Name: Un Protocolo para ratones Viviendas en un ambiente enriquecido (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2015-06-08T15:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 30 s
Description: Aprende a establecer un ambiente enriquecido para ratones que promueve la salud metabólica y reduce el riesgo de cáncer. Este protocolo detalla la configuración, mantenimiento y monitoreo óptimo.

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Este trabajo fue apoyado por el NIH subvenciones CA163640, CA166590 y AG041250 a LC.

Los procedimientos descritos a continuación han sido aprobados por el Cuidado y Uso de Animales Comité Institucional (IACUC) de la Universidad Estatal de Ohio. 1. Preparación de Enriched entorno antes de ratones Viviendas <ol><li> Limpieza y mantenimiento de instrumentos. <ol><li> Ejecute la bandeja grande de enriquecimiento (120 cm x 90 cm x 76 cm) a través de un lavado de jaula. Un protocolo típico de lavado jaula Animalario incluye 5 a 6 ciclos de lavado, con el último ciclo de alcanzar 82 ºC. Todo el lavado debe tomar aproximadamente 40 min. Seque la papelera. <ol><li> Si la bandeja grande de enriquecimiento, y cualquier otro instrumento de vivienda, no se pueden enviar a través de lavado de jaula, luego rociar y limpiar el interior de la papelera con desinfectantes esporicidas siguiendo las instrucciones del fabricante. Limpie el recipiente con una toalla empapada agua del grifo papel o etanol al 30% y secar con una toalla de papel para deshacerse de cualquier olor del desinfectante anterior. </li></ol></li><li> Use plastubos tic, iglús con ruedas tipo platillo, y otros-conejera como juguetes diversos de plástico en el EE. Lave estos juguetes a través de un lavado de jaula. Si usted no tiene acceso a un seguimiento paso de lavado jaula 1.1.1.1. </li><li> Utilice ruedas de metal de marcha en los EE. Lávese las ruedas a través de un lavado de jaula. Si la pintura de las ruedas comienza a desvanecerse para que la rueda se vuelve ruidoso cuando los animales se ejecutan en él, aplicar una pequeña cantidad de vaselina a donde la rueda y Axel conectan. </li><li> Utilice troncos de madera en el EE. Limpie los registros mediante la eliminación de la ropa de cama u otros desechos a mano. Entonces esterilizar en autoclave los registros de ellos en un ciclo o textil ciclo de secado, que alcanza una temperatura de 121 ºC durante 15 min. </li><li> Utilice jaulas entre dimensiones de 29 cm x 18 cm x 12,5 cm y 30,5 cm x 19 cm x 14 cm para sujetar un cable de alimentación y beber rack.Cut un agujero de al menos 5 cm de diámetro de la parte frontal inferior de la jaula para ratones para entrar y salir de entre los EE. Limpie estas jaulas se alimentan a través de lavado de jaula. </li></ol></li><li> Configuración del entorno <ol><li> Vierta la mazorca de maíz camas de los animales de laboratorio de ¼ de pulgada en la gran bin enriquecimiento. Cubrir toda la superficie del piso de la bandeja hasta una profundidad de 2-2,5 cm con ropa de cama. </li><li> Coloque dos o tres registros en una esquina de la papelera. Coloque los troncos en la esquina para secuestrar una superficie de unos 1.225 cm 2. En el área secuestrado por los registros, coloque tres iglús con ruedas platillo en la parte superior. Asegúrese de que las ruedas no toquen las paredes de la caja, los registros, o entre sí, de modo que haya suficiente espacio para que las ruedas giren libremente. </li><li> Pedazo juntos el tubo de plástico para que varios brazos se ramifican desde la pieza de conexión centeral. Coloque este tubo en el medio de la bin. </li><li> En dos esquinas de la bandeja, coloque una caja de alimentación cada uno lleno con la misma ropa de cama como la papelera, y el agujero en la parte delantera de la caja de alimentación debe estar mirando hacia el centro de la bandeja. Además de estas jaulas de alimentación un alimento y agua limpia de alambredebe ser colocado para mantener los alimentos y el agua. No coloque la tapa en la jaula. Ponga los alimentos y el agua en los alambres de la jaula. </li><li> Coloque tres ruedas de metal en el contenedor, aunque no todos uno al lado del otro. Los tres tipos diferentes de ruedas son una rueda 11,5 cm, 20,5 cm una de las ruedas, y una rueda 28 cm. A continuación, coloque-conejera como juguetes o túneles 4-5 más plástico en todo el bin enriquecimiento. </li><li> Cubra el recipiente con papel de filtro de micro-aislador. Utilice clips de la carpeta para recortar el papel de filtro a la papelera. </li><li> La novedad es importante para EE. Utilice esta configuración como el marco de la EE y variar la colocación de jaulas antes mencionados, objetos y juguetes para crear un nuevo entorno para los animales. </li></ol></li></ol> 2. Viviendas de los Animales <ol><li> Criar animales para experimentos en la vivienda habitual de laboratorio y no en EE. Opcionalmente, colocar los animales en EE ya a los 21 días de edad al destete. Genotipo y el oído punzón / tag animales antes de EE vivienda. </li><li> Al colocaranimales en la papelera de enriquecimiento de una jaula estándar, colocar la jaula en la papelera de su lado para que los animales puedan moverse libremente de la jaula estándar a la papelera de enriquecimiento. No permita que los materiales de los nidos que se transferirán a la papelera de enriquecimiento. </li><li> Casa 