Name: Phosphopeptides Gelişmiş Zenginleştirme için Makrogözenekli Polimer Monoliths üzerinde yüksek Gözenekli Koordinasyon Polymer Coatings Hazırlanması (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2015-07-14T13:30:00.000+00:00
Duration: 10 min 27 s
Description: Keşfedin, makrogözenekli polimer monolith üzerinde metal-organik çerçeve katmanları büyüterek fosfopeptitlerin seçici ekstraksiyonu için yüksek gözenekli koordinasyon polimer kaplamaları hazırlama yöntemini. Bu teknik, proteomik analizlerde hassasiyeti artırır.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

Bu çalışma, Molecular Foundry, Lawrence Berkeley Ulusal Laboratuvarı'nda gerçekleştirilmiş ve ABD Enerji Bakanlığı Bilim Ofisi, Temel Enerji Bilimleri Ofisi, Bilimsel Kullanıcı Tesisleri Bölümü tarafından Sözleşme No'su kapsamında desteklenmiştir. DE-AC02–05CH11231. F.M.'nin ME-Fulbright bursu ve A.S.'nin Pakistan Yüksek Öğretim Komisyonu tarafından sağlanan mali desteği minnetle kabul edilmektedir.

NOT: Başlamadan önce, tüm ilgili malzeme veri sayfaları (MSDS) kontrol edin. Sentetik ve uygulama prosedürleri kullanılan kimyasalların çeşitli toksik değildir. Tüm uygun güvenlik uygulamalarını takip ve yeterli koruyucu ekipman (laboratuvar önlüğü, tam uzunlukta pantolon, kapalı-toe ayakkabıları, koruyucu gözlük, eldiven) kullanın. Azot adsorpsiyon ölçümleri için sıvı azot (izolasyonlu eldiven, yüz maskesi) işlerken tüm kriyojenik kişisel koruyucu donanımları kullanın. Toplu ve Kılcal Sütun Format 1. Gözenekli Polimer Monolith Hazırlık <ol><li> Karakterizasyonu için yığın polimer Monolith <ol><li> Polimerizasyon inhibitörleri kaldırmak için, bazik alumina kolonu boyunca stiren, divinilbenzen ve metakrilik asit saflaştınlır. Şırınga ucu paketlenmiş bir cam yün elyaf, bir fiş ile 25 ml&#39;lik bir tek kullanımlık plastik şırınga içinde bazik alumina 10 g yerleştirin. Sütun üzerinden monomer, yaklaşık 10 ml percolate. </li><li> Monomerlerin (50 mg, stiren, 100 mg divinilbenzen ve 50 mg metakrilik asit) ve 1 ml bir cam şişe içinde, gözenek oluşturucu maddeler (300 mg, toluen ve 300 mg izooktan) yükleyin. Polimerizasyon başlatıcı, 2,2&#39;-azobisizobütironitril (AIBN, monomerlere göre% 1) in 4 mg ekleyin. </li><li> 10 dakika süre ile sonikasyon suretiyle homojenize edilir. 10 dakika boyunca bir sıvı içinden nitrojen kabarcıklanarak çözülmüş oksijenin ayrılması. Parafın film ile flakon kapağı kapatılır ve karışım polimerize etmek için, 6 saat boyunca 60 ° C&#39;de bir su banyosu içine koyun. </li><li> Oda sıcaklığına soğutulur ve dikkatli bir şekilde şişe bölünürler. Bir selüloz çıkarma yüksük içine polimer monolith aktarın. Bir Soxhlet ekstre odasına ekstraksiyon yüksüğünü yerleştirin ve ekstraksiyon odasının en az üç kez hacminin bir metanol hacmi ihtiva eden bir yuvarlak tabanlı şişeye, için bir araya. Ekstraksiyon haznesinin üst kısmına bir kondansatör birleştirin. Metanol kaynatarak Soxhlet ekstraksiyon gerçekleştirin16 saat süre ile, reaksiyona girmemiş monomerlerin tam kaldırma sağlamak maddeler ve gözenek oluşturucu. </li><li> 60 ° C&#39;de bir vakum fırınında gece boyunca karıştırılmıştır. Fourier tarafından PCP Kızılötesi Spektroskopisi (FT-IR) Transform takmak için karbonik fonksiyonel grupların varlığını onaylayın. Azot adsorpsiyon porosimetrisi yüzey alanını ölçün. </li></ol></li><li> Monolitik Kolonlar Hazırlanması için Silika kılcal işlevselleştirilmesi <ol><li> Bir poliimid kaplamalı 100 mikron id erimiş silika kapiller 2 m kesin. Bir 0,25-0,50 ml cam şırınga bağlayın ve aseton ile kılcal yıkayın. Su ile kılcal durulayarak aseton çıkarın. </li><li> Kılcal iç silika kaplama aktif hale getirmek için, 30 dakika / 0,25 ul dakika 0.2 M sulu NaOH çözeltisi akıtmak üzere bir şırınga pompası kullanımı. Atık su nötr olana kadar su ile durulayın. </li><li> Atık pH&#39;ı kontrol etmek için pH kağıdı şeritleri kullanın. Kılcal silanol grupları protonlanması için, bir 0.2 M aqueo pompa30 dakika boyunca 0.25 ml / dak kılcal aracılığıyla ABD HCI çözeltisi. Atık su nötr olana kadar su ile durulayın. Etanol ile durulayın. </li><li> 1 saat / 0,25 ul min (ağ / ağ)% 20 3- (trimetoksisilil) propil metakrilat (asetik asit ile ayarlanmış, pH 5) ve etanol çözeltisi Pompa. Bu aşamada silis kapiler kapiler iç yüzeyine bir polimer monolitin tutturmak için vinil grupları ile fonksiyonalize edilir. </li><li> Bir azot akımı içinde, aseton ile kuru durulayın ve gece boyunca kullanmadan önce oda sıcaklığında bırakın. Uzunluğu 20 cm daha kısa parçalar halinde kılcal kesilir. </li></ol></li><li> Monolitik Kılcal Sütunlar hazırlanması <ol><li> Bir lastik septum ile 1 ml bir cam şişe içinde yığın polimer monolit (bölüm 1.1) için olduğu gibi aynı polimerizasyon karışım hazırlayın. Monomerlere göre başlatıcı% 1 AIBN ekleyin. 10 dakika süre ile sonikasyon suretiyle homojenize edilir. </li><li> Olmayan bir fonksiyonalize edilmiş silika kılcal bağlanmasıyla azot ile polimerleştirme karışımı temizleyinbir azot akımına. <ol><li> Şişenin lastik septum ile azot akımı kılcal yerleştirin ve azot sıvı yoluyla kabarcıklar böylece polimerizasyon karışımı içine daldırın. Aşırı basınç önlemek için biraz gevşek flakon kapağı bırakın. 