell, Paul Breslin, Carla Schubert. Gracias también al liderazgo en el Museo de Denver de Naturaleza y Ciencia y el personal de apoyo a la ciencia ciudadana dentro de la Genética del Laboratorio Taste dentro de la Expedición de la Salud. Por último, gracias a todos nuestros ciudadanos científicos voluntarios por su tiempo y dedicación al desarrollo y el uso de este protocolo, incluyendo: Oso de Aragón, Mike Archer, Su Ataman, Michael Bagley, A&#39;nette Bertrand, Diana Boyles, Wendy Covert, Sasha Dooley , Patty Drever, Jessica Ern, Laura Harmacek, Sean Hibbard, Joyce Hutchens, Matt Joo, Leta Keane, Willem Leenhouts, Stephania Lukjan, Ashley Matthews, Mike Mauser, Stephanie Miller, Hallie Morgan-Rodríguez, Griffin Scherma, Alyssa Schickedanz, Terri Simon, Dylan Thomas, Rudy Torres, Tyler Wilson, Diane Woltkamp.

Las imágenes anotados en este estudio fueron recolectados como parte de un estudio más grande realizado en el gusto la Genética del Laboratorio de Sabor en el Museo de Denver de Naturaleza y Ciencia (Museo) 10. Los sujetos del estudio fueron los visitantes del museo más grande (n = 1195) de edades comprendidas entre 18 a 93. Mientras los sujetos procedían de seis de los siete continentes, los participantes fueron principalmente de origen europeo. Los datos de cada sujeto se recogieron en una sesión de laboratorio 30 min. La Junta de Revisión Institucional Occidental aprobó el protocolo, se le dio el consentimiento informado por escrito, y los sujetos se ofreció voluntariamente su tiempo y no fueron compensados ​​por su participación en el estudio. 1. Recolección de Datos <ol><li> Captura de imagen <ol><li> Mostrar somete una fotografía de cómo posar sí mismos (Figura 1) y lo que la imagen capturada se verá así. <img alt="Figura 1" src="/files/ftp_upload/52860/52860fig1.jpg" /> Figura 1: Captura de imagen Pose. </strong&gt; Esta es la fotografía se muestra a los sujetos en el laboratorio se puso en orden para plantear correctamente para su foto de la lengua. </li><li> Sujetos directos se sequen su lengua con una toalla de papel a mano y dejar la lengua fuera de la boca. </li><li> Aplicar aproximadamente 3 ml de colorante alimenticio azul a una concentración 01:36 hasta el ápice de la lengua usando un aplicador estéril de rayón con una punta de 1 pulgada. Haga que los sujetos regresen lengua a la boca y tragar para eliminar el exceso de tinte. </li><li> Tener temas plantean a sí mismos como se muestra en la Figura 1, con la barbilla en las manos y los codos apoyados en la mesa para la estabilidad. Sujetos directos para extender su lengua una distancia cómoda y segura suavemente entre los dientes. </li><li> Adherir una pieza de 2,5 cm de papel de filtro con un diámetro recorte circular 10 mm perforado en ella a la punta de la parte anterior del lado izquierdo de la lengua al lado de la línea media (véase la Figura 1). </li><li> Tomar por lo menos tres imágenes en primer plano de la lengua, capturing todo el recorte circular de 10 mm para asegurar la visualización de toda la FP dentro de esa área. Utilice el ajuste macro de un punto y disparar la cámara digital de alta calidad montada en un trípode para la estabilidad. <ol><li> Acercar la medida en que todo el recorte es fotografiado mientras que aún dentro del rango de zoom recomendado de la cámara. Asegúrese de que el plano de la lente de la cámara es paralelo al plano de la lengua y de que el recorte circular aparece en la foto en lugar de oblonga. Revise las fotos para asegurarse de que son de alta calidad y útil para contar. </li></ol></li></ol></li><li> Selección de imagen y Preparación <ol><li> Sube las fotos al ordenador. </li><li> De las imágenes tomadas de la lengua del mismo tema, seleccionar sólo una para su posterior análisis en base a una definición clara entre las estructuras de la lengua en el más alto del zoom y el ángulo menos distorsionada por lo que la lengua es ancha y plana hacia la cámara. </li><li> Abre la imagen en bruto seleccionado en la fuente abierta paraftware, ImageJ. Haga clic en &quot;Plugins&quot; y en el desplazamiento de menú desplegable para &quot;Analizar&quot; y haga clic en &quot;Counter Cell.&quot; Cuando se abra el contador de células, haga clic en &quot;Iniciar&quot; para vincular la imagen para el contador celular. Nota: En este caso, utilizar ImageJ 1.45 segundos con 32 bits de Java 1.6.0_10 versión. <ol><li> Utilice un aumento estándar de 50% de coherencia entre goleadores y para uso en los pasos subsiguientes para marcar FP. Mueva esta imagen en el lado izquierdo de la pantalla junto a la contador de células. Esta imagen se denomina Copia A (Ver Figura 2, lado izquierdo de la pantalla). </li></ol></li></ol></li><li> Abra una segunda copia de la imagen en bruto (copia B) para la medición de los diámetros de las papilas se cuantifica. Acercar y alejar según sea necesario para la preferencia del goleador individuo a lo largo del proceso de puntuación. Mueva esta copia en el lado derecho de la pantalla para las dos copias no son accidentalmente confundido. (Vea la Figura 2, lado derecho depantalla) </li><li> Haga clic en la herramienta de línea. El uso de la copia B, acercar tanto como sea necesario para dibujar con precisión un diámetro a través del círculo íntimo del papel de filtro de 10 mm en cualquier ángulo y haga clic en &quot;Analizar&quot; y &quot;Ajuste de escala.&quot; Complete la &quot;distancia conocida&quot; ser &quot;10 . &quot;Verifique la escala es correcta midiendo un ángulo alternativo y asegurar el rango de diámetro está entre 9.8 a 10.2 mm. Si no es así, repita este paso. </li></ol><img alt="Figura 2" src="/files/ftp_upload/52860/52860fig2.jpg" /> Figura 2: Copia A y B. Copia Copia A (izquierda) está vinculada a la ventana contador de células y se mantiene en 50% de aumento para la consistencia de anotador anotador mientras copia B (derecha) puede ser ampliada a la preferencia de la persona. 2. Puntajes FP Utilizando el Protocolo dicotómicos Key Denver papilas <ol><li> Para cada papil candidatola, utilice la clave dicotómica siguiente (paso 2.2 a 2.5) que detalla los criterios para determinar si se trata de una FP. Consulte la Figura 3 para una representación visual de las papilas que se clasifican como FP y para los que son rechazados en cada paso del proceso. <img alt="Figura 3" src="/files/ftp_upload/52860/52860fig3.jpg" /> Figura 3: FP vs. Rechazado papilas. La figura 3a es una lengua con varios calificación FP mientras 3b-3e han circundado áreas que violan cada regla. (3b) área es amorfo; (3c) papilas son demasiado pequeños; 3d) papila es azul en comparación con aquellos que lo rodean, (3e) papila está rebajada en comparación con aquellos a su alrededor. </li><li> Forma <ol><li> Determinar si la papila candidato es amorfo (sin forma). Al 50% de zoom ver si hay una forma geométrica reconocido comúnmente (oval, cúbico, redondo). </li><li> Si hay una forma geométrica (véase la figura 3a), vaya al paso 2.3. </li><li> Si del there es sin forma geométrica (ver Figura 3b), vaya a la ventana del contador celular y haga clic en &quot;Tipo 1.