10-20 animales de la misma edad, género y cepa genética en los EE. </li></ol> 3. Mantener el Medio Ambiente y Observación de la Ratones Durante Estudios <ol><li> Diario <ol><li> En silencio observar a los animales en busca de signos de enfermedad o angustia. Si es necesario, manejar con cuidado a los animales para inspeccionar aún más las condiciones de salud. Record observaciones anormales y consultar a un técnico de salud o el personal veterinario si los animales muestra situaciones que requieran del experimento. </li><li> Proporcionar tratamiento tópico con ungüento antibiótico triple para pequeñas heridas o costras. Si un animal tiene que ser retirado debido a una enfermedad o lesión crónica, retirar al animal del experimento para la eutanasia. Si los animalescumplir con los criterios de eliminación temprana para el animal que supervisa la investigación del comité de cuidado o veterinario, no devuelva los animales de vuelta a EE. </li></ol></li><li> Dos veces por semana <ol><li> Compruebe los niveles de alimentos y agua. Asegúrese de que la alimentación y el agua tendrá una duración de los próximos 3-4 días. Enderezar ruedas de rodadura y juguetes de enriquecimiento de modo que se separan hacia fuera y pueden ser utilizados por los ratones. Reemplace las que estén demasiado sucio. </li></ol></li><li> Semanal <ol><li> Vuelva a colocar botellas de agua con botellas de agua limpia. Reorganizar los dispositivos de enriquecimiento de una manera que sigue la configuración en la Sección 1.2. sin embargo, es diferente de la configuración de la semana anterior. NOTA: Si un experimento requiere los animales que deben ser retirados del ambiente enriquecido para una actividad (grabación de peso corporal, extracción de sangre, prueba de comportamiento, etc.) que lo mejor es la de reorganizar el medio ambiente, mientras que los animales están fuera de la papelera de enriquecimiento. </li><li> Limpiar las jaulas de alimentación en el EE a mano o enviarlo a través de lavado de jaulacomo se detalla en la Sección 1.1.5. Vuelva a colocar los bastidores de alambre que sujetan la comida y el agua con bastidores de alambre limpio también. </li><li> Siga las instrucciones en la sección 2.2. al colocar a los animales de vuelta en el enriquecimiento. Comprobar in situ el resto de la bandeja grande enriquecimiento y limpia, si es necesario, sacando arena sucia y la difusión por nueva ropa de cama limpia. </li></ol></li><li> Quincenal <ol><li> Mientras se realiza la cría de semana, limpiar los juguetes con la mano o enviar a través de lavado de jaula como se detalla en la Sección 1.1.2. Si es necesario, colocar los ratones en una jaula de micro-aislador estándar para el tiempo requerido para limpiar. </li></ol></li><li> Mensual <ol><li> Limpie la mayor parte de la basura fuera moviendo juguetes de enriquecimiento y la alimentación de las jaulas y sacando la basura. Reemplazar con basura fresca. Asegúrese de que haya una pulgada de ropa de cama en todas las áreas de la jaula. Si es necesario, colocar los ratones en una jaula de micro-aislador estándar para el tiempo requerido para limpiar. </li></ol></li><li> Cada tresMeses (o al final del experimento) <ol><li> Retire la ropa de cama y juguetes y limpie y desinfecte la papelera de enriquecimiento, como se describe en la Sección 1.1.1. Si el experimento está en curso, reemplazar con ropa de cama nueva, alimentando jaulas, surtido de juguetes y luego regresar a los ratones a la papelera. </li></ol></li><li> Desinfectar todo el bin enriquecimiento con mayor frecuencia que cada tres meses si lo requiere la institución de investigación en el que se aloja el EE. Si esto es necesario y otro gran contenedor de enriquecimiento está disponible, configure el contenedor de enriquecimiento adicional como se detalla en la Sección 1.2. y transferir los animales para el nuevo contenedor, mientras que el anterior se está limpiando. </li></ol> 4. Control de las condiciones de vivienda <ol><li> Animales de la vivienda en el grupo de control en jaulas micro-aislador de dimensiones 30,5 cm x 19 cm x 14 cm. Incluya una rejilla en la jaula para la celebración de la comida y una botella de agua, si la jaula no está conectado a un sistema de riego automático. </li><li>Proporcionar la misma ropa de cama de la mazorca de maíz en la jaula de control como es en el EE. Proporcionar un 4 cm x 4 cm nestlet para los ratones para hacer un nido de. </li><li> Vuelva a colocar y / o limpiar las jaulas, alimentación cables, alimentos y agua una vez a la semana. Jaulas y bastidores de alambre limpio a través de lavado de jaula o como se detalla en la Sección 1.1.1.1. Limpiar las jaulas de los animales con mayor frecuencia si se orina con más frecuencia o si las fugas de agua potable a la ropa de cama. </li><li> Vigilar la salud de los animales en diario caja de control. Asegurar que los animales tienen un montón de comida y agua. </li><li> Casa 3 ~ 5 ratones del mismo género en jaula rectangular ratón. No proporcione cualquier juguete, tubo, o cabina en la jaula. </li><li> Técnicos de la salud y de laboratorio de las instalaciones de cuidado de animales de laboratorio institucionales pueden proporcionar la cría de estos ratones de control. </li><li> Mantenga a los animales en un 12 horas de luz / oscuridad ciclo como está para los ratones en EE. </li></ol>