10 dakika süre ile temizleyin. </li><li> Şişenin tepe boşluğuna polimerizasyon karışımından azot akımı kılcal kaldırın ve sıkıca kapağı kapatın. Polimerizasyon karışımı içine septum ile işlevselleştirilmiş kılcal yerleştirin. tepe boşluğu içine enjekte edilen nitrojenin üzerinden boru içine üretilen basıncın aşırı işlevselleştirilmiş kılcal yoluyla polimerleştirme karışımı pompalar. </li><li> Tamamen dolu olduğundan emin olun ve bir lastik septum ile kapatmak için kılcal atığından polimerizasyon karışımı birkaç damla toplayın. Çok dikkatli bir şekilde şişeden dışarı kılcal alın ve bir lastik septum ile kılcal girişi kapatılmıştır. </li></ol></li><li> Karışımı polimerize6 saat boyunca 60 ° C&#39;de bir su banyosu içinde kılcal içinde ihtiva Ture. Oda sıcaklığında soğutulur ve kılcal her iki ucunda bir kaç milimetre kesti. 30 dakika boyunca 3 ul / dk&#39;da bir HPLC pompası kullanılarak asetonitril ile sütun su ile yıkanması ile, reaksiyona girmemiş monomerler ve gözenek oluşturucu maddeler çıkarın. Kılcal sütunun backpressure kontrol ediniz. </li></ol></li></ol> Demir-benzenetrycarboxylate 2. Büyüme (FeBTC) PCP <ol><li> Karakterizasyonu için bir yığın polimer Monolith&#39;deki ilgili FeBTC MOPH Büyüme <ol><li> Bir havan ve havan tokmağı kullanılarak önceden kurutulmuş monolitin öğütün. </li><li> 15 dakika boyunca etanol içinde 2 mM FeCl3 · 6H 2 O 5 ml monolit bir toz, 100 mg bırakın. Naylon filtre (0.22 um) ve etanol ile toz yıkama kullanılarak vakum filtresi. 15 dakika boyunca etanol içinde 2 mM 1,3,5-benzentrikarboksilik asit (BTC) 5 ml monolit toz bırakın. Naylon filtre (0.22 um) ve etanol ile toz yıkama kullanılarak vakum filtresi.</li><li> Istediğiniz gibi adımı yineleyin sayısı 2. son metal-organik bir kaplamanın uygulandığı bir büyüme döngüsü sayısı ile tanımlanır. Tipik haliyle, 10 ve 30 döngü gerçekleştirilmiştir. Azot adsorpsiyon porosimetrisi yeni gözeneklerin varlığı onaylayın. Termogravimetrik analiz (TGA) ile ek metal sitelerinin miktarını ölçün. </li></ol></li><li> Phosphopeptides zenginleştirilmesi için bir kılcal monolitik kolonu üzerinde FeBTC MOPH Büyüme <ol><li> Bir şırınga pompası kullanılarak. 2 ul / dakika ile 15 dakika süre ile etanol içinde 2 mM FeCl3 · 6H 2 O kılcal monolitin yıkayın. 2 ul / dakika, 15 dakika boyunca etanol ile yıkayın. 2 ul / dakika ile 15 dakika süre ile etanol içinde 2 mM BTC kılcal monolitin yıkayın. 2 ul / dakika, 15 dakika boyunca etanol ile yıkayın. </li><li> Istediğiniz gibi 1. adımı yineleyin. son metal-organik kaplama büyümesi gerçekleştirilen döngüsü sayısı ile tanımlanır. </li></ol></li></ol> 3. Protein Sindirimi ve EPhosphopeptides nrichment <ol><li> Protein Sindirimi <ol><li> 1 ml su içinde yağsız süt, 0.5 ml içinde çözülür ve 200 | il fraksiyonlar bölün. </li><li> Protein sindirimi için disülfid bağlarını bölmek amacıyla, her bir fraksiyonunu 160 ul 1 M amonyum bikarbonat ve 50 ul 45 mM ditiotreitol ekleyin. 15 dakika boyunca, bir Thermomixer 50 ° C&#39;de inkübe edilir. </li><li> Çözelti oda sıcaklığına kadar soğutuldu ise, iyodoasetamid, 100 mM&#39;lik bir sulu çözelti yavaş yavaş 50 ul ekle. İyodoasetamid yeni bir disülfid bağlarının oluşumunu engeller. </li><li> Oda sıcaklığında 15 dakika süreyle karanlıkta inkübe edilir. Deiyonize su 1 ml ilave edilir. 14 saat boyunca 37 ° C&#39;de bir Thermomixer proteinleri 2 ug tripsin ekleyin ve sindirimi. </li><li> % 1 trifloroasetik asit ve 10 ul ile asidifikasyon sindirim sonlandırma, ve oda sıcaklığında 5 dakika boyunca Thermomixer yerleştirerek. Sindirilmiş proteinler de Mağaza -20 ° C. </li></ol></li><li> Bir kılcal MOPH kolonu kullanılarak Phosphopeptides zenginleştirilmesi. <ol><li> 1 ul / dk&#39;lık bir akış hızında, 10 dakika boyunca, bir% 0.1 trifluoroasetik asit ihtiva eden asetonitril: 1 karışımı, 4 100 ul ile sütun yıkayın. 30 dakika boyunca / 2 ul dakika sütun aracılığıyla protein sindirimini Pompa. </li><li> 1 ul / dk&#39;lık bir akış hızında, 10 dakika boyunca, bir% 0.1 trifluoroasetik asit ihtiva eden asetonitril: 1 karışımı bir 4 ile tekrar fosforilatlanmamış peptidleri yıkayın. 1 ul / dk&#39;lık bir akış hızında, 10 dakika boyunca su ile yıkayınız. </li><li> 15 dakika boyunca 1 ml / dk&#39;da pompalı 250 mM, pH 7 fosfat tampon çözeltisi kullanılarak Elute fosfopeptidler. Bir şişe içinde eluent toplamak ve standart bir protokol 19 kullanılarak çözelti desalt. Matris destekli lazer desorpsiyon / iyonizasyon time-of-flight kütle spektrometrisi (MALDI-TOF-MS) için matris olarak kullanmak için bir 2 mg / ml 2,5-dihidroksibenzoik asit hazırlayın. Phosphope elüt edilmesi için ucu içine 2,5-dihidroksibenzoik asit, 2 ul çiziliptides MALDI plaka üzerinde doğrudan nokta ve. </li><li> MALDI-TOF-MS ile analiz noktalar ve su ve sonra metanol ile iyice yıkayarak kolon yeniden. </li></ol></li></ol>