&quot; En la copia A (50% de zoom), haga clic en la papila candidato para marcarlo como amorfo y no un FP. Al hacer clic en los tipos 1-4 en esto y los pasos posteriores permite goleadores sepan que han abordado todas las papilas candidato y categoriza qué regla fue violada al rechazar una estructura que ayudará en la discusión en el paso 2.7.2. </li></ol></li><li> Color <ol><li> Consulte copiar A en 50% de zoom y determinar si hay alguna diferenciación de color sobre la superficie de la lengua. Si es así, continúe con el siguiente 2.3.2. Si no es así, no use el color como un factor determinante; vaya al paso 2.4. </li><li> Determinar si la papila candidato es más ligero que el tejido o papilas que lo rodea (véase la figura 3a). Si alguna parte de la papila candidato ha mantenido rosa o manchado ligero, vaya al paso 2.4. </li><li> Si la papila candidato es azul y las papilas circundantes sonmás ligero (ver Figura 3c), vaya a la ventana del contador de células y haga clic en &quot;Tipo 2&quot; en el contador de células. En la copia A, haga clic en el candidato marcar como demasiado azul y no una FP. </li></ol></li><li> Tamaño <ol><li> El uso de la copia B, acercar a la distancia donde se puede ver cómodamente el contorno de la papila candidato. </li><li> Haga clic en la herramienta de línea y medir a través de la dimensión más larga de la papila candidato. Haga clic en &quot;Analizar&quot; y luego &quot;medida&quot;. Si la longitud medida es de 0,5 mm o más (véase la figura 3a), vaya al paso 2.5. </li><li> Si la longitud medida es 0,499 mm o menos, medir una vez más para asegurar la exactitud. Si todavía es 0.499 mm o menos (ver F igura 3d), haga clic en &quot;Tipo 3&quot; en la ventana contador de células y en el ejemplar A, haga clic en la papila candidato para marcarlo como demasiado pequeño y no un FP. </li></ol></li><li> Recesión <ol><li> El uso de la copia A, evaluar si la papila candidato es bien uniforme queight con el resto de la lengua o elevada. Si la papila es en una grieta, determinar su altura en comparación con las otras estructuras en la grieta, no la superficie de la lengua. Si la papila es más baja que las papilas que lo rodea (ver Figura 3e), utilice &quot;Tipo 4&quot; y en el ejemplar A, haga clic en la papila candidato para marcarlo como empotrado y no una FP. </li><li> Si la papila candidato es o bien de altura uniforme con el resto de la lengua o elevada (véase la figura 3a), utilice &quot;Tipo 5&quot; para hacer clic y marcar que esta es una FP. Este tipo 5 es la puntuación total de FP en bruto. No cierre las copias en este punto como ImageJ no guarda las puntuaciones en el contador de células ni las marcas de colores de los tipos 1-5 en el ejemplar A. </li></ol></li><li> Ahorro Copia A <ol><li> Anote en la puntuación de FP prima portátil. </li><li> En la ventana de contador de células, haga clic en &quot;Exportar imagen.&quot; Guarda con el sistema de denominación deseada del laboratorio. Esto permitirá la apertura de policíay A en el futuro para retener las marcas de colores de tipos 1-5. No va a salvar a la puntuación FP prima. </li></ol></li><li> Control De Calidad <ol><li> Puntuación cada foto por dos goleadores individuales y compara 7. </li><li> Si el mayor puntaje bruto FP está dentro del 10% de la puntuación bruta FP inferior, el promedio de los dos resultados juntos por una puntuación de consenso FP. Si los dos puntajes brutos FP difieren en más de un 10%, tire de ambas fotos anotados en la pantalla. <ol><li> Utilice tipos de contador 1-4 para ayudar en la discusión de las discrepancias y de conferir a una puntuación de consenso final. Si no se pueda alcanzar consenso durante el debate, tomar un descanso de puntuación. En un momento posterior, rescore la imagen y discutir. Si un consenso todavía no se puede alcanzar, tirar en un tercer goleador. Pídales que marcar la imagen y el diálogo con los otros dos. </li></ol></li></ol></li></ol> 3. Formación Goleadores de utilizar DPP <ol><li> Antecedentes de Formación <ol><li> Tener dos goleadores contar una variedad de imágenes,anotando de forma individual y que confiere regularmente para asegurarse de que estaban utilizando los mismos criterios. Sólo cuando los recuentos individuales fueron consistentemente dentro del 10% de cada uno para cada las imágenes cuando marcó fue el método (finalizado arriba) considera aceptable y calificó DPP. </li><li> Elija 15 imágenes oficiales y 15 imágenes de entrenamiento (Suplementario Figuras 2-17) en orden secuencial para anotar. Si una imagen se consideró incontable durante la selección, no tome la imagen y elija siguiente imagen secuencial. Nota: Estas imágenes varían en calidad y tamaño que fueron elegidos, mientras que el laboratorio seguía dominando la técnica de la fotografía correcta. Una de las imágenes seleccionadas se consideró incontable a través de este proceso de escrutinio primario, pero fue dejado en asegurar que goleadores fueron capaces de hacer esa llamada cuando sea necesario. Por lo tanto hay 16 imágenes dadas a los alumnos aunque sólo 15 obtuvieron imágenes. </li><li> El uso de DPP, se los goleadores mencionados contar las 15 imágenes de entrenamiento y crear un consensoanotar para cada uno. </li><li> Dé alumnos las 15 imágenes oficiales y pida calificar usando Miller &amp; Reedy para crear una línea de base. Anota récord. Llevar a cabo un entrenamiento en grupo que siguió el paso 3.2. Una vez completado el paso 3.2, tienen los goleadores puntúan las 15 imágenes oficiales de nuevo y registrar sus puntuaciones. </li></ol></li><li> Formación Goleadores posteriores sobre DPP <ol><li> Dé goleadores formación la primera imagen de formación y demostrar DPP para unos pocos papilas en esta imagen. Discuta el razonamiento para seleccionar o rechazar cada papila como FP. Permitir a los alumnos a que sigan practicando puntuable para el resto de la foto y consultan con el número de consenso (por número consenso del Gobierno de Taiwán y Laboratorios Tipo 1-5 marcadores, ver Figura 1). Por esta foto discutir cualquier discrepancia con independencia del 10% para asegurar la comprensión del DPP. </li><li> Dé goleadores posteriores la segunda imagen de formación y hacer que se puntúan usando DPP. </li><li> Si la puntuación FP prima aprendiz es dentro de los diezpor ciento del consenso establecido recuento de la sección 3.1.3., deje de aprendiz para mover a la siguiente imagen y repita los pasos. </li><li> Si la puntuación está fuera del rango del diez por ciento, utilice marcas coloreadas del aprendiz que representan tipos 1-5 para entender e identificar la inconsistencia y luego abordar la comprensión discrepante del DPP. </li><li> Dar al alumno la oportunidad de rescore la imagen y verificar la nueva puntuación una vez más. Si tiene éxito, aprendiz mueve a la siguiente imagen hasta que se completen todas las imágenes. </li></ol></li></ol>