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</ol>

Los autores declaran no tener ningún conflicto de intereses.

Los efectos robustos de EE sobre la expresión génica en el cerebro, disminución de la adiposidad y el crecimiento del cáncer en ratones dependen en gran medida de la capacidad del investigador para mantener la novela medio ambiente y manejar los animales de una manera que promueve la actividad física, la interacción social, y los desafíos cognitivos, todavía ¿no socorro a los animales. Hay dos más importantes pasos procesales para recordar. En primer lugar, recuerde cambiar la colocación de los juguetes, objetos y jaulas cada semana. A pesar de que los juguetes y los objetos pueden ser la misma que la semana anterior, los ratones perciben el medio ambiente como novela. Cambie los juguetes y objetos a sí mismos con otras diferentes cada dos semanas. En segundo lugar, recuerde que debe mantener el medio ambiente limpio. Si la ropa de cama sucia no se eliminan, el aumento de los niveles de nitrógeno pueden ser un factor de estrés a los animales. Además, hay muchas técnicas a tener en cuenta en este protocolo EE. El uso de diferentes o únicos juguetes y diferentesdiseños de laberintos de tubos de plástico se anima. El medio ambiente puede ser un reto, pero no debe representar una amenaza para la salud de los animales. Además, ten cuidado con los juguetes que son disfuncionales, debido a que los juguetes disfuncionales aumentan el riesgo de quedar atrapados extremidades ratón, o pueden ser tóxicos para los animales si se consume masticando en él. Una constante de la EE es la utilización de tres ruedas platillo en la parte superior de iglús, secuestrados a una esquina o lateral de la papelera por 2-3 registros. Esta configuración de correr detrás de los platillos registros ha estado presente en todos nuestros estudios de enriquecimiento. En cuanto a la utilización y colocación de los otros objetos, la descripción de la disposición anterior es un proyecto original fundacional de la configuración de EE. Variación de la instalación con este marco fundacional de un tubo de plástico, ruedas corriendo, corriendo platillos, jaulas y los registros deben proporcionar un ambiente novedoso suficiente para reproducir los resultados reportados. Si se trabaja con animales transgénicos que tienen diabetes u otra metabólicaenfermedades, prestar mucha atención al consumo de alimentos y agua para asegurar que los animales no se quedan sin comida y agua. Si los animales tienen la diabetes, van a orinar más, así que la ropa de cama de la vivienda EE pueden necesitar ser punto revisado y limpiado con más frecuencia. Los lugares de la vivienda EE que necesitan camas elimina con mayor frecuencia son las esquinas. Recuerde ajustar las ruedas y otros juguetes, de modo que puedan ser utilizados por los animales. Los animales son capaces de ejecutar ruedas platillo en la ropa de cama y golpeando ruedas ejecutan más. Si los animales son jóvenes, de 3 a 5 semanas de edad, podrían cavar bajo las jaulas en el EE y esconden juntos bajo allí, dejando el investigador ni idea de donde están los animales. Al retirar la ropa de cama sucia, en sustitución de los juguetes, o jaulas de limpieza, se sugiere poner a los animales en una jaula estándar limpia a fin de no hacer hincapié a cabo mientras se ajusta su entorno. Es más fácil para obtener todos los animales en una jaula si tienen menos lugares para esconderse en el environment. Por lo tanto, la eliminación de los juguetes antes de secuestrar a los animales en una jaula hace el proceso más fácil. Además, no coloque más de 5-6 animales en una sola jaula estándar a la espera de la limpieza o ajustar su entorno EE. Los machos en EE pueden ser agresivos sobre todo cuando EE se inicia en la edad adulta. Por lo tanto, es importante observar el medio ambiente para los animales heridos o muertos. Además, el número típico de animales que albergamos en EE para esta gran tamaño del contenedor es de 10-20 ratones. El número de animales que los investigadores utilizan para EE variar, utilizando alrededor de 10 o menos los ratones, y el tamaño de la jaula o contenedor deben tenerse en cuenta para determinar el número de animales a la casa en EE. Tener demasiados animales en un entorno de vida puede conducir a la agresión en ratones machos. Los ratones que hemos alojado en EE haber sido de C57BL / 6 antecedentes. Los ratones de otras cepas puede ser más o menos agresivo, o más propensos a problemas de salud enesta configuración EE. Esto debe tenerse en cuenta para determinar el plan de cría para los ratones y el medio ambiente enriquecido. Cuatro semanas EE vivienda es suficiente para inducir la disminución de la adiposidad, la caída de nivel de leptina, y la inhibición del crecimiento de melanoma B16. Mayor EE puede dar lugar a efectos más fuertes sobre el metabolismo y la inhibición del cáncer. Si los ratones sometidos a procedimientos quirúrgicos durante o antes de la exposición a EE, pueden ser alojados con suturas intactas. Sea o no los animales responden bien a esta configuración EE particular, con grapas quirúrgicas o catéteres intactas no se ha estudiado. Además, actualmente estamos investigando cómo esta EE particular, afecta a la vida útil o healthspan de animales de edad avanzada. Los datos preliminares sugieren que C57BL hembra / 6 ratones, 10 meses de edad, responde a EE de manera similar a los ratones jóvenes. Una limitación de la carcasa EE está acomodando una bandeja grande como en el espacio animalario, y preferentemente en una habitación específica de género. Por lo tanto los futuros estudios sobre el efeja de EE en menor escala, así como la búsqueda de juguetes que son fáciles de limpiar, soportar limpieza a alta temperatura y son seguros para la salud de los animales, mejorarán las aplicaciones de la EE en metabólico y la investigación del cáncer.