<ol><li>Li, H., Eddaoudi, M., O’Keeffe, M., Yaghi, O. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Design+and+synthesis+of+an+exceptionally+stable+and+highly+porous+metal-organic+framework%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Design and synthesis of an exceptionally stable and highly porous metal-organic framework.</a> Nature. 402, 276-279 (1999).</li>
<li>Kitagawa, S., Kitaura, R., Noro, S. i <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Functional+porous+coordination+polymers%5BTitle%5D)+AND+%22Angew.+Chem.+Int.+Ed%22%5BJournal%5D)">Functional porous coordination polymers.</a> Angew. Chem. Int. Ed. 43, 2334-2375 (2004).</li>
<li>Furukawa, H., Cordova, K. E., O’Keeffe, M., Yaghi, O. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+chemistry+and+applications+of+metal-organic+frameworks%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">The chemistry and applications of metal-organic frameworks.</a> Science. 341, 974(2013).</li>
<li>Ma, S., Zhou, H. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Gas+storage+in+porous+metal-organic+frameworks+for+clean+energy+applications%5BTitle%5D)+AND+%22Chem.+Commun%22%5BJournal%5D)">Gas storage in porous metal-organic frameworks for clean energy applications.</a> Chem. Commun. 46, 44-53 (2010).</li>
<li>Li, J. R., Sculley, J., Zhou, H. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Metal-organic+frameworks+for+separations%5BTitle%5D)+AND+%22Chem.+Rev%22%5BJournal%5D)">Metal-organic frameworks for separations.</a> Chem. Rev. 112, 869-932 (2012).</li>
<li>Lee, J., Farha, O. K., Roberts, J., Scheidt, K. A., Nguyen, S. T., Hupp, J. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Metal-organic+framework+materials+as+catalysts%5BTitle%5D)+AND+%22Chem.+Soc.+Rev%22%5BJournal%5D)">Metal-organic framework materials as catalysts.</a> Chem. Soc. Rev. 38, 1450-1459 (2009).</li>
<li>Gu, Z. Y., Yang, C. X., Chang, N., Yan, X. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Metal-organic+frameworks+for+analytical+chemistry%3A+From+sample+collection+to+chromatographic+separation%5BTitle%5D)+AND+%22Acc.+Chem.+Res%22%5BJournal%5D)">Metal-organic frameworks for analytical chemistry: From sample collection to chromatographic separation.</a> Acc. Chem. Res. 45, 734-745 (2012).</li>
<li>Ahmad, R., Wong-Foy, A. G., Matzger, A. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Microporous+coordination+polymers+as+selective+sorbents+for+liquid+chromatography%5BTitle%5D)+AND+%22Langmuir%22%5BJournal%5D)">Microporous coordination polymers as selective sorbents for liquid chromatography.</a> Langmuir. 25, 11977-11979 (2009).</li>
<li>Yang, C. X., Yan, X. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Metal-organic+framework+MIL-101%28Cr%29+for+high-performance+liquid+chromatographic+separation+of+substituted+aromatics%5BTitle%5D)+AND+%22Anal.+Chem%22%5BJournal%5D)">Metal-organic framework MIL-101(Cr) for high-performance liquid chromatographic separation of substituted aromatics.</a> Anal. Chem. 83, 7144-7150 (2011).</li>
<li>Fu, Y. Y., Yang, C. X., Yan, X. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Control+of+the+coordination+status+of+the+open+metal+sites+in+metal-organic+frameworks+for+high+performance+separation+of+polar+compounds%5BTitle%5D)+AND+%22Langmuir%22%5BJournal%5D)">Control of the coordination status of the open metal sites in metal-organic frameworks for high performance separation of polar compounds.</a> Langmuir. 28, 6802-6810 (2012).</li>
<li>Gu, Z. Y., Yan, X. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Metal-organic+framework+MIL-101+for+high-resolution+gas-chromatographic+separation+of+xylene+isomers+and+ethylbenzene%5BTitle%5D)+AND+%22Angew.+Chem.+Int.+Ed%22%5BJournal%5D)">Metal-organic framework MIL-101 for high-resolution gas-chromatographic separation of xylene isomers and ethylbenzene.</a> Angew. Chem. Int. Ed. 49, 1477-1480 (2010).</li>
<li>Chang, N., Gu, Z. Y., Yan, X. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Zeolitic+imidazolate+framework-8+nanocrystal+coated+capillary+for+molecular+sieving+of+branched+alkanes+from+linear+alkanes+along+with+high-resolution+chromatographic+separation+of+linear+alkanes%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Am.+Chem.+Soc%22%5BJournal%5D)">Zeolitic imidazolate framework-8 nanocrystal coated capillary for molecular sieving of branched alkanes from linear alkanes along with high-resolution chromatographic separation of linear alkanes.</a> J. Am. Chem. Soc. 132, 13645-13647 (2010).</li>
<li>Yu, L. Q., Xiong, C. X., Yan, X. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Room+temperature+fabrication+of+post-modified+zeolitic+imidazolate-90+as+stationary+phase+for+open-tubular+capillary+electrochromatography%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Chromatogr.+A%22%5BJournal%5D)">Room temperature fabrication of post-modified zeolitic imidazolate-90 as stationary phase for open-tubular capillary electrochromatography.</a> J. Chromatogr. A. 1343, 188-194 (2014).</li>
<li>Fu, Y. Y., Yang, C. X., Yan, X. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Incorporation+of+metal-organic+framework+UiO-66+into+porous+polymer+monoliths+to+enhance+the+liquid+chromatographic+separation+of+small+molecules%5BTitle%5D)+AND+%22Chem.+Commun%22%5BJournal%5D)">Incorporation of metal-organic framework UiO-66 into porous polymer monoliths to enhance the liquid chromatographic separation of small molecules.</a> Chem. Commun. 49, 7162-7164 (2013).</li>