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</ol>

Los autores declaran que no tienen intereses financieros en competencia.

El uso de DPP, la varianza dentro de la imagen a través de cuenta goleadores independientes y cuenta de dentro-goleador disminuyó significativamente. Si bien este método hace que el análisis de densidad FP visual sin videomicroscopia menos subjetiva, debe tenerse en cuenta que este método sólo puntuaciones de FP. DPP no puede garantizar que las estructuras clasificadas como FP tienen poros de sabor y son, por tanto, las papilas gustativas ni que los recuentos son un reflejo de la densidad brote verdadero sabor 20,23 .La naturaleza de este método es que establece la confiabilidad a través de la consistencia y precisión; sin embargo, puede ser sesgando los resultados en una dirección coherente. Para probar la precisión con respecto a otros métodos utilizando una verdadera medida de la densidad de yema del gusto (por ejemplo, videomicroscopía) se extendería más allá del alcance de esta study.However, mediante la caracterización de la morfología de FP más estricta y la creación de una clave dicotómica, este método se dirige a Miller &amp; cargo de Reedy al campo que más caracterización de FPque hay que hacer para tener un consenso sobre su morfología y cuantificación 2. Además, indicaron que esta caracterización puede &quot;aclarar algunas de las diferencias entre los sujetos y explicar algunos de los resultados dispares entre los investigadores 2.&quot; Al proporcionar un método uniforme de cuantificación, muchas de las discrepancias sobre el papel de la FP en sabor y nutricionalmente investigación relacionada puede ser rectificado. La clave dicotómica se puede ajustar para las diferentes técnicas de captura de imagen. La distancia conocida para la escala de medición se puede configurar fácilmente al diámetro utilizado en cada laboratorio y la recesión se puede descartar si envoltura o vidrio saran se colocaron sobre la lengua para la captura de imágenes. En el Laboratorio de GOT, se encontró que la lengua neutra proporciona la mejor definición de las papilas. Esto puede ser debido a la cantidad de luz en el laboratorio que causó envoltura o vidrio saran para reflejar la luz de nuevo en la cámara de la creación de una mirada que hizo asnoseva- difícil. Algunos laboratorios han dicho que encuentran el tinte más difícil de contar, pero el laboratorio GoT encontrado un colorante alimenticio azul diluido a una concentración de una y treinta y seis minutos siempre que el contraste ideal entre fungiformes papilas filiformes y en la mayoría de las lenguas. La creación de una clave dicotómica para la caracterización FP permitirá a los investigadores en diferentes laboratorios, utilizando una variedad de métodos de captura de imagen, para analizar sistemáticamente las estructuras en la lengua y tener confianza en la comunicación de sus resultados. Por último, el uso de una clave dicotómica puede tener efectos en otras áreas de la metodología científica en donde las cualidades de estructuras u objetos están proporcionando los números inconsistentes de estudio a estudio.

