Simple y asistida por ordenador de pruebas olfativas para Ratones

El objetivo general del siguiente experimento es probar la discriminación olfativa innata, la preferencia olfativa o la evitación y la sensibilidad olfativa en ratones. Esto se logra exponiendo al ratón a un nuevo atrayente o apelante, y a un olor neutro, que es agua. Mientras tanto, una cámara de video graba la sesión de comportamiento.

A continuación, se analiza el vídeo en la Imagen J utilizando las macros proporcionadas para obtener el tiempo empleado en los parámetros de olor y agua. Los resultados muestran el comportamiento de preferencia o evitación a los olores en comparación con el agua entre diferentes genotipos basados en el análisis post hoc asistido por computadora. La principal ventaja de las pruebas olfativas sobre el uso de arena dedicada y olfativa es que utiliza una arena familiar y, por lo tanto, es de finalización rápida y configuración simple.

Además, utiliza hardware barato que demuestra que el procedimiento será Emmanuel Abry, según un estudiante en mi laboratorio. Para este experimento, utilice ratones machos de tres a cinco meses, C 57 negros, seis de tipo salvaje y transgénicos. Esta demostración utiliza dos líneas de knockout y controles de compañero de camada.

Para las arenas experimentales, use jaulas de ratones limpias y esterilizadas con tres centímetros de ropa de cama. A continuación, prepare la configuración de la cámara. Colóquelo a 58 centímetros sobre el suelo de la jaula en un soporte de trípode personalizado.

Haz algunas marcas en el mostrador para indicar dónde debe estar la posición de la jaula. Para una imagen central, configure la cámara para grabar un vídeo de 320 x 240 píxeles a aproximadamente 15 fotogramas por segundo. Para preparar la prueba, haga que los concentrados de cada aroma se almacenen en solvente siempre que sea posible.

Para la prueba de preferencia, prepare una solución de 10% de peso por volumen de mantequilla de maní en aceite de maní. Para la prueba de evitación, tenga una solución de 98% de ácido metil butírico. Para la prueba de sensibilidad, recoja orina de hembra de un ratón de la misma cepa uno o dos días antes de la prueba.

Sujete a una hembra con su vientre por encima de la rejilla de la jaula y recoja las gotas de su orina en un plato de plástico. Recoja muestras de varias hembras para normalizar. Para la variabilidad individual, extraiga todas las muestras en un tubo de