<li>Lin, C. L., Lirio, S., Chen, Y. T., Lin, C. H., Huang, H. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+novel+hybrid+metal-organic+framework-polymeric+monolith+for+solid-phase+extraction%5BTitle%5D)+AND+%22Chem.+Eur.+J%22%5BJournal%5D)">A novel hybrid metal-organic framework-polymeric monolith for solid-phase extraction.</a> Chem. Eur. J. 20, 3317-3321 (2014).</li>
<li>Svec, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Porous+polymer+monoliths%3A+Amazingly+wide+variety+of+techniques+enabling+their+preparation%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Chromatogr.+A%22%5BJournal%5D)">Porous polymer monoliths: Amazingly wide variety of techniques enabling their preparation.</a> J. Chromatogr. A. 1217, 902-924 (2010).</li>
<li>Monolithic HPLC Columns. , Available from: 
 <a target="_blank" href="http://www.phenomenex.com/onyx">http://www.phenomenex.com/onyx</a> (2015).</li>
<li>Bia Separations. , Available from: 
 <a target="_blank" href="http://www.biaseparations.com/">http://www.biaseparations.com/</a> (2015).</li>
<li>Shekhah, O., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Step-by-step+route+for+the+synthesis+of+metal-organic+frameworks%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Am.+Chem.+Soc%22%5BJournal%5D)">Step-by-step route for the synthesis of metal-organic frameworks.</a> J. Am. Chem. Soc. 129, 15118-15119 (2007).</li>
<li>Shekhah, O., Fu, L., Belmabkhout, Y., Cairns, A. J., Giannelis, E. P., Eddaoudi, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Successful+implementation+of+the+stepwise+layer-by-layer+growth+of+MOF+thin+films+on+confined+surfaces%3A+mesoporous+silica+foam+as+a+first+case+study%5BTitle%5D)+AND+%22Chem.+Commun%22%5BJournal%5D)">Successful implementation of the stepwise layer-by-layer growth of MOF thin films on confined surfaces: mesoporous silica foam as a first case study.</a> Chem. Commun. 48, 11434-11436 (2012).</li>
<li>Saeed, A., Maya, F., Xiao, D. J., Naham-ul-Haq, M., Svec, F., Britt, D. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Growth+of+a+highly+porous+coordination+polymer+on+a+macroporous+polymer+monolith+support+for+enhanced+immobilized+metal+ion+affinity+chromatographic+enrichment+of+phosphopeptides%5BTitle%5D)+AND+%22Adv.+Funct.+Mater%22%5BJournal%5D)">Growth of a highly porous coordination polymer on a macroporous polymer monolith support for enhanced immobilized metal ion affinity chromatographic enrichment of phosphopeptides.</a> Adv. Funct. Mater. 24, 5797-5710 (2014).</li>
<li>Krenkova, J., Lacher, N. A., Svec, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Control+of+selectivity+via+nanochemistry%3A+Monolithic+capillary+column+containing+hydroxyapatite+nanoparticles+for+separation+of+proteins+and+enrichment+of+phosphopeptides%5BTitle%5D)+AND+%22Anal.+Chem%22%5BJournal%5D)">Control of selectivity via nanochemistry: Monolithic capillary column containing hydroxyapatite nanoparticles for separation of proteins and enrichment of phosphopeptides.</a> Anal. Chem. 82, 8335-8341 (2010).</li>
<li>Jabeen, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Silica-lanthanum+oxide%3A+Pioneer+composite+of+rare-earth+metal+oxide+in+selective+phosphopeptides+enrichment%5BTitle%5D)+AND+%22Anal.+Chem%22%5BJournal%5D)">Silica-lanthanum oxide: Pioneer composite of rare-earth metal oxide in selective phosphopeptides enrichment.</a> Anal. Chem. 84, 10180-10185 (2012).</li>
<li>Hussain, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Functionalized+diamond+nanopowder+for+phosphopeptides+enrichment+from+complex+biological+fluids%5BTitle%5D)+AND+%22Anal.+Chim.+Acta%22%5BJournal%5D)">Functionalized diamond nanopowder for phosphopeptides enrichment from complex biological fluids.</a> Anal. Chim. Acta. 775, 75-84 (2013).</li>
<li>Aprilita, N. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Poly%28glycidyl+methacrylate%2Fdivinylbenzene%29-IDA-FeIII+in+phosphoproteomics%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Proteom.+Res%22%5BJournal%5D)">Poly(glycidyl methacrylate/divinylbenzene)-IDA-FeIII in phosphoproteomics.</a> J. Proteom. Res. 4, 2312-2319 (2005).</li>
<li>Lo, C. Y., Chen, W. Y., Chen, C. T., Chen, Y. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rapid+enrichment+of+phosphopeptides+from+tryptic+digests+of+proteins+using+iron+oxide+nanocomposites+of+magnetic+particles+coated+with+zirconia+as+the+concentrating+probes%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Proteom.+Res%22%5BJournal%5D)">Rapid enrichment of phosphopeptides from tryptic digests of proteins using iron oxide nanocomposites of magnetic particles coated with zirconia as the concentrating probes.</a> J. Proteom. Res. 6, 887-893 (2007).</li>
<li>Aryal, U. K., Ross, A. R. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Enrichment+and+analysis+of+phosphopeptides+under+different+experimental+conditions+using+titanium+dioxide+affinity+chromatography+and+mass+spectrometry%5BTitle%5D)+AND+%22Rapid+Commun.+Mass.+Spectrom%22%5BJournal%5D)">Enrichment and analysis of phosphopeptides under different experimental conditions using titanium dioxide affinity chromatography and mass spectrometry.</a> Rapid Commun. Mass. Spectrom. 24, 219-231 (2010).</li>
<li>Select Iron Affinity Gel Technical Bulletin. , Available from: 
 <a target="_blank" href="https://www.sigmaaldrich.com/content/dam/sigma-aldrich/docs/Sigma/Bulletin/p9740bul.pdf">https://www.sigmaaldrich.com/content/dam/sigma-aldrich/docs/Sigma/Bulletin/p9740bul.pdf</a> (2015).</li>
</ol>