El enriquecimiento ambiental (EE) es un paradigma experimental utilizado para explorar los efectos de un entorno complejo y desafiante que no hace hincapié en los animales 1. EE es una técnica de alojamiento de los animales compuesto por un mayor espacio, la actividad física, y las interacciones sociales, que a su vez aumenta sensorial, cognitivo, motor y estímulo social 2. Iglús, ruedas para correr, ruedas platillo, laberintos de tubos y otros objetos en el entorno de vivienda fomentan este cognitivo sensorial, social y estimulación motora mediante la promoción de la exploración y la interacción. La disposición de los objetos en los cambios de recinto regularmente para presentar un nuevo entorno, a la que los ratones se ven obligadas a adaptarse. Esta estrategia ofrece retos leves y breves que inducen una respuesta adaptativa beneficioso, benigno, y saludable, conocido como eustress, en oposición a un entorno hostil más aversivo o angustia maladaptive 3,4. Al promover eustress y limitar la angustia perjudiciales, los ratonesmostrar una variedad de fenotipos favorables. EE es un modelo experimental fiable con una amplia gama de aplicaciones, mientras que al estar desprovisto de elementos tradicionalmente pensado como estresante 1. Los efectos de la EE en los roedores se han estudiado durante más de medio siglo. En la década de 1960 estudios mostraron que los niveles de colinesterasa corticales y disminuyeron los niveles de colinesterasa subcorticales aumentaron en las ratas que fueron alojados en entornos con un aumento de espacio de vida, el aumento de número de ratas, y una variedad de juguetes de madera, laberintos, y plataformas de 5,6. Además, EE se asocia con muchos cambios adaptativos en el cerebro, la conducta y el metabolismo en ratones de diferentes edades y orígenes genéticos. Por lo tanto, EE es un paradigma útil para una amplia gama de experimentos que estudian los efectos del medio ambiente en los ratones. EE efectos se pueden observar en ratones tan rápido como la exposición de una semana, y se puede ver en los animales como de edad hasta dieciocho meses 7. EE es a menudo used en neurociencia y neuroconductuales experimentos para estudiar la recuperación de la función, el aprendizaje y la memoria 2. Por otra parte, EE tiene un impacto considerable en el fenotipo de una variedad de inducido toxina y modelos de animales transgénicos de enfermedades neurológicas humanas incluyendo la enfermedad de Huntington, enfermedad de Alzheimer, enfermedad de Parkinson, epilepsia, apoplejía, y más 2. Sin embargo, en los últimos años ha habido incompatibilidad con el diseño de enriquecimiento de hacer comparaciones entre los estudios de diferentes laboratorios difíciles. Por ejemplo, cada uno de los estudios sobre los efectos de EE relativos a las enfermedades neurológicas humanas mencionadas anteriormente tenido diversos parámetros al enriquecimiento. El estudio sobre la enfermedad de Huntington alojado 4-6 ratones en grandes jaulas (44 x 28 x 12,5 cm 3) que contienen cajas de cartón, túneles, y hojas, así como objetos de madera y de plástico que se cambia cada dos días 8,9. Uno de los estudios realizados sobre el Alzheimer y# 8217; s alojados 20 ratones en una jaula más grande (1 m 3) que contiene 2 ruedas de funcionamiento, tubos de plástico, cajas de cartón y material de nidificación que fueron cambiados o reorganizado semanal 10. Muchas configuraciones de EE tienen temas similares, como objetos para correr o esconderse, sin embargo, el número de ratones por vivienda EE, la sala de estar, y el período de cambiar el medio ambiente varían mucho. Los diseños inconsistentes de EE han dado lugar a la replicación fallida de efectos EE. Nuestros datos sobre el cáncer y el metabolismo en conjunto sugieren que la combinación de estímulos previstos en el siguiente protocolo de plomo vivienda detallada EE a anticáncer significativa y efectos anti-obesidad 14,15. Sin embargo, la diferencia de la configuración de EE adoptadas por diferentes laboratorios podrían influir en los resultados de EE, como se ve en un intento fallido para reproducir los efectos de EE en el crecimiento de los tumores de cáncer específicos implantados en ratones 11. Los diferentes resultados podrían deberse a una variedad de razones que van from diferentes tasas de crecimiento de los cultivos de células tumorales para el tipo de detergente utilizado para la limpieza de equipos de la vivienda 11. Con el fin de replicar los resultados observados en nuestros experimentos, se requiere un diseño particular de enriquecimiento y la cría de animales. El procedimiento siguiente detalla la vivienda EE que permitirá a otros investigadores a replicar con éxito nuestro modelo de enriquecimiento eficaz.