Las papilas son los golpes visibles en la superficie de la lengua. Hay cuatro tipos de papilas fungiformes: (FP), foliadas, caliciformes y filiformes. Mientras papilas filiformes se extienden sobre la superficie de la lengua, circumvallate se localizan sólo en la parte posterior de la lengua, y foliadas se encuentran en los lados. En contraste, FP están situados hacia la parte delantera de la lengua. FP, foliadas, y papilas caliciformes se consideran gustativa porque tienen el potencial de contener papilas gustativas filiformes, mientras no lo hagan. Las papilas gustativas son grupos de células responsables de la detección de estimulantes del gusto químicos y la transducción de los estímulos en una señal gustativa en el cerebro. Saliva y alimentos moléculas entran en las papilas gustativas a través de aberturas llamadas poros papilas gustativas donde las moléculas y luego tienen el potencial de activar células gustativas. Curiosamente, hay grandes diferencias individuales en la densidad de la yema del gusto, como se observa por primera vez en un estudio histológico de las lenguasde 18 cadáveres (Miller, 1988) 1. Las papilas gustativas en sí no son visibles en la superficie de la lengua, sin embargo, los poros del gusto son visibles cuando se utilizan las técnicas adecuadas de ampliación, de iluminación y de tinción que llevaron Miller &amp; Reedy (1990) para desarrollar un método para identificar los poros del gusto y papilas fungiformes utilizando videomicroscopía en la vida los seres humanos 2. Varios laboratorios han modificado su técnica videomicroscopía original, utilizando la fotografía fija y poco o ningún aumento. Sin embargo, desde papilas fungiformes son mucho más fáciles de visualizar que son poros utilizando estas últimas técnicas, laboratorios se volvieron a contar papilas fungiformes en lugar de poros gustativas. Al hacerlo, se asume que la densidad de papila fungiformes es una medida de proxy razonable para la densidad de poro gusto, a pesar de que las papilas fungiformes muchos no contienen poros de sabor o paladar 3; no sólo son FP más visible y accesible que circunvaladas y papilas foliadas, pero su captura de imagen es inferior time consume que el análisis de los poros gusto por el método alternativo de videomicroscopía 2,4. En 1990, Miller &amp; Reedy utilizan esta técnica para encontrar ese sabor densidades de poro se correlacionan con densidades de PF 3 que fue corroborada en Bartoshuk et al. 5 Además de esta relación anatómica, Miller &amp; Reedy también encontraron que los 8 individuos en la parte superior medio de la distribución de la densidad de poros gusto también una clasificación de sacarosa, NaCl, y el propiltiouracilo (PROP) como significativamente más intensa que lo hicieron las otras 8 personas 3. Trabajos posteriores por Bartoshuk et al. (1994) observó una correlación entre la intensidad de sabor PROP supraumbral y densidad papila fungiformes, así como la densidad de poros gusto, en 42 sujetos 5. Este método conveniente llevó a los estudios influyentes de información que los sujetos cuyas lenguas tienen muchas papilas provocan una reacción más fuerte a muchos estimulantes del gusto, incluyendo el estimulantes del gusto amargo feniltiocarbamida (PCT) y PROP 6,7. PTC y PROP son estimulantes del gusto bien investigados frecuentemente utilizados debido a la clara relación entre fenotipo sensibilidad del gusto de una persona y su genotipo. Los estudios de población han demostrado que las personas que tienen la diplotype recesiva homocigota del gen, TAS2R38, tienen una sensibilidad significativamente menor para sostener que los portadores de la variante dominante o heterocigótico del gen 8-10. Este fenómeno hereditario se informó por primera vez en 1932, cuando Arthur L. Fox anunció su descubrimiento de la &quot;ceguera gusto&quot; a PTC 11. Entre las personas capaces de probar estos compuestos amargos, la intensidad del gusto informó pueden variar en cualquier lugar desde un poco desagradable para terriblemente amarga 6. Para tener en cuenta la varianza que no puede ser explicado por TAS2R38, la teoría fue propuesta que podría atribuirse a la densidad de FP en la lengua 4. Como la investigación gusto avanzaba, el field se dividió en dos escuelas de pensamiento en torno a esta teoría sobre el papel de FP y sensibilidad sabor amargo. Aunque muchos estudios corroboran la afirmación original de que la densidad de FP es un factor en el PROP sensibilidades 4,6,12,13, ha habido una contingencia pequeña, pero importante, que se ha encontrado evidencia para refutarlo, reportando una incapacidad para replicar la función 10, 14,15,16. Delwiche et al. (2001) advirtió que la tendencia es muy variable; Densidad FP hace cuenta no uniforme de las diferencias en la sensibilidad a la amargura a través de temas, y fue sólo demostrable para los sujetos con al menos una sensibilidad moderada a PROP 7. Además de la utilización de la Miller &amp; Reedy método definido con menos rigor en la forma de cuantificar FP, es importante señalar que con excepción de la Offspring Beaver Dam Study 15 realizado por Fischer et al., La mayoría de los estudios anteriores tenían pequeña muestra tamaños que también pueden contribuir a resultados inconsistentes enel papel de la FP en el sabor. En pocas palabras, en Miller &amp; Reedy del documento sobre la metodología seminal (1990), los autores manchadas lenguas azules de cuantificar porque FP FP siguen siendo de color rosa, mientras que las papilas filiformes absorben el colorante y se vuelven azules. Se clasifican FP como &quot;estructuras redondeadas de color rosa alrededor de 0,5 mm de diámetro&quot; 2. Si bien los autores informaron que antes de utilizar este método para su posterior labor de análisis, las características de FP deberían estar más estrictamente definidos y concluyeron que la variación ya se ha señalado en la literatura &quot;podría ser atribuible a diferentes poblaciones sometidas, diferentes métodos y diferentes investigadores&quot; 2, su la investigación ha dado lugar a las características comúnmente aceptadas que el FP sean redondos 17,18, amplio 2, rosa o manchado ligero 2, 4 y elevado. A primera vista, estas características parecen muy sencillo. En la Genética del Laboratorio Taste (GOT Lab o laboratorio), el uso del conocidohod se complicó por los intentos individuales de artilleros en la clasificación y priorización de la importancia de las características anteriores, cuando algunas, pero no todas, de las características estaban presentes. Estas complicaciones incluyen pequeñas papilas que apareció rosa en medio de mucho mayor papilas; toda la lengua que absorbe el colorante azul eliminando así clasificación basada en la variación de color; papilas oblonga en vez de todo el año; y las lenguas que no tienen variación en elevación, todo lo cual contribuyó a goleadores de informes ampliamente variados conteos de PF de la misma imagen. Estas variaciones en el análisis nos llevó a revisar la literatura con el fin de determinar la subjetividad, se determinarán las excepciones a las características de PF comúnmente aceptadas y finalmente elaborar un protocolo para definir y marcar con precisión y objetividad FP. En primer lugar, FP forma se describe en la literatura como un redondeado, en forma de hongo estructura 17,18. Sin embargo, notable excepciónTambién se mencionaron los iones. Miller hizo hincapié en que el término &quot;fungiformes&quot; es un término equivocado y que muchos FP no están en forma de seta, pero puede variar ampliamente en tamaño y morfología de 18. Melis et al. (2013) también describe varios papilas que se considera &quot;distorsionada&quot;, donde el diámetro FP en una dirección era por lo menos dos desviaciones estándar por más tiempo que en otra dirección 19. Por otra parte, Cheng &amp; Robinson encontraron que al indicar FP mediante tinción, que oscilaron entre plana rematada a alargada en aspecto 20. Tomando nota de las excepciones mencionadas, la caracterización de un FP de ser redonda y aparece en forma de hongo una definición demasiado estrecha. En segundo lugar, el color FP se describe como &quot;círculos de color rosa contra un fondo azul&quot; 7 después de la tinción de la lengua con colorante azul. Aunque las manchas más ligero era el criterio más coherente de FP en toda la literatura todavía no era un partido de clasificación uniforme. Cheng y<html> ; Robinson observó que el FP no siempre se tiñeron levemente, por lo que la identificación difícil e incierta 20. Parece entonces que las lenguas absorben tinte diferente y mientras que el contraste es evidente en muchas lenguas, algunas se vuelven completamente azul sin distinción, mientras que otros pierden inmediatamente cualquier rastro de colorante azul 21. La tercera característica, el tamaño de FP, era bastante consistentes entre los papeles, que van desde 0,5 mm a 0,97 mm 6,18. En la literatura Miller observó que había dos rangos de tamaño de papilas en la parte anterior dorsal de la lengua. Las papilas con diámetros más grandes eran principalmente fungiformes y papilas cónica, mientras que las papilas con un diámetro más pequeño eran en su mayoría filiforme 18. Sin embargo, con la excepción de la Offspring Beaver Dam Study 21, el tamaño no apareció para determinar si una estructura es un FP en la literatura, pero se proporcionan para papilas ya clasificada como &quot;fungiformes&quot;. _content &quot;&gt; Por último, la elevación aparece como el cuarto FP característica 4 aunque Miller señaló que la distinción entre filiformes y papilas fungiformes es difícil cuando se utiliza este criterio cerca del margen de la lengua. Dio dos ejemplos de FP que variaron en gran medida en la elevación, uno de ellos 0,8 mm de altura, mientras que otro fue de menos de 0,1 mm de altura, pero todavía tenía dos poros gustativas que se observaron con claridad 18. Esta observación también fue seguido y confirmado por Shahbake et al. 4 Estas definiciones y sus excepciones reportados muestran que el campo gusto ha reconocido desde hace tiempo la falta de coherencia en la caracterización de FP y las deficiencias del protocolo de uso común de Miller &amp; Reedy. De hecho, Miller &amp; Reedy exhortaron el campo para definir con más detalle las características de FP 2. La hipótesis de que goleadores estaban dando un peso diferente a las características y priorizar su importancia de manera diferente cuando papillae no cumplió con todos los criterios, por ejemplo, cuando una papila era grande y con forma de hongo, pero manchada azul. Se razonó que los investigadores de los estudios publicados anteriormente probablemente hicieron lo mismo que, cuando se combina con pequeños tamaños de muestra, puede dar cuenta de la variedad de resultados procedentes del uso de este método. El Gobierno de Taiwán Lab abordó este vacío en la metodología FP mediante el desarrollo de una guía que define cada característica utilizando mediciones objetivas y prioriza las características para indicar que tiene prioridad en el análisis. Este método es el Protocolo de Denver papilas (DPP), una clave dicotómica con características claras y distintas de FP para garantizar recuentos precisos y repetibles a partir de fotografías digitales de la lengua. DPP es un método propuesto para estandarizar el método de Miller &amp; Reedy utilizado previamente, eliminando así la interpretación individual y garantizar resultados más consistentes en el análisis de la densidad de FP. Al hacerlo, DPP se puede utilizar para más confianza determine el papel de la FP en el sabor. Las imágenes tomadas de la lengua de los temas fueron analizados por los científicos ciudadanos (goleadores) del laboratorio que son los verdaderos sujetos de este estudio. Núcleo del Laboratorio de ciudadanos científicos está compuesta por miembros de la comunidad con edades (años) de 16 a mediados de los años 80. Un informe de evaluación sumativa encargado por el Museo en 2012 describe ciudadanos científicos como tener un fuerte interés por la ciencia y con dos tercios de haber ganado un título universitario en una disciplina científica 22. Ciudadanos científicos Candidato son reclutados actualmente a través del boca a boca, debe completar con éxito un proceso de entrevistas con voluntarios veteranos en el Museo, y someterse a un período de prueba en la exposición permanente de salud del Museo, la Expedición de la Salud, antes de que tengan la oportunidad de aplicar para una posición en el laboratorio. Una vez aceptado en el laboratorio, los científicos ciudadanos se someten a un entrenamiento de 12 semanas para obtener la certificación para inscribirse sujeto humanos. A raíz de esta certificación, que son capaces de tomar los módulos de formación en diversas técnicas en el laboratorio (por ejemplo, recuento papilas, la extracción de ADN) y siguientes certificaciones adicionales y medidas regulares de control de calidad, estos científicos ciudadanos tienen la oportunidad de participar activamente en el análisis de datos. Ciudadanos científicos ofrecen voluntariamente su tiempo y no son compensados ​​por sus contribuciones al Museo.