Yazarların açıklayacak hiçbir şeyi yoktur.

Orijinal polimerin monolit metaller bağlanabilen karboksilik fonksiyonel grupları içerir. Orijinal malzeme başlangıç ​​metal sitelerini koordine bir mikro-gözenekli bir ağ şekillendirme ek metal sitelerinin bir dizi içeren bir PCP kaplama (Şekil 1A) büyümek edebiliyoruz. Bu durum, hareketsiz metal iyonu yakınlık kromatografisi (IMAC) tekniği olarak metal türleri söz konusu ekstraksiyon ve saflaştırma işlemleri için çekici bir sunulan MOPH malzemeleri sağlar. Phosphopeptides zenginleştirilmesi için bir k...

Gözenekli bir koordinasyon polimerler (yaratanlar) amorf ya da 1-3 kristalize olabilen 1, 2 ya da 3 boyutlu olarak uzanan bir koordinasyon kişiler tekrarlayan organik ligandlar ile bağlantılı metaller merkezlerine göre koordinasyon bileşikleri bulunmaktadır. Son yıllarda, gözenekli malzemelerin bu sınıf nedeniyle yüksek gözeneklilik, geniş kimyasal Ayarlanabilirliğin ve onların istikrar geniş ilgi gördü. Yaratanlar gaz depolama, gaz ayırma ve kataliz 3-6, ve çok yakın zamanda, yaratanlar ilk analitik uygulamalar 7 tarif edilmiştir dahil uygulamaları bir dizi için araştırılmıştır. Çünkü onların gelişmiş kimyasal işlevsellik ve yüksek gözenekli yaratanlar arıtma süreçleri ve kromatografik ayırımlar iyileştirilmesi için onların büyük potansiyeli hedef seçilmişlerdir, ve bu konuyu ilgili raporların bir numara 7-13 yayınlandı. Bununla birlikte, yaratanlar performansı, bir equivale şu anda değil,nedeniyle parçacıkların ya da kristallerin kendi tipik düzensiz şekilli morfolojiler nedeniyle bu katıların dolu yatak büyük parçacıklar arası boşluklar aracılığıyla hızlı difüzyon olasılığı mevcut kromatografik malzemeleri ile nt seviyesinde. Bu, düzensiz olarak dağıtılmış ambalaj dan daha düşük bir beklenen performans, hem de yüksek sütun backpressuresin ve istenmeyen pik şekli morfolojileri 14,15 yol açar. Parçacık arası boşluklara sayesinde hızlı yayılma sorunu çözmek ve eş zamanlı olarak analiz uygulamaları için yaratanlar performansını artırmak amacıyla, makro-yüzeyinde PCP ihtiva eden bir makro-gözenekli bir polimer monolit 16 dayanan bir hibrid malzemeden gelişimi olur istenebilecektir. Polimer yekpare keçeleri boncuk ve başarıyla birkaç c piyasaya sürülmüş en verimli alternatiflerden birini onları yapar, kendi gözenekler aracılığıyla konvektif akışını sürdürmek, tek parça malzemeleri kendine yeten<html> ompanies 17,18. Gözenekli polimer yekpare genellikle monomerinin polimerizasyonu ve tipik olarak organik çözücülerin ikili karışımlarıdır porogens, mevcudiyetinde bir çapraz bağlayıcı dayanmaktadır. Elde edilen monolitik malzemeler microglobular yapısı ve yüksek gözeneklilik ve akış geçirgenliğine sahiptir. Basit bir yaklaşım PCP içeren bir polimer monolit monolit polimerizasyon karışımı olarak sentezlenmiş yaratanlar doğrudan ilave dayanmaktadır hazırlamak için bu malzemeleri birleştirmek için. Yaratanlar sonuçlandı Bu yaklaşım çoğunlukla nihai malzemenin 14,15 daha fazla uygulama için aktif olan bir polimer iskele içinde gömülü değil. Bir farklı sentetik yaklaşımı, örneğin, kristal içinde bulunan gözeneklerin büyük bir kısmı bir polimer yekpare makro-erişilebilen yaratanlar, ya da kristal metal organik çerçevelerin (MOFs) üniform filmler geliştirmek için gereklidir. t &quot;&gt; Bu yazıda kolayca uygulanabilir yaratanlar bağlanması için uygun bir fonksiyonel grup, bir makro-gözenekli bir polimer destek üzerine dayanan bir metal-organik bir polimer karma malzemesi (MOPH) hazırlanması için bir protokol rapor kendi kendine yeten bir tek akış uygulamaları için optimum özelliklere sahip bir sütun biçiminde parça Takımı polimer monolit. polimer sentezi prosedürü basit bir oda sıcaklığı çözüm tabanlı takip eder &#160; yöntem, monolit 19-20 gözeneklerinin iç yüzeyi üzerinde bir PCP kaplama büyümesi. İlk örnek olarak, bir makro-gözenekli poli (stiren-divinilbenzen-metakrilik asit) yekpare olan, bir demir (III) benzenetricarboxylate (FeBTC) koordinasyon polimer filmin hazırlanmasını tarif etmektedir. Bu yöntem toplu tozlar hazırlanması gibi kapiler sütun için etkili olan ve tarif edilen protokol, diğer yaratanlar kolayca uygulanabilir değildir. Akış Throu fonksiyonel malzemeler olarak MOPHs potansiyelinin bir örnek olarakbu tip uygulamaların biz merkezleri Fe Phosphopeptides bağlanma afinitesini istismar sindirilmiş protein karışımları arasından fosfopeptidler zenginleştirmek (III) Fe yoğun bir kaplama içeren geliştirilmiş FeBTC MOPH uygulanan (III). geliştirilen protokol 21 üç ana bölümden oluşmaktadır: makropor organik polimer monolit destek hazırlanması; monolit gözeneklerin yüzeyinde PCP kaplama büyümesi; Phosphopeptides zenginleştirilmesi için uygulama.