<table><tbody><tr><td>Papelera de enriquecimiento grande (120 cm x 90 cm x 76 cm)</td><td>Hecho a medida.</td><td>Hecho a medida.</td><td>Fabricado en polipropileno. Los bordes del contenedor tienen un grosor de 1,5 cm.</td></tr><tr><td>Alternativa a la bandeja de enriquecimiento grande (120 cm x 110 cm x 76 cm)</td><td>Global Industrial</td><td>155202</td><td>Si es necesario, esta caja funciona como alternativa a la anterior.</td></tr><tr><td>Tubos Habitrail Mini</td><td>Habitrail</td><td>62720; 62705; 62725; 62715; 62054-Iglús</td> <td>de</td></tr> <tr><td>plástico con ruedas de platillo</td><td>Bio</td><td>Serv K3327; K3250-Ruedas</td><td></td></tr> <tr><td>de Correr de Metal</td><td>Super Pet</td><td>61392; 61394; 61396-Palos</td><td></td></tr> de <tr><td>Roer Madera de Manzanita, 3"</td><td>Bio Serv</td><td>W0016</td><td></td></tr><tr><td>Túneles de Ratón</td><td>Bio Serv</td><td>K3322-Jaulas</td><td></td></tr> <tr><td>de ratón que van en el contenedor grande de EE.</td><td>Lab Products Inc</td><td>10027 Mouse</td> <td>Cage-Cage</td></tr> <tr><td>Klenz 180 Detergente Alcalino para Lavar Jaulas, Cage Klenz 250 Detergente Ácido</td><td>Steris Life Sciences</td><td>1K1802; 1K2502</td><td>Estos detergentes se utilizan en el lavado de jaulas para los juguetes, grandes contenedores de enriquecimiento y jaulas.</td></tr><tr><td>Sporklenz</td><td>Steris Life Sciences</td><td>6526Q8</td><td>Esporicida/desinfectante alternativo al lavado de juguetes, contenedores y jaulas en el lavado de jaulas.</td></tr><tr><td>Cama Bed-O-Cobs Ropa de cama de 1/4"</td><td>The Andersons, Inc.</td><td>4B</td><td>El lecho de mazorca de maíz tiene 1/4" de diámetro.</td></tr><tr><td>Nidos para control de ratones alojados</td><td>Ancare</td><td></td><td>Cuadrados de algodón</td></tr></tbody></table>

un protocolo para ratones viviendas en un ambiente enriquecido

A Protocol for Housing Mice in an Enriched Environment

El enriquecimiento ambiental (EE) es un entorno de alojamiento para ratones que mejora la salud mental y física en comparación con el alojamiento estándar de laboratorio. Nuestros estudios recientes demuestran que el enriquecimiento ambiental disminuye la adiposidad, aumenta el gasto energético, resiste la obesidad inducida por la dieta y causa remisión e inhibición del cáncer en ratones. La EE suele consistir en un espacio habitable más grande, una variedad de "juguetes" con los que interactuar, ruedas para correr, y puede incluir una serie de otros cambios ambientales novedosos. Todo esto fomenta un compromiso social más complejo, estimulaciones cognitivas y físicas. Es importante destacar que la ubicación y el tipo de juguete se cambian regularmente, lo que anima a los ratones a adaptarse a un entorno novedoso y que cambia con frecuencia. Muchas variables pueden ser manipuladas en la EE para promover efectos en la salud de los ratones. Por lo tanto, estos enfoques son difíciles de controlar y deben gestionarse adecuadamente para replicar con éxito los fenotipos asociados. Por lo tanto, el objetivo de este video es demostrar cómo se configura y mantiene correctamente la EE para garantizar un entorno complejo, desafiante y controlado para que otros investigadores puedan reproducir fácilmente los efectos protectores de la EE contra la obesidad y el cáncer.