<table><tbody><tr><td>Imagen J</td><td>Institutos Nacionales de Salud</td><td><a href="http://rsb.info.nih.gov/ij">http://rsb.info.nih.gov/ij</a></td><td></td></tr><tr><td>Colorante alimentario, Tono azul intenso</td><td>Esco</td><td>http://escofoods.com/blue-food-coloring.html</td><td></td></tr><tr><td>Rayón estéril con punta de OB/GYN Aplicadores</td><td>Puritan</td><td>25-808 1PR</td><td></td></tr><tr><td>Grado 1 Papel de filtro</td><td>Whatman Whatman</td><td>No.: 1001-325</td><td></td></tr><tr><td>Coolpix P100 (10,3 megapíxeles) y P500 (12,1 megapíxeles)</td><td>Nikon</td><td>http://imaging.nikon.com/lineup/coolpix/</td> <td>ninguno de los dos modelos parece estar disponible en el sitio web</td></tr><tr><td>Papel Toallas de Mano</td><td>Kleenex</td><td>https://www.kleenex.com/HandTowelsDetail.aspx</td><td></td></tr></tbody></table>

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Denver Papillae Protocol for Objective Analysis of Fungiform Papillae

El objetivo del Protocolo papilas Denver es utilizar una clave dicotómica para definir y priorizar las características de papilas fungiformes (FP) para asegurarse de puntuación consistente entre goleadores. Este protocolo se basa apagado de una necesidad que ha surgido de las últimas dos décadas de investigación gusto usando FP como sustituto de la densidad de poros gusto. Densidad FP históricamente ha sido analizado utilizando Miller y Reedy de 1990 caracterizaciones de su morfología: redondo, manchado ligero, grande y elevada. En este trabajo, los autores advertidos de que las definiciones más estrictas de FP morfología necesaria a perfilarse. A pesar de este llamado a la acción, el seguimiento de la literatura ha sido escasa, con la mayoría de los estudios continuos para citar Miller &amp; Reedy del trabajo original. En consecuencia, los informes de densidad FP han sido muy variables y, combinado con pequeños tamaños de muestra, puede contribuir a las conclusiones discrepantes sobre el papel de FP en el sentido del gusto. La Genética del Laboratorio Taste exploraron esta aparente inconconsistencia en el conteo y se encontró que goleadores fueron priorizando individualmente la importancia de estas características de forma diferente y no tenía ninguna orientación para cuando una papila tenía algunos, pero no todos, de las cualidades reportados de FP. El resultado de esta subjetividad es recuentos de PF altamente variables de la misma imagen lengua. El Protocolo papilas Denver ha sido desarrollado para remediar esta consecuencia mediante el uso de una clave dicotómica que más define y prioriza la importancia de las características presentadas por Miller &amp; Reedy. El método propuesto podría ayudar a crear una forma estándar para cuantificar la FP para los investigadores en el campo del gusto y estudios nutricionales.