<table><tbody><tr><td>Poliimid kaplı kılcal damarlar</td><td>Polymicro Technologies</td><td>TSP100375</td><td>100 & mu; M Kimlik</td></tr><tr><td>3- (trimetoksisilil) propil metakrilat,% 98</td> <td>Sigma-Aldrich</td><td>440159</td><td></td></tr><tr><td>Stiren,% 99</td> <td>Sigma-Aldrich</td><td>W323306</td><td>Teknik sınıf</td></tr><tr><td>Divinilbenzen,% 80</td> <td>Sigma-Aldrich</td><td>414565</td><td></td></tr><tr><td>Metakrilik asit,% 98</td> <td>Mallinckrodt</td><td>MK150659</td><td></td></tr><tr><td>Toluen, & ge; % 99,5</td> <td>EMD kimyasalları</td><td>MTX0735-6</td><td></td></tr><tr><td>İzoktan, vb; %99,5</td> <td>Sigma-Aldrich</td><td>650439</td><td></td></tr><tr><td>2,2'-azobisizobütironitril, %98</td> <td>Sigma-Aldrich</td><td>441090</td><td></td></tr><tr><td>Alüminyum oksit (bazik alümina)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>199443</td><td></td></tr><tr><td>Demir (III) klorür hekzahidrat, %97</td> <td>Sigma-Aldrich</td><td>236489</td><td></td></tr><tr><td>1,3,5-benzentrikarboksilik asit, %95</td> <td>Sigma-Aldrich</td><td>482749</td><td></td></tr><tr><td>Asetonitril, &ge; % 99,5</td> <td>Sigma-Aldrich</td><td>360457</td><td></td></tr><tr><td>Amonyum bikarbonat, & ge; % 99,5</td> <td>Sigma-Aldrich</td><td>9830</td><td></td></tr><tr><td>Trifloroasetik asit, > % 99</td> <td>Sigma-Aldrich</td><td>302031</td><td></td></tr><tr><td>Etanol, & ge; % 99.8</td> <td>Sigma-Aldrich</td><td>2854</td><td></td></tr><tr><td>İyodoasetamid, &ge; % 99</td> <td>Sigma-Aldrich</td><td>I1149</td><td></td></tr><tr><td>Dithiothreitol, & ge; % 99</td> <td>Sigma-Aldrich</td><td>43819</td><td></td></tr><tr><td>Monobazik sodyum fosfat dihidrat, vb; % 99</td> <td>Sigma-Aldrich</td><td>71505</td><td></td></tr><tr><td>Dibazik sodyum fosfat dihidrat, > % 99</td> <td>Sigma-Aldrich</td><td>71643</td><td></td></tr><tr><td>Fosforik asit, > % 85</td> <td>Sigma-Aldrich</td><td>438081</td><td></td></tr><tr><td>2,5-dihidroksibenzoik asit, & ge; % 99</td> <td>Sigma-Aldrich</td><td>85707</td><td></td></tr><tr><td>Tripsin</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>T8003</td><td>Sığır pankreası</td></tr><tr><td>&beta;-kazein</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>C6905</td><td>Sığır sütü</td></tr><tr><td>ZipTip pipet uçları</td><td>Merck Millipore</td><td>ZTC18S096</td><td>C18 reçinesi</td></tr></tbody></table>

phosphopeptides gelişmiş zenginleştirme için makrogözenekli polimer monoliths üzerinde yüksek gözenekli koordinasyon polymer coatings hazırlanması