EE afecta a la expresión del factor de crecimiento, aumenta la neurogénesis y la supervivencia de las células dentro del sistema nervioso central (CNS) 12,13. Estudios más recientes han demostrado que esta técnica de EE conduce a una notable supresión del crecimiento del cáncer en modelos de cáncer tres de ratón incluyendo el melanoma B16, cáncer de colon MC38 y APC min / + ratón que contiene una mutación de línea germinal y es altamente susceptible a la formación de adenoma en espontánea los intestinos 14. Los resultados de la Figura 2, confirman la supresión del crecimiento del tumor de melanoma B16 implantados en ratones expuestos a EE durante 5 semanas (~ 80% de disminución de la masa tumoral). Supresión del crecimiento del cáncer fue incluso observado en ratones cuando EE se inició después de que se ha establecido el tumor 14. EE resultó en una mayor inhibición del crecimiento de melanoma en los inducida por dieta alta en grasa ratones de obesidad (~ 70% de disminución de la masa tumoral) que en los ratones de peso normal (~ 50% de disminución de la masa tumoral) 14. EE ind<html> cambios de firma uced en los biomarcadores séricos incluyendo robusta gota de leptina, la disminución de IGF-1, y el aumento de los niveles de adiponectina 14. Además, esta técnica de EE disminuye la adiposidad, aumenta el gasto de energía, conduce a la resistencia contra la obesidad inducida por la dieta, e induce un blanco al interruptor fenotípica grasa marrón mediante la activación del hipotálamo-sympathoneural-adipocitos eje 15. La disminución de la adiposidad fue visto ya a los seis días expuestos a EE (Figura 3A, B) y se confirmó de nuevo en animales expuestos a EE durante cuatro semanas (Figura 3C, D). También es importante señalar que, uno, el anti-cáncer y efectos anti-obesidad asociada con EE no pueden explicarse por la actividad física por sí sola, y, dos, los efectos de EE pueden ser reproducidos por la sobreexpresión del factor neurotrófico derivado del cerebro (BDNF ) en el hipotálamo 14,15. <html> 2874fig1.jpg &quot;/&gt; Figura 1: Enriquecido entorno bin configurar El ambiente enriquecido tiene una superficie de 120 cm x 90 cm e incluye dos jaulas modificadas, ruedas para correr, iglús con ruedas platillo, tubos de plástico, troncos de madera, y otros juguetes de enriquecimiento de plástico.. <img alt="Figura 2" src="/files/ftp_upload/52874/52874fig2.jpg" /> Figura 2: ambiente enriquecido reduce el crecimiento del tumor en ratones C57BL / 6 ratones machos de tres semanas de edad ratones machos eran casa en EE o jaulas de control durante 5 semanas antes de la inoculación del tumor.. B16 pesos tumorales de melanoma en 17 días después de la inoculación de 10 5 células por vía subcutánea de animales sobre el flanco derecho (n = 10 por grupo. Prueba t de Student, * p &lt;0,05). <img alt="Figura 3a" src="/files/ftp_upload/52874/52874fig3a.jpg" /> <img alt="Figura 3b" src="/files/ftp_upload/52874/52874fig3b.jpg" /> s / ftp_upload / 52874 / 52874fig3c.jpg &quot;/&gt; <img alt="Figura 3d" src="/files/ftp_upload/52874/52874fig3d.jpg" /> Figura 3: Enriquecido ambiente disminuye la adiposidad en C57BL / 6 ratones machos Tres viejos ratones semana fueron sometidos a EE;. un grupo de 6 días, otro para cuatro semanas. (A) Seis días en EE disminuyeron pesos almohadilla de grasa (n = 5 por grupo. Prueba t de Student, * p &lt;0,05). (B) Seis días en EE disminuyeron pesos almohadilla de grasa en relación con el peso corporal (n = 5 por grupo. Prueba t de Student, * p &lt;0,05). (C) Cuatro semanas en EE disminuyó pesos almohadilla de grasa (n = 5 por grupo. Prueba t de Student, * p &lt;0,05). (D) Cuatro semanas en EE disminuyó pesos almohadilla de grasa en relación con el peso corporal (n = 5 por grupo. Prueba t de Student, * p &lt;0,05). BAT: el tejido adiposo marrón, IWAT: inguinal tejido adiposo blanco, EWAT: el tejido adiposo blanco epidídimo,RWAT: el tejido adiposo blanco retroperitoneal.

