Los protocolos para pruebas de resistencia a los herbicidas robusta en diferentes especies de malezas

El objetivo general de este procedimiento es probar y confirmar la resistencia a herbicidas en una amplia gama de especies de malezas y herbicidas, así como inferir los niveles de resistencia a los herbicidas. Esto se logra rompiendo primero la latencia de las semillas recolectadas de plantas que habían sobrevivido a un tratamiento con herbicidas para obtener la germinación simultánea y la emergencia de las plántulas. Se requiere un período de vernalización de la semilla que dure desde unos pocos días hasta más de una semana.

El segundo paso es verter un medio barrena con nitrato de potasio en platos de plástico. A continuación, las semillas de Vern se colocan en el sinfín solidificado y los platos se transfieren a un armario de germinación con las condiciones óptimas para cada especie de maleza. A continuación, se trasplantan de 15 a 20 plántulas en bandejas de plástico llenas de una mezcla para macetas estándar.

Se asigna un código de barras a cada bandeja, que incluye toda la información para su identificación única, y las bandejas se colocan en un invernadero calentado hasta que las plántulas alcanzan la etapa de dos a tres hojas. El paso final es el tratamiento con herbicidas utilizando un rociador de banco de precisión, todos los herbicidas se aplican como formulaciones comerciales con surfactantes recomendados a dos dosis de campo recomendadas, y tres veces tres o cuatro semanas después del tratamiento, se realiza la evaluación final. Se utiliza un lector de códigos de barras para registrar el número de plantas supervivientes y la biomasa estimada visual por unidad experimental.

Luego, los datos se descargan en una computadora y se analizan para determinar el estado de resistencia a los herbicidas. La principal ventaja de este método frente a las pruebas de cribado diagnóstico in vivo o in vitro está relacionada con su robustez y flexibilidad. En otras palabras, el método es fiable y puede adaptarse fácilmente a una amplia gama de especies mediante pequeñas adaptaciones.

Este método ayuda a responder preguntas clave relacionadas con el estudio y el manejo de las poblaciones de malezas resistentes a herbicidas en los campos de CRO, como el patrón y el nivel de resistencia. También permite planificar adecuadamente otros pasos experimentales, como los experimentos de respuesta. Por lo general, los investigadores nuevos en las pruebas de resistencia a herbicidas tendrán dificultades debido a los muchos pasos y aspectos que deben considerarse y adaptarse a las condiciones experimentales específicas.

Comience recolectando una muestra de semillas de una especie a la vez y asignándole un código único. Limpie las semillas quitando la paja y desarrastre las semillas. Rellene un formulario para cada muestra indicando el código único asignado.

Nombre de la especie, fecha de recolección, coordenadas GPS, municipio, nombre del agricultor, tamaño del campo, nivel de infestación, herbicidas utilizados durante la temporada y registros históricos del campo. Guarde las semillas en bolsas de papel sin sellar etiquetadas con el código único asignado. Deje que la humedad se evapore, pero no exponga las semillas a altas temperaturas o a fluctuaciones extremas de temperatura.

Para evitar la inducción de la latencia secundaria. Guarde las semillas limpias a cuatro grados centígrados en una habitación oscura para permitir la vernalización. Pon un poco de agua desionizada en platos de plástico.

Corta dos discos y una tira de papel de filtro, que a través de la capilaridad formará un puente entre el agua y los dos discos. Remoja el papel de filtro en agua y colócalos en los platos de plástico. Luego coloque las semillas secadas al aire sobre el papel.

Transfiera los platos de plástico a cuatro grados centígrados durante el período de tiempo requerido, según la especie. A continuación, prepare una solución de barrena al 0,6% que contenga 0,1% de nitrato de potasio con agua desionizada, disuelva la barrena en un horno microondas y vierta la solución de barrena en platos de plástico. Una vez que el sustrato se enfríe, coloque las semillas de Berna para germinar en el sinfín solidificado.

Coloque los platos de plástico en un gabinete de germinación La duración de la vernalización, así como las condiciones de luz y temperatura, varían según la especie de maleza. El trasplante en lugar de la costura directa permite obtener un rodal uniforme de plantas en la misma etapa de crecimiento, lo cual es una condición previa importante para optimizar el rendimiento del tratamiento con herbicidas. Trasplante de 15 a 20 plántulas en bandejas de plástico llenas de una mezcla estándar para macetas de 60% franco limoso, tierra, 15% arena, 15% perlita, y 10% turba. Identifique cada bandeja con un código de barras, incluida toda la información para el código de población de identificación única del herbicida que se está probando, el número de réplica y el número de bandeja progresiva.

Coloque las bandejas en un invernadero con calefacción y riegue las plantas según sea necesario para mantener el sustrato a su capacidad de campo o cerca de ella. La temperatura de crecimiento varía dependiendo de la especie de maleza para los herbicidas de post-emergencia. Las plantas de pulverización, cuando alcanzan la etapa de dos a tres hojas, preparan la solución de surfactante a granel de acuerdo con las instrucciones de la etiqueta, la concentración final generalmente se expresa como un porcentaje del volumen final o ¿el volumen se distribuirá por unidad de área?