Preparation of Highly Porous Coordination Polymer Coatings on Macroporous Polymer Monoliths for Enhanced Enrichment of Phosphopeptides

Makro gözenekli polimer monolitlerin iç yüzeyinde yüksek gözenekli koordinasyon polimer kaplamalarına dayanan hibrit malzemelerin hazırlanması için bir protokol açıklıyoruz. Geliştirilen yaklaşım, karboksilik asit fonksiyonel grupları içeren makro gözenekli bir polimerin hazırlanmasına ve ardından polimer monolitinin gözeneklerinin yüzeyinde gözenekli bir koordinasyon polimeri tabakasının adım adım çözelti bazlı kontrollü büyümesine dayanmaktadır. Hazırlanan metal-organik polimer hibriti, yüksek bir özgül mikro gözenekli yüzey alanına sahiptir. Demir(III) bölgelerinin miktarı, fonksiyonel polimer desteğinin gözeneklerinin yüzeyindeki metal-organik koordinasyon yoluyla arttırılır. Metal bölgelerin artması, kaplama işleminin yineleme sayısı ile ilgilidir.
Geliştirilen hazırlık şeması, kılcal kolon formatına kolayca uyarlanır. Fonksiyonel gözenekli polimer, kılcal damar içinde bağımsız tek bloklu gözenekli bir monolit olarak hazırlanır ve mükemmel akış geçirgenliğine ve mütevazı geri basınca sahip bir akış ayırma cihazı verir. Metal-organik polimer hibrit kolonu, sindirilmiş proteinlerden fosfopeptitlerin zenginleştirilmesi ve daha sonra matris destekli lazer desorpsiyon/iyonizasyon uçuş süresi kütle spektrometresi kullanılarak tespit edilmesi için mükemmel performans gösterdi. Sunulan deneysel protokol çok yönlüdür ve çoklu saflaştırma ve/veya ayırma uygulamaları için çok sayıda gözenekli koordinasyon polimeri ve metal-organik çerçeve ile farklı organik polimer desteklerine ve kaplamalarına kolayca uygulanabilir.

Organik polimer yekpare gözenek yüzeyi üzerinde PCP büyüme şematik bir gösterimi, Şekil 1 &#39;de gösterilmiştir. Bu şekilde, bizim göstermektedir, ilk Fe (III) atomu karboksilik fonksiyonel gruplara koordine orijinal polimer yekpare gözenek yüzeyi üzerinde tutulan . Protokol izlenmek suretiyle, burada ek bir organik ligand ve tarif Fe (III) iyonları, polimer yekpare olan gözenekli bir koordinasyon ağ şekillendirme yüzeyine ilave edilir. Ayrıca, şematik akış geçiş destek olarak hazırlanmış kılcal MOPH s...

Yüksek yüzey alanlı mikro gözenekli koordinasyon polimeri ile içten kaplanmış makro gözenekli bir polimer monolitten oluşan gözenekli hibrit ayırma ortamının hazırlanması için bir prosedür sunulmaktadır.

Phosphopeptides Gelişmiş Zenginleştirme için Makrogözenekli Polimer Monoliths üzerinde yüksek Gözenekli Koordinasyon Polymer Coatings Hazırlanması

We describe a protocol for the preparation of hybrid materials based on highly porous coordination polymer coatings on the internal surface of macroporous ...

Aşağıdaki deneyin genel amacı, fosfopeptidlerin seçici ekstraksiyonunda geliştirilmiş performansa sahip yeni bir destek materyali hazırlamaktır. Bu, uygun fonksiyonel gruplara sahip gözenekli bir polimer kapiler monolitin uygun şekilde hazırlanmasıyla gerçekleştirilir. İlk olarak, polimer monolitin fonksiyonel grupları üzerine bir metal türü immobilize edilerek, desteğin fosfopeptid ekstraksiyonuna karşı seçici olması sağlanır.Metal merkezlerinin sayısını artırmak ve böylece fosfopeptitler için seçiciliği yükseltmek amacıyla, metal organik kafesin çok katmanlı büyüme işlemi adım adım gerçekleştirilir. Sonuçlar, matris destekli lazer desorpsiyon iyonizasyonu, uçuş süresi kütle spektrometrisi temelinde, protein sindirim ürünlerinden fosfopeptitlerin ekstraksiyonu için iyileştirilmiş bir seçicilik olduğunu göstermektedir. O peptidin zenginleştirilmesi genellikle, konvansiyonel silika partiküller veya polimer partiküllerle doldurulmuş bir kromatografi kolonunda gerçekleştirilen metal iyon afinite kromatografisi ile yapılır.Materyalimiz, iyi kütle iletim özelliklerine sahip makrogözenekli bir polimer monolitin avantajlarını, bir metal organik çerçevenin yüksek bağlanma kapasitesiyle bir

preparation-highly-porous-coordination-polymer-coatings-on

Research

JoVE Journal

Chemistry

Kimya

Biz bir kaç nm çeşitli malzemelerin nano boyutlu parçacıkların birkaç 100 nm arasında değişen ince filmler yatırmak plazma gelişmiş kimyasal buhar biriktirme kullandık. Biz geçirgenliği kabuğun kalınlığı ile kontrol edilir oyuk nanoshells üretmek için daha sonra aşındırma Çekirdek malzeme. Biz küçük çözünen bu kaplamaların geçirgenliği karakterize ve bu engelleri birkaç gün içinde çekirdek malzemenin sürekli salım sağlayabilir göstermektedir.

Plazma Polimerize Hollow Parçacıkların Encapsulation ve Geçirgenlik Özellikleri

Bu video, prostat tümörü dokusundan ekstrakte edilen fosfopeptitlerin titanyum dioksit bazlı zenginleştirilmesini göstermektedir. Bu zenginleştirilmiş fosfopeptitler, prostat kanserinin ilerlemesinde rol oynayan hücre sinyal yollarını anlamak için protein karakterizasyonu gibi aşağı akış uygulamaları için kullanılabilir.