Aquí está una fotografía representativa anotó por dos goleadores individuales cuando se utiliza la metodología de Miller &amp; Reedy comúnmente utilizada para la identificación de FP basado en las normas de procedimiento de la redonda, grande, de color rosa o manchado ligero, y elevado, y luego la misma fotografía anotó por dos goleadores usando DPP. Los recuentos mostrados son representativos de la alta variación observada usando el método original en comparación con la menor varianza usando DPP. <img alt="Figura 4" src="/files/ftp_upload/52860/52860fig4.jpg" /> Figura 4:. Miller &amp; Reedy Cuantificación vs DPP Cuantificación La imagen de la izquierda es el representante de los recuentos de dos goleadores &#39;utilizando el método de Miller &amp; Reedy. La imagen de la derecha representa dos cargos goleadores &#39;utilizando DPP. Rojo es el máximo goleador 1, Amarillo es el máximo goleador 2, verde es goleadores 1 y 2. Fiabilidad estadística de DPP fue estudiado previamente usando un modelo lineal mixto para evaluar la variabilidad 10. En pocas palabras, para generar datos para evaluar el papel de la DPP juega en la consistencia de las puntuaciones, imágenes quince se anotó dos veces. En el primer lote de las puntuaciones, DPP goleadores ingenuos utilizan el método de Miller &amp; Reedy 2. Los goleadores fueron entrenados para usar DPP y las imágenes se vuelven a puntuar de forma individual sin la etapa de consenso final se describe en la sección 2.7 detalla Control de Calidad (Figura 5). El conjunto de datos puntuación FP luego se utilizó en el modelo mixto para evaluar las diferencias combinados debido al protocolo (Figura 6), la variabilidad dentro de goleador y la interacción entre los dos. Este modelo mostró una diferencia significativa en la puntuación cuando se utiliza el método de Miller &amp; Reedy en comparación con DPP (valor de p &lt;1 x 10 -6) con DPP que conduce a un aumento en el recuento por 6.99 (SE = 0,99); 5,2% de la variabilidad en la puntuación se debió a la formación, el 25,9%, debido al goleador, y el remanentea la variabilidad específica a la imagen 10. A continuación, para generar datos para determinar la variabilidad dentro de goleador, una serie de treinta imágenes en orden aleatorio fue evaluado por 11 individuos. Sin el conocimiento de goleadores, esta serie de imágenes incluidas tres imágenes que se repiten. Se observó una diferencia drástica en la variabilidad puntuación comparando imágenes distintas versusrepeated imágenes. <img alt="Figura 5" src="/files/ftp_upload/52860/52860fig5.jpg" /> Figura 5:. DPP-Naïve vs Publicar DPP Formación paneles proporcionan diagramas de caja de las puntuaciones de los viajeros para 15 imágenes pre y post entrenamiento Protocolo papilas Denver. Para cada diagrama de caja, un lleno en el círculo indica la media, mientras que un círculo abierto indica un valor atípico. <img alt="Figura 6" src="/files/ftp_upload/52860/52860fig6.jpg" /> Figura 6:. Cambio en Goleador Varianza El gris representa tque la varianza de goleadores individuales anteriores a la formación de la DPP. Negro es el entrenamiento mismo puesto goleador DPP.

Aquí se presenta un protocolo para medir la densidad de la papila fungiformes de fotografias digitales. Este método se basa el establecimiento de prioridades y la métrica características objetivas en el trabajo descriptivo original en papilas fungiformes por Miller &amp; Reedy (1990).

Protocolo papilas Denver para el Análisis Objetivo de papilas fungiformes

The goal of the Denver Papillae Protocol is to use a dichotomous key to define and prioritize the characteristics of fungiform papillae (FP) to ensure ...