Calcule la cantidad de producto comercial que se disolverá en la solución de tensioactivo. Usando esta ecuación, la dosis de herbicida se calcula multiplicando la dosis de campo recomendada por la dosis máxima probada y el volumen final de la solución dividido por el volumen suministrado por el rociador de banco. Prepare la solución de herbicida más concentrada Primero, diluya la solución de herbicida tres veces para preparar la solución menos concentrada.

Este procedimiento reduce la posibilidad de cometer errores al pesar o pipetear los herbicidas. Solución herbicida. La concentración se expresa como el volumen a distribuir por unidad de superficie.

Inicie la secuencia del tratamiento con una dosis más baja de herbicida. De esta manera, no es necesario lavar la cabina de pulverización entre dos tratamientos con el mismo herbicida. Distribuya la solución herbicida utilizando un pulverizador de banco de precisión, entregando 300 litros por hectárea a una presión de 215 kilos pascales y una velocidad de 0,75 metros por segundo con una barra equipada con tres boquillas hidráulicas de ventilador plano.

Lave la cabina de pulverización dos veces cuando se cambie el herbicida, usando lejía al 1% y luego enjuague. Realizar la valoración tres o cuatro semanas después del tratamiento en función de los herbicidas ensayados, registrar el número de plantas que sobreviven al tratamiento así como la biomasa estimada visual o VEB mediante un lector de código de barras, que identifica automáticamente cada bandeja. Las plantas se evalúan como muertas si no muestran crecimiento activo, independientemente del color u otra apariencia.

La VEB se obtiene a través de una comparación visual de la biomasa vegetal entre un testigo tratado y uno no tratado de la misma población. A cada bandeja tratada se le asigna una puntuación que oscila entre 10 para las plantas no afectadas por el herbicida y cero cuando las plantas están claramente muertas. Evaluar la eficacia general del tratamiento mediante la inclusión de una población susceptible en todos los experimentos, como una población recolectada en un sitio que nunca o rara vez fue tratado con herbicidas.

Exprese la supervivencia de la planta como porcentaje del número de plantas tratadas contadas justo antes del tratamiento con herbicida y calcule el error estándar. El valor de perma atribuye las poblaciones a cuatro categorías basadas en los resultados obtenidos de los tratamientos con dos dosis de herbicida susceptibles cuando menos del 5% de las plantas sobreviven a la dosis de herbicida. Una x ligeramente resistente cuando los supervivientes oscilaron entre el 5% y el 20% a la dosis de herbicida.

Una x resistente cuando más del 20% de las plantas sobreviven a la dosis de herbicida. Una x y altamente resistente cuando los supervivientes son más del 20% a la dosis de herbicida, una x y más del 10% a la dosis de herbicida. Se muestran tres resultados representativos de un tratamiento herbicida con panolam en cuatro poblaciones de iopa.

El testigo de susceptibilidad fue completamente controlado, mientras que la población 1410 se categorizó como ligeramente resistente debido a que menos del 20% de las plantas sobrevivieron. La población 1411 se controló a la dosis tres x, pero la supervivencia de las plantas a la dosis uno x resultó ser superior al 20%, por lo que se atribuyó a nuestro estado. Finalmente, la población 1412 no se controló ni a la dosis de campo recomendada ni una x ni tres veces mayor, por lo que se asignó a la categoría de alta resistencia.

Aquí se muestra un segundo ejemplo de estimación visual de la biomasa en plantas tratadas con trien Ron metilo. Se asigna una puntuación de 10 al testigo no tratado, mientras que las bandejas con plantas completamente controladas tienen un VEB de cero. Se asigna una puntuación intermedia de cinco a las bandejas.

Tener una biomasa vegetal total, que es la mitad de las bandejas de plantas no tratadas, con plantas que tienen una biomasa comparable al testigo no tratado donde las plantas no fueron afectadas por tratamientos herbicidas y por lo tanto resultaron como altamente resistentes tienen un VEB de 10. Al intentar este procedimiento, es importante recordar que la calidad de las semillas de malezas, que deberían haberse recolectado cuando estaban maduras y luego restauradas, tiene un fuerte impacto en el éxito de los experimentos que siguen este procedimiento. Otros métodos, como los de respuesta byas, se pueden realizar para responder con precisión a preguntas adicionales relacionadas con el nivel de resistencia.

Después de ver este video, debería tener una buena comprensión de cómo abordar las pruebas de resistencia a herbicidas y cómo adaptar los diferentes pasos a las diferentes especies de malezas. En particular, el frenado CY de las semillas y la germinación de las semillas. No olvide que trabajar con herbicidas o ácidos concentrados puede ser extremadamente peligroso en precauciones como el uso de mascarillas, guantes y otros equipos de protección personal que siempre se deben tomar mientras se realiza este procedimiento.