Spot de Tejidos correcta cada vez que en los bloques de múltiples tejidos

El objetivo general de este procedimiento es construir una herramienta que ayude en la identificación de tejidos en bloques de parafina de múltiples tejidos. Esto se logra combinando primero HistoGel con un tinte de marcado de tejidos para formar un tapón de gel de colores brillantes. El segundo paso es procesar e incrustar los tapones HistoGel coloreados siguiendo las técnicas estándar de procesamiento e inclusión de tejidos.

A continuación, se utiliza un punzón de biopsia para extraer los cilindros pequeños. Se trata de etiquetas de orientación de especímenes o manchas. El paso final es incrustar la mancha en un bloque de tejido múltiple con la ubicación de la mancha y cada muestra cuidadosamente documentada para una fácil referencia.

En última instancia, el anuncio proporciona una señal visual clara para la orientación e identificación de muestras en micromatrices de tejidos y bloques de tejidos múltiples. La principal ventaja de esta técnica frente a los métodos existentes como las suturas o los núcleos asimétricos, es que la mancha no altera el tejido y permite flexibilidad en la disposición de las muestras para un análisis óptimo. La primera vez que tuvimos la idea de este método fue cuando recibimos solicitudes de los investigadores para combinar muestras de tejido de varios animales en un solo bloque de parafina para ahorrar dinero y simplificar el análisis. Para preparar las manchas, comience agregando 50 miligramos de BSA de grado bioquímico a un mililitro de tinte de marcado de tejido en un tubo cónico de 15 mililitros.

Agita la mezcla durante al menos un minuto hasta que se disuelva por completo. A continuación, cargue nueve mililitros de gel de procesamiento de hidroxietilo aros en un tubo cónico de 15 mililitros y caliéntelo en un microondas al 30% de potencia. Pulsa el fuego en incrementos de diez segundos hasta que el gel se derrita por completo.

Ahora combine el gel de procesamiento derretido y la solución de tinte BSA en un solo tubo cónico de 15 mililitros y mézclelo bien con una pipeta. A continuación, agite la solución y transfiérala a un refrigerador durante unas horas para que se solidifique. Una vez endurecido, retire el dilatado sólido en gel soltándolo suavemente con una espátula estrecha.

Corta el tapón en secciones de cinco milímetros de grosor. No utilice los extremos redondeados. Transfiera de tres a seis secciones a un casete de histología y sumérjalas en etanol al 70%, cambie la solución de etanol al 70% cada dos a cuatro horas y al menos tres veces durante 24 horas hasta que los tapones estén completamente deshidratados.

Lixiviarán parte del tinte de marcado en la solución de etanol. El uso de cambios de etanol fresco inicialmente ayuda a eliminar parte del exceso de tinte, lo que da como resultado un tapón más limpio que es menos probable que filtre el color. A continuación, transfiera los casetes a etanol al 80% y luego a etanol al 95% durante una hora en cada baño.

El tinte puede filtrarse del tapón de gel, lo que podría afectar a otros tejidos y a los reactivos líquidos de un procesador de tejidos automatizado. Como tal, se recomienda encarecidamente la deshidratación manual. Sin embargo, el procesamiento automatizado es igualmente efectivo.

Completa la deshidratación con tres lavados en etanol 100% durante una hora cada uno. Limpie las muestras sumergiéndolas en hidrocarburos áticos o xilenos tres veces durante una hora en cada baño. Ahora infíltrate en las secciones con tres baños de una hora.

En parafina fundida. Incruste las secciones procesadas como de costumbre y, cuando el bloque esté a temperatura ambiente, use una aguja perforadora dérmica para hacer núcleos puntuales. Un bloque puede hacer núcleos de 22 milímetros o incluso más núcleos de 1,5 milímetros.

Comience haciendo un diagrama para indicar las ubicaciones deseadas y las identidades de todas las piezas de tejido individuales que se incrustarán juntas y la ubicación de la mancha. Prepare una copia para tenerla a mano. El uso exitoso de las etiquetas de orientación de muestras requiere un mapa de muestras biológicas claro y fácil de seguir que detalle con precisión todas las muestras biológicas, su ubicación y su posición en relación con el lugar.

Después de procesar las piezas de tejido, colóquelas en la estación de incrustación. De acuerdo con el diagrama de orientación de los tejidos, la orientación correcta es absolutamente crítica. También es vital que el núcleo de la mancha sea más alto que todas las piezas de tejido que se incrustarán en el bloque.

Después de completar el arreglo del tejido, incruste las manchas. Sostenga cada punto en posición vertical con pinzas hasta que la parafina se haya solidificado para que no se caiga. Un minuto o dos deberían ser suficientes.

Para un kit de TMA manual, llene el molde de TMA con parafina derretida. A medida que el molde se enfría, fije los puntos de manera similar en los márgenes de la matriz. Ahora secciona y tiñe las secciones con la mancha.

Utilizando un enfoque estándar, aquí se realizan secciones de cinco micras. Para colocar las secciones en portaobjetos, hágalas flotar en un baño de agua a 40 grados centígrados y luego transfiéralas a portaobjetos de vidrio cargados positivamente. Una vez adheridos a los portaobjetos, séquelos a 60 grados centígrados durante al menos 20 minutos.

Los portaobjetos ahora se pueden teñir manualmente o en un sistema de tinción automatizado. Para la tinción rutinaria de h y d, las tinciones especiales o manchas inmunohistoquímicas aparecieron como redondas de colores brillantes. en el bloque de parafina y en todas las secciones de parafina.

Las manchas permitieron una fácil orientación e identificación de tejidos en bloques de tejido múltiple que contenían tejidos de apariencia similar de diferentes individuos y grupos de tratamiento. Cuando se utilizaban en un tejido, los puntos de microarrays permitían que cada núcleo se utilizara para valiosas muestras de tejido y los puntos podían seleccionarse fácilmente junto al núcleo de un microarray de tejido. Al intentar este procedimiento, es importante recordar que la documentación precisa y clara de la muestra biológica y la mancha en el bloque es fundamental para su uso exitoso.

Después de ver este video, debería tener una buena comprensión de cómo crear y usar fácilmente la etiqueta de orientación de muestras como ayuda para la identificación de tejidos en bloques de parafina de múltiples tejidos.