Fosfopeptitlerin Titanyum Dioksit Bazlı Zenginleştirilmesi: Peptit Kütüphanesinden Fosfopeptitlerin Seçici İzolasyonu İçin Bir Yöntem

Çeşitli polimer kapsüllenmiş metal nanopartikül türlerini "homo-" ve "ko-polimerler" oluşan uzun zincirlere "polimerize etmek" için protokoller rapor ediyoruz.

Polistiren kullanma<em&gt; Bloğu</em&gt; -poli (Akrilik asit) Bunların homo- ve ko-polimerizasyon için monomer olarak metal Nanopartiküller -kaplı

Bu yazıda, konjuge mikro gözenekli polimerlerin (CMP) kurban substratlar üzerindeki arayüzey sentezini ve bağımsız CMP nanomembranlarının hazırlanması için substratın çözünmesini açıklıyoruz. Ek olarak, kırılgan nanomembranların diğer substratlara nasıl aktarılabileceğini açıklayacağız.

Katman-katman Sentezi ve Müstakil Konjuge mikro gözenekli polimer Nanomembranlar Devri

Hücre yapışkanlığı, biyomalzeme araştırmaları ve doku mühendisliğindeki birçok yaklaşımın anahtarıdır. Peptitler ile önemli polimer PTFE'nin yüzey modifikasyonu için ıslak kimya kullanılarak adım adım bir teknik sunulmaktadır.

Geliştirilmiş Hücre yapışma Politetrafloroetilen Islak Kimya ve Peptit İmmobilizasyonu

Polyamine tabanlı peptid amphiphiles (PPAs) sentezi gruplar bu reaktif işlevler maske korumanın akılcı kullanımı gerektiren birden çok Amin nitrogens, varlığı nedeniyle önemli bir sorundur. Bu yazıda, bu yeni sınıf kendi kendine montaj moleküllerin hazırlanması için facile yöntemi açıklanmaktadır.

Polyamine tabanlı peptid Amphiphiles (PPAs) ve ilgili Biyomalzeme kendi kendine montaj sentezi için facile iletişim kuralı

Bu iletişim kuralı ayıklamak ve prostat kanseri hücre hatlarından veya doku phosphoproteome ile kütle spektrometresi tabanlı proteomik analizi için phosphopeptides zenginleştirmek için bir yordam açıklanır.

Prostat kanserinde Phosphoproteome araştırmak için etiket içermeyen nicel kütle spektrometresi ile birleştiğinde Phosphopeptide zenginleştirme

Detaylı bir protokol ayırma, kimlik ve kapiller bölge Elektroforez-electrospray iyonlaşma-tandem kütle spektrometresi (CZE-ESI-MS/MS) kullanarak protein örnekleri proteoforms karakterizasyonu için tanımlanır. Protokol proteoforms basit protein örneklerinde yüksek çözünürlüklü karakterizasyonu ve proteoforms karmaşık Proteom örneklerinde büyük ölçekli tanımlaması için kullanılabilir.

Büyük ölçekli tepeden proteomik kılcal bölge Elektroforez Tandem kütle spektrometresi kullanılarak

Poli (pentafluorophenyl akrilat) hazırlanması için bir protokol (aşılı poly(PFPA)) silika boncuk sunulur. Poly(PFPA) functionalized yüzey o zaman ile antikorlar immobilize ve başarıyla immunoprecipitation yoluyla protein ayrılması için kullanılır.

Poly(pentafluorophenyl acrylate) Functionalized SiO2 boncuk hazırlanması için Protein Saflaştırma

Bir protokol bilgi kodlanmış peptoid oligomers sentezi için ve dinamik kovalent reaktan çiftleri ve Lewis asidik nadir toprak olarak aminler ve aldehitler kullanarak moleküler merdivenler içine bu peptoidlerin dizi yönelimli kendini montaj için sunulmaktadır metal çok rol reaktifler olarak triflates.

Bilgi taşıyan Peptoidlerin sentezi ve Dizi yönelimli Dinamik Kovalent Öz-montaj

Bu çalışma, mekanik olarak dayanıklı, hiyerarşik gözenekli monolitik malzemeler oluşturmak için şablon görevi gören Pickering emülsiyonlarını stabilize etmek amacıyla MIL-96(Al) Metal-Organik Çatı (MOF) parçacıklarını başarıyla kullanmaktadır. Bu yöntem, kristal bütünlüğünü korurken ölçeklendirilebilir MOF şekillendirmesine olanak tanır. Formülasyonun ayarlanması; gözenek boyutunun, birbirine bağlılığın, geçirgenliğin ve dayanıklılığın kontrol edilmesi açısından temel öneme sahiptir.

Metal-Organik Çerçeve (MOF) Partikülleri ile Stabilize Edilen Bir Pickering Emülsiyon Stratejisi Kullanarak Gözenekli Monolitik Materyallerin Montajı

Keşfedin, makrogözenekli polimer monolith üzerinde metal-organik çerçeve katmanları büyüterek fosfopeptitlerin seçici ekstraksiyonu için yüksek gözenekli koordinasyon polimer kaplamaları hazırlama yöntemini. Bu teknik, proteomik analizlerde hassasiyeti artırır.

Phosphopeptides Gelişmiş Zenginleştirme için Makrogözenekli Polimer Monoliths üzerinde yüksek Gözenekli Koordinasyon Polymer Coatings Hazırlanması (Video) | JoVE Journal

Phosphopeptides Gelişmiş Zenginleştirme için Makrogözenekli Polimer Monoliths üzerinde yüksek Gözenekli Koordinasyon Polymer Coatings Hazırlanması

Daha fazla video keşfet