El enriquecimiento ambiental para ratones requiere una configuración compleja y desafiante, así como técnicas integrales de manejo y manejo para asegurar efectos metabólicos y anticancerígenos robustos en los ratones. Este protocolo proporciona procedimientos detallados para reproducir los efectos mencionados anteriormente en ratones.

Un Protocolo para ratones Viviendas en un ambiente enriquecido

Environmental enrichment (EE) is a housing environment for mice that boosts mental and physical health compared to standard laboratory housing. Our recent ...

El objetivo de este procedimiento es proporcionar los detalles necesarios para albergar y mantener animales en un entorno enriquecido ambientalmente, lo que produce efectos metabólicos y anti-cancerígenos robustos en ratones. Esto se logra primero configurando el entorno de alojamiento enriquecido en un recipiente grande con objetos como ruedas, fuentes de carrera, conejeras, tubos, troncos y jaulas. El segundo paso consiste en introducir a los animales en el entorno novedoso.A continuación, se mantiene el ambiente enriquecido cambiando la ubicación y el tipo de objetos en el recipiente y proporcionando alimento y agua frescos de forma regular. El paso final consiste en limpiar los objetos que se reemplazaron en el ambiente para que estén listos para ser intercambiados en el futuro. Finalmente, tras la eutanasia y el análisis de los tejidos animales.Esta técnica de enriquecimiento ambiental muestra una disminución de la adiposidad, un aumento del gasto energético y una resistencia frente a la obesidad inducida por la dieta, así como un cambio fenotípico de grasa blanca a marrón, mediante la activación del eje simpático hipotalámico-adipocito. Este método describe detalles sobre el montaje de un ambiente enriquecido para roedores de laboratorio que mejora la resistencia frente al cáncer y las enfermedades metabólicas. Primero, rocíe y limpie el interior de un recipiente grande de enriquecimiento con desinfectantes esporicidas.Según las instrucciones del fabricante, limpie el recipiente con papel absorbente humedecido en etanol al 30 % o agua del grifo, y séquelo con una toalla de papel para eliminar cualquier olor proveniente del desinfectante anterior. Utilice iglús de tubo de plástico con ruedas del tipo SOR y otros juguetes plásticos similares a casetas en el ambiente enriquecido. Lave estos juguetes como antes, y use ruedas metálicas para correr que hayan sido lavadas previamente de la misma manera.Si la pintura de la rueda comienza a desvanecerse de modo que la rueda haga ruido cuando los animales corren sobre ella, aplique una pequeña cantidad de vaselina en el punto donde la rueda se conecta con el eje. Utilice troncos de madera en el ambiente enriquecido. Limpie los troncos eliminando manualmente cualquier cama o restos de desechos.Luego, esterilice los troncos autoclavándolos en un ciclo seco o en un ciclo para textiles, que alcanza una temperatura de 121 grados Celsius durante 15 minutos. Utilice jaulas de alimentación limpias con dimensiones entre 29 centímetros por 18 centímetros por 12,5 centímetros y 30,5 centímetros por 19 centímetros por 14 centímetros para contenerlos. Una rejilla metálica para alimentación y bebida corta un orificio de al menos cinco centímetros de diámetro en la parte inferior frontal de la jaula para que los ratones puedan entrar y salir.Para comenzar, coloque virutas de mazorca de un cuarto de pulgada, utilizadas como cama para animales de laboratorio, en un recipiente limpio y grande para enriquecimiento ambiental hasta una profundidad de dos a 2,5 centímetros. A continuación, coloque dos o tres troncos de clave de aorta anteriores en una esquina del recipiente para delimitar un área de aproximadamente 1.225 centímetros cuadrados.Luego, en el área delimitada por los troncos, coloque tres pegamentos con ruedas SOR encima. Asegúrese de que las ruedas tengan espacio para girar libremente. Ahora, ensamble los tubos de plástico de manera que varios brazos se ramifiquen desde la pieza central de conexión.Coloque este tubo en el centro del recipiente, en dos esquinas del mismo. Coloque una jaula de alimentación llena con el mismo sustrato que el recipiente. El orificio en la parte frontal de cada jaula de alimentación debe orientarse hacia el centro del recipiente.Coloque un alambre con alimento y agua que contenga alimento para ratones encima de cada jaula de alimentación. Añada la botella de agua. Coloque una rueda de 11,5 centímetros, una rueda de 20,5 centímetros y una rueda de 28 centímetros dentro del recipiente.Luego, coloque cuatro o cinco juguetes plásticos más, similares a casetas, o túneles distribuidos por todo el recipiente de enriquecimiento. Cubra el recipiente con papel filtro microaislante y utilice pinzas sujetapapeles para fijar el papel filtro al recipiente. Al colocar los animales en el recipiente de enriquecimiento desde una jaula estándar, coloque la jaula dentro del recipiente de lado, de modo que los animales puedan trasladarse libremente desde la jaula estándar al recipiente de enriquecimiento.No