Un Protocolo para ratones Viviendas en un ambiente enriquecido

El objetivo de este procedimiento es proporcionar los detalles necesarios para el alojamiento y mantenimiento de los animales en el enriquecimiento ambiental, lo que produce efectos metabólicos y anticancerígenos robustos en ratones. Esto se logra configurando primero el entorno de la carcasa enriquecida en un contenedor grande con objetos como ruedas, fuentes de rodadura, conejeras, tubos, troncos y jaulas. El segundo paso es introducir a los animales en el nuevo entorno.

A continuación, se mantiene el entorno enriquecido cambiando la ubicación y el tipo de objetos en el contenedor y proporcionando alimentos frescos y agua de forma regular. El paso final es limpiar los objetos que se reemplazaron en el entorno para que estén listos para ser intercambiados en el futuro. En última instancia, sobre la eutanasia y el análisis de tejidos animales.

Esta técnica de enriquecimiento ambiental muestra una disminución de la adiposidad, un aumento del gasto energético, resistencia contra la obesidad inducida por la dieta y un cambio fenotípico de grasa blanca a marrón mediante la activación del eje de adipocitos sinneurales hipotalámicos. Este método describe detalles sobre la configuración de un entorno enriquecido para roedores de laboratorio que mejora la resistencia al cáncer y las enfermedades metabólicas. Primero, rocíe y limpie el interior de un recipiente de enriquecimiento grande con desinfectantes de esporicidina.

Siguiendo las instrucciones del fabricante, limpie el contenedor con etanol al 30% o papel, toalla y secadora empapados en agua del grifo con una toalla de papel para eliminar cualquier olor del desinfectante anterior. Utilice iglús de tubos de plástico con ruedas tipo SOR y otros juguetes similares a conejeras de plástico en el entorno enriquecido. Lave estos juguetes como antes, use ruedas metálicas para correr que hayan sido lavadas como antes.

Si la pintura de la rueda comienza a desvanecerse de modo que la rueda se vuelve ruidosa cuando los animales corren sobre ella, aplique una pequeña cantidad de vaselina en el lugar donde se conectan la rueda y el eje. Utilice troncos de madera en el entorno enriquecido. Limpie los troncos quitando la ropa de cama u otros desechos con la mano.

A continuación, esterilizar los troncos esterilizándolos en autoclave en un ciclo seco o textil, que alcanza una temperatura de 121 grados centígrados durante 15 minutos. Use jaulas de alimentación limpias de entre dimensiones de 29 centímetros por 18 centímetros por 12.5 centímetros y 30.5 centímetros por 19 centímetros por 14 centímetros para sostener. Una rejilla de alambre para alimentar y beber corta un agujero de al menos cinco centímetros de diámetro en la parte inferior delantera de la jaula para que los ratones entren y salgan.

comenzar. Para un cuarto de pulgada de lecho de animales de laboratorio de mazorca de maíz en el contenedor de enriquecimiento limpio a grande a una profundidad de dos a 2.5 centímetros. A continuación, coloque dos o tres de los troncos de la clave aórtica anterior en una esquina del contenedor para secuestrar un área de alrededor de 1.225 centímetros cuadrados.

Luego, en el área secuestrada por los troncos, coloque tres pegamentos con ruedas SOR encima. Asegúrese de que las ruedas tengan espacio para girar libremente. Ahora junte el tubo de plástico de modo que varios brazos se ramifiquen desde la pieza de conexión central.

Coloque este tubo en el centro del contenedor en dos esquinas del contenedor. Coloque una jaula de alimentación llena con la misma ropa de cama que el contenedor. El orificio en la parte delantera de cada jaula de alimentación debe estar orientado hacia el centro del contenedor.

Coloque un alambre de comida y agua que contenga comida para ratones en la parte superior de cada jaula de alimentación. Agrega la botella de agua. Coloque una rueda de 11,5 centímetros, una rueda de 20,5 centímetros y una rueda de 28 centímetros en el contenedor.

A continuación, coloque cuatro o cinco conejeras de plástico más, como juguetes o túneles, en todo el contenedor de enriquecimiento. Cubra el contenedor con papel de filtro micro aislador y use clips de carpeta para sujetar el papel de filtro al contenedor. Al colocar animales en el contenedor de enriquecimiento desde una jaula estándar, coloque la jaula en el contenedor de lado para que los animales puedan moverse libremente de la jaula estándar al contenedor de enriquecimiento.

No permita que los materiales de anidación se transfieran al contenedor de enriquecimiento. De 10 a 20 animales con la misma edad, sexo y cepa genética pueden alojarse en el ambiente enriquecido a la vez. Asegúrese de que los animales sean observados diariamente para detectar signos de enfermedad o angustia.

Si es necesario, manipule suavemente a los animales para inspeccionar más a fondo su estado dos veces por semana. Verifique los niveles de comida y agua, asegurándose de que la comida y el agua duren los próximos dos días. Además, endereza las ruedas para correr y los juguetes de enriquecimiento para que estén dispersos y puedan usarse fácilmente.

Reemplace cualquier elemento de enriquecimiento que esté sucio una vez a la semana, idealmente cuando los ratones se retiren del entorno. Para fines experimentales, retire las jaulas de alimentación y las rejillas de alambre y reemplácelas con jaulas y rejillas limpias llenas de alimentos frescos. Reemplace las botellas de agua por botellas de agua limpia.

De manera crucial, reorganice los elementos de enriquecimiento para que se conserven los aspectos clave de la configuración, pero los elementos de enriquecimiento se coloquen de manera diferente. Mancha. Revise el resto del contenedor de enriquecimiento grande y límpielo si es necesario. Sacando la basura sucia y esparciendo ropa de cama nueva y limpia una vez cada dos semanas.

Al realizar la cría semanal, lave los juguetes a mano o enviándolos a través del lavado de jaulas. Cada mes, limpie la mayor parte de la arena quitando los juguetes de enriquecimiento y las jaulas de alimentación y sacando la arena. Reemplace con arena fresca asegurándose de que haya dos centímetros de cama en todas las áreas de la jaula una vez cada tres meses o según lo requiera su protocolo de animales, retire toda la ropa de cama y los juguetes y desinfecte el contenedor de enriquecimiento lavándolo como antes de la casa de control Agrupe a los animales en el mismo ciclo de luz y oscuridad de 12 horas.

Al igual que los ratones en el ambiente enriquecido en jaulas micro aisladas, proporcione el mismo lecho de mazorca de maíz en la jaula de control que en el ambiente enriquecido, y agregue un nido de cuatro centímetros por cuatro centímetros iluminado con un nido de maister maker alojado de tres a cinco ratones del mismo sexo en una jaula de ratón regular. No coloque ningún tubo de juguete o conejera en la jaula. Incluya una rejilla de alambre en la jaula para guardar la comida y una botella de agua si la jaula no está conectada a un sistema de riego automático.

Monitoree la salud de los animales diariamente, asegurándose de que los animales tengan suficiente comida y agua. Reemplace o limpie las jaulas, los cables de alimentación, la comida y el agua. Una vez a la semana, limpie las jaulas y las rejillas de alambre como antes.

Los ratones machos de tres semanas de edad se alojaron en un ambiente enriquecido o jaulas de control durante cinco semanas antes de la inoculación subcutánea del tumor con 10 a cinco células por animal. Los resultados muestran el peso del tumor de melanoma B 16 a los 17 días de la inoculación. Cada grupo estaba formado por 10 animales.

El asterisco representa un valor P de menos de 0,05 calculado por la prueba T de los estudiantes aquí. Ratones de tres semanas de edad fueron sometidos a enriquecimiento ambiental durante seis días. Seis días en un ambiente enriquecido, disminución retroperitoneal, tejido adiposo blanco, peso de la almohadilla de grasa.

Este gráfico muestra que seis días en un ambiente enriquecido, disminuyó el tejido adiposo marrón, el tejido adiposo blanco epidérmico y el tejido adiposo blanco retroperitoneal, los pesos de las almohadillas de grasa en relación con el peso corporal. Los siguientes dos gráficos comparten los resultados de ratones alojados en un ambiente enriquecido durante cuatro semanas, como se ve aquí, cuatro semanas en enriquecimiento ambiental, disminución del peso de las almohadillas de grasa en todos los tipos de grasa, excepto en el tejido adiposo marrón. Cuatro semanas de enriquecimiento ambiental, disminuyeron el peso de las almohadillas de grasa en relación con el peso corporal para todos los tipos de grasa, excepto el tejido adiposo marrón.

Después de ver este video, debe tener una buena comprensión de cómo configurar y mantener un entorno enriquecido que induzca efectos anticancerígenos y antiobesidad y ratones.