El objetivo general de este procedimiento es cuantificar de manera consistente entre evaluadores y laboratorios las papilas fungiformes mediante el uso de una clave dicotómica. Esto se logra primero tiñendo la lengua del sujeto con colorante alimentario azul y colocando un papel filtro con una abertura de un centímetro sobre la lengua. El segundo paso consiste en capturar una imagen de alta calidad en primer plano de la lengua del sujeto.A continuación, el evaluador utiliza la clave dicotómica para examinar la forma, el tamaño, el color y la elevación de la papila candidata. Una papila que no es amorfa, es al menos 0,5 milímetros más rosada que el fondo y no está retraída, se califica como papila en forma de hongo. El paso final consiste en comparar los conteos entre dos evaluadores y asegurarse de que los conteos difieran en menos del 10 %.En última instancia, el protocolo de Denver Papillae se utiliza para definir y priorizar las características de las papilas de forma fúngica, con el fin de garantizar un recuento consistente entre evaluaciones y laboratorios. La principal ventaja de esta técnica frente a métodos existentes, como el protocolo de Miller y Read, es que reduce la subjetividad de las evaluaciones al cuantificar las papilas de forma fúngica. Esto se logra mediante la definición clara de cada característica y mediante el uso de una clave dicotómica que asegura que todas las estructuras clasificadas como papilas de forma fúngica cumplan con cada uno de los criterios.Este método ayuda a responder preguntas clave en el campo del gusto, como definir el papel, si existe alguno, que desempeña la densidad de las papilas fungiformes en la percepción del sabor. Tuvimos por primera vez la idea de este método cuando pedimos a nuestros científicos ciudadanos que contaran las papilas fungiformes utilizando el método de Miller y Reading, pero notamos que los conteos variaban enormemente para la misma imagen de la lengua. Al hablar con los evaluadores, descubrimos que habían priorizado las características de manera diferente y que variaban en la forma en que contaban las papilas que cumplían con algunos, pero no con todos, los requisitos.El procedimiento lo demostrará Rudy Torres, un científico ciudadano voluntario en el laboratorio de genética del gusto. Para preparar a los sujetos para este procedimiento, muéstreles una fotografía que indique cómo deben colocarse y cómo se verá la imagen capturada. Indique al sujeto que seque su lengua con una toalla de papel y que mantenga la lengua protruyendo fuera de la boca.Utilizando un aplicador estéril de rayón con una punta de una pulgada, aplique aproximadamente tres mililitros de colorante alimentario azul en una concentración de uno a 36 en el ápice de la lengua. Instruya al sujeto a devolver la lengua a la boca y tragar para eliminar el exceso de colorante. A continuación, indique al sujeto que adopte la postura mostrada en la fotografía, con el mentón apoyado en las manos y los codos apoyados sobre una mesa para mayor estabilidad.Indique a la persona que saque la lengua una distancia cómoda y la sostenga suavemente entre los dientes. Adhiera un trozo de papel de filtro de 2,5 centímetros con un recorte circular de 10 milímetros de diámetro al extremo interno del lado izquierdo de la lengua. Junto a la línea media, fije una cámara digital compacta de alta calidad a un trípode para mayor estabilidad.Utilizando el ajuste macro, tome al menos tres imágenes de cerca de la lengua, capturando todo el recorte circular de 10 milímetros para asegurar la visualización de todos los hongos, formm, papilas o FP dentro de esa área. Acérquese hasta el punto en que todo el recorte sea fotografiado, pero aún dentro del rango de zoom recomendado por la cámara. Asegúrese de que el plano del lente de la cámara sea paralelo al plano de la lengua y de que el recorte aparezca circular en la foto.En lugar de fotos de revisión alargadas, asegúrese de que sean de alta calidad y útiles para el conteo. Comience este procedimiento cargando las fotos en la computadora, correspondientes a las imágenes tomadas de la lengua del mismo sujeto. Seleccione solo una para análisis posterior, basándose en una definición clara entre las estructuras de la lengua con el mayor acercamiento posible y el ángulo menos distorsionado, de modo que la lengua aparezca amplia y plana frente a la cámara.Abra la imagen en bruto seleccionada en el software de código abierto ImageJ. Haga clic en complementos y, en el menú desplegable, desplácese hasta analizar y haga clic en contador de células. Cuando se abra el contador de células, haga clic en inicializar para vincular la imagen al contador de células. Utilice una magnificación estándar del 50 % para mantener la coherencia entre las puntuaciones y para su uso en pasos posteriores.Para puntuar fp, mueva esta imagen al lado izquierdo de la pantalla junto al contador de células. Esta imagen se denominará Copia a. Abra una segunda copia de la imagen original para medir los diámetros de las papilas que se están cuantificando. Mueva esta copia al lado derecho de la pantalla para que no se confundan accidentalmente ambas copias.La segunda imagen se denominará copia B. Acérquese o aléjese según sea necesario según la preferencia individual durante todo el proceso de puntuación. Haga clic en la herramienta de línea utilizando la copia B. Acérquese todo lo necesario para dibujar con precisión un diámetro a través del círculo interno de 10 milímetros del papel de filtro en cualquier ángulo y haga clic en analizar y establecer escala. Complete la distancia conocida como 10.Verifique que la escala sea correcta midiendo un ángulo alternativo y asegúrese de que el rango de diámetro esté entre 9,8 y 10,2 milímetros. El protocolo Denver PAPALE o DPP considera la forma, el color, el tamaño y el grado de retracción de cada papila candidata para determinar si se trata de una fp. El procedimiento para entrenar las puntuaciones en el uso de la clave dicotómica no se mostrará en este video, pero está disponible en el texto del protocolo adjunto para comenzar la evaluación.Determine si la papila candidata es amorfa o carece de forma a 50 % de aumento. Observe si presenta una forma geométrica comúnmente reconocida, como ovalada, cúbica o redonda. Si no hay una forma geométrica, vaya a la ventana del contador de células y active el tipo uno.Copie A. Haga clic en la papila candidata para marcarla como amorfa y no como una fp. Al hacer clic en los tipos del uno al cuatro en este y en los pasos siguientes, los evaluadores pueden saber que han analizado todas las papilas candidatas y se categoriza qué regla se violó al rechazar una estructura. Si la papila candidata tiene una forma geométrica, continúe con el siguiente paso para examinar su color, consulte el copiado A y determine si existe alguna diferenciación de color sobre la superficie de la lengua.Si hay una diferenciación de color, pero la papila candidata es azul y las papilas circundantes son más claras, vaya a la ventana del contador celular y haga clic en el tipo dos del contador de células en la copia A. Haga clic en la papila candidata para marcarla como dos azules y no como una fp. Si no hay diferenciación de color, o si alguna parte de la papila candidata permanece rosa o tiñe más claro, continúe con el siguiente paso para la determinación del tamaño. Utilizando la copia B, acerque la imagen hasta la distancia en la que se pueda ver cómodamente el contorno de la papila candidata.Haga clic en la herramienta de línea y mida a lo largo de la dimensión más larga de la papila candidata. Haga clic, analice y luego mida si la longitud medida es de 0,499 milímetros o menos. Mida una vez más para asegurar la precisión.Si aún mide 0,499 milímetros o menos, haga clic en el tipo tres en la ventana del contador de células y luego haga clic en el botón de candidato para marcarlo como demasiado pequeño y no como un fp. Si la longitud medida es de 0,5 milímetros o más, continúe examinando su recesión utilizando copia a para evaluar si la papila candidata tiene una altura uniforme con respecto al resto de la lengua o si está elevada. Si la papila se encuentra en una hendidura, determine su altura en comparación con las demás estructuras dentro de la hendidura, no con respecto a la superficie de la lengua.Si la papila es más baja que las papilas que la rodean, haga clic en el tipo cuatro en la ventana del contador de células y, en la copia A, haga clic en la papila candidata para marcarla como retraída y no como fp. Si la papila candidata tiene una altura uniforme con respecto al resto de la lengua o está elevada, haga clic en el tipo cinco y marque que se trata de una fp. Este total del tipo cinco es la puntuación FP bruta.Anote la puntuación bruta de FP en un cuaderno para guardar una copia, haga clic en exportar imagen en la ventana del contador de células y guarde con el sistema de nomenclatura deseado del laboratorio. Esto permitirá abrir la copia A en el futuro para conservar las marcas de colores de los tipos del uno al cinco. No guardará la puntuación bruta de FP para control de calidad.Cada foto debe puntuarse con dos puntuaciones individuales y compararse la puntuación. Si la puntuación bruta más alta de FP está dentro del 10 % de la puntuación bruta más baja de FP, las dos puntuaciones se combinan para obtener una puntuación de consenso de FP. Si las dos puntuaciones brutas de FP difieren en más del 10 %, coloque ambas fotos puntuadas en la pantalla.Utilice los tipos de conteo del uno al cuatro para ayudar en la discusión de discrepancias y acordar una puntuación final consensuada. Si no se puede alcanzar un consenso, incorpore una tercera puntuación para evaluar la imagen y luego dialogue con las otras dos puntuaciones. Una fotografía representativa fue puntuada inicialmente por dos evaluadores individuales utilizando la metodología comúnmente empleada de Miller y 3D para la identificación de FP.Luego, la misma fotografía fue evaluada por dos evaluadores utilizando el DPP. El color rojo corresponde al evaluador uno, el amarillo al evaluador dos, y el verde indica coincidencia entre ambos evaluadores. Los conteos muestran un ejemplo representativo de la alta varianza observada al utilizar el método original en comparación con la menor varianza obtenida al usar el DPPA, en una comparación de las puntuaciones de variantes para 11 evaluaciones individuales.La capacitación previa a la DPP mostrada en gris y la capacitación posterior a la DPP mostrada en negro revelaron una disminución significativa en la puntuación de varianza después de la capacitación en DPP. Una vez dominada, esta técnica puede realizarse en menos de cinco minutos por imagen. Al intentar este procedimiento, es importante hacer pausas frecuentes para asegurar una visión fresca en cada foto y garantizar que se observe cada papila candidata.Después de ver este video, debería tener una buena comprensión de cómo cuantificar de manera consistente los hongos que forman papilas utilizando una clave dicotómica.

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Research

Investigación

JoVE Journal

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Neurociencia

Conocimiento de los mecanismos moleculares que subyacen en la transducción del gusto ha disfrutado recientemente de importantes avances, en gran parte debido al uso de modelos animales. Sin embargo, la gran diversidad en el sentido del gusto y la especificidad entre los órdenes de mamíferos estudios en el tejido humano. Se describe una técnica de biopsia para recoger las células vivas el sabor de las papilas de la lengua humana.

Técnica para recopilar fungiformes (gusto) Las papilas de la lengua humana

El objetivo fue desarrollar un protocolo reproducible para aislar y mantener a largo plazo de cultivos de células humanas las papilas fungiformes gusto. Las células de las papilas fungiformes humana obtenidas por biopsia se mantuvieron con éxito en la cultura durante más de ocho pasos (12 meses) sin pérdida de viabilidad.

Aislamiento y cultivo de células humanas las papilas fungiformes gusto

En este video, describimos el aislamiento del epitelio de las papilas circunvaladas (CVP) de una lengua murina.

Aislamiento del epitelio de papilas circunvaladas (CVP) de un modelo de ratón: un procedimiento enzimático para separar el epitelio de CVP de la lengua de ratón

Quimiorrecepción oral de ácidos grasos y la asociación con la dieta y los grasos preferencias de alimentos puede permitir la identificación de los mecanismos implicados en el desarrollo de la obesidad y por qué los cambios en la dieta puede ser difícil para muchas personas.

Medición oral de ácidos grasos Umbrales, Percepción de grasa, alimentos grasos gusto, y papilas Densidad en Humanos

Los estudios sobre el desarrollo del paladar están motivados por la incidencia de paladar hendido, un defecto de nacimiento que impone una carga de salud tremenda y puede dejar la desfiguración permanente. Se demuestra aquí una técnica para estantes cultura palatinas que se pueden utilizar para estudiar diferentes vías de señalización implicadas en el desarrollo de paladar y la fusión.

Método de estudio palatina Fusión usando estático Organ Culture

Cambios en el microbioma oral a lo largo de la infancia son de creciente interés. Comparación de microbioma diferentes estudios revela una falta de protocolos de muestreo estandarizados. Espacio limitado hace muestreo del sonido surco subgingival de niños desafiantes. Papel punto de muestreo se presenta aquí en detalle como el método de elección para esta área.

Biofilm oral toma de muestras para análisis de microbioma en niños sanos

Este protocolo mide respuestas de gusto humano e incluye una breve valoración anatómica, una prueba corta del sabor y un método de validación mediante reportado sensación y gusto del receptor genotipo del sujeto.

Examen de gusto: Una prueba breve y validada

Este documento describe métodos para la preparación de tejidos, tinción y análisis de papilas gustativas completas fungiformes, circunvaladas y del paladar que producen consistentemente papilas gustativas enteras e intactas (incluidas las fibras nerviosas que las inervan) y mantienen las relaciones entre las estructuras dentro de las papilas gustativas y la papila circundante.

Tinción, visualización y análisis de papilas gustativas fungiformes, circunvaladas y del paladar

Este artículo describe en detalle un protocolo para electroporar en el útero de la corteza cerebral y el hipocampo en E14.5 en ratones. También se muestra que este es un método valioso para estudiar las dendritas y espinas en estas dos regiones cerebrales.

La visualización y la manipulación genética de las dendritas y espinas en la corteza cerebral y el hipocampo del ratón usando<em&gt; En el útero</em&gt; La electroporación

Células neuroprogenitoras Humanos (CPN) se ampliaron en condiciones proliferantes. NPC se diferenciaron en cultivos de neuronas-rica en la presencia de una combinación de neurotrofinas. Marcadores neuronales se detectaron por tinción de inmunofluorescencia. Para aislar una población pura de las neuronas, NPCs se diferenciaron en láminas de membrana PEN y se realizó con láser captura microdissection.

Microdisección de captura por láser de neuronas a partir de células diferenciadas neuroprogenitoras humanas en cultivo

Aprende a cuantificar papilas fungiformes de forma estandarizada mediante el protocolo Denver con tinción azul y clave dicotómica. Este método reduce la subjetividad entre observadores en estudios de neurociencia gustativa.

Protocolo papilas Denver para el Análisis Objetivo de papilas fungiformes

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