permita que los materiales de anidación se transfieran al recipiente de enriquecimiento. De 10 a 20 animales de la misma edad, sexo y cepa genética pueden alojarse en el ambiente enriquecido al mismo tiempo. Asegúrese de observar diariamente a los animales en busca de signos de enfermedad o malestar.Si es necesario, manipule suavemente a los animales para inspeccionar más a fondo su estado dos veces por semana. Verifique los niveles de alimento y agua, asegurándose de que el alimento y el agua alcancen para los próximos dos días. Además, acomode las ruedas para correr y los juguetes de enriquecimiento para que estén distribuidos y puedan usarse fácilmente.Sustituya una vez por semana cualquier elemento de enriquecimiento que esté sucio, idealmente cuando los ratones sean retirados del ambiente. Con fines experimentales, retire las jaulas de alimentación y las rejillas metálicas y reemplácelas por jaulas y rejillas limpias llenas de alimento fresco. Sustituya las botellas de agua por botellas de agua limpias.Reorganice de forma crucial los elementos de enriquecimiento de modo que se conserven los aspectos clave del montaje, pero los elementos de enriquecimiento se coloquen en posiciones diferentes. Revise el resto del recipiente grande de enriquecimiento y limpie si es necesario. Esto mediante la extracción de la cama contaminada y la distribución de cama limpia nueva cada dos semanas.Al realizar el mantenimiento semanal, lave los juguetes a mano o enviándolos al lavado de jaulas. Cada mes, limpie la mayor parte de la cama retirando los juguetes de enriquecimiento y las jaulas de alimentación, y recogiendo la cama con una pala. Reemplace con cama fresca, asegurándose de que haya dos centímetros de cama en todas las áreas de la jaula; cada tres meses, o según lo requiera el protocolo de manejo de animales, retire toda la cama y los juguetes, y desinfecte el recipiente de enriquecimiento lavándolo como antes. Mantenga los grupos de animales bajo el mismo ciclo de 12 horas de luz y 12 horas de oscuridad.Como los ratones en el ambiente enriquecido en jaulas microaisladas, coloque el mismo relleno de mazorca de maíz en la jaula de control que en el ambiente enriquecido, y agregue un nido de cuatro centímetros por cuatro centímetros con una camita de nido maister maker, alojando de tres a cinco ratones del mismo sexo en una jaula de ratón común. No proporcione ningún tubo de juguete ni caseta en la jaula. Incluya una rejilla de alambre en la jaula para sostener la comida y una botella de agua si la jaula no está conectada a un sistema de agua automático.Supervise diariamente la salud de los animales, asegurándose de que tengan abundante alimento y agua. Reemplace o limpie las jaulas, los alambres de alimentación, el alimento y el agua. Una vez por semana, limpie las jaulas y las rejillas de alambre como antes.Se mantuvieron ratones macho de tres semanas de edad en un ambiente enriquecido o en jaulas control durante cinco semanas antes de la inoculación subcutánea de tumores con 10 a la cinco células por animal. Los resultados muestran los pesos tumorales del melanoma B16 a los 17 días posteriores a la inoculación. Cada grupo constaba de 10 animales.El asterisco representa un valor P inferior a 0,05 calculado mediante la prueba t de Student aquí. Ratones de tres semanas de edad fueron sometidos a enriquecimiento ambiental durante seis días. Seis días en un ambiente enriquecido redujeron el peso del tejido adiposo blanco retroperitoneal.Este gráfico muestra que seis días en un ambiente enriquecido redujeron los pesos relativos al peso corporal del tejido adiposo pardo, del tejido adiposo blanco epidérmico y del tejido adiposo blanco retroperitoneal. Los dos gráficos siguientes muestran resultados de ratones alojados en un ambiente enriquecido durante cuatro semanas, como se observa aquí; cuatro semanas de enriquecimiento ambiental redujeron los pesos de las almohadillas grasas en todos los tipos de grasa excepto en el tejido adiposo pardo. Cuatro semanas de enriquecimiento ambiental disminuyeron los pesos de las almohadillas grasas relativos al peso corporal en todos los tipos de grasa excepto en el tejido adiposo pardo.Después de ver este video, debería tener una buena comprensión de cómo configurar y mantener un ambiente enriquecido que induzca efectos anti-cáncer y antiobesidad en ratones.

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Research

Investigación

JoVE Journal

Behavior

Comportamiento

Madrigueras, nidos y el acaparamiento son las actividades típicas de la especie que los ratones que fácilmente realizan en el laboratorio. En este artículo se describe cómo se pueden sencilla ya buen precio evaluado. Estos protocolos son extremadamente sensibles a la cepa de ratón, las lesiones cerebrales y las enfermedades. Por otra parte, constituyen el "enriquecimiento ambiental" para los ratones, e incorporan el "refinamiento" aspecto de la "3 erres" 18.

La evaluación de madriguera, la construcción del nido, y el acaparamiento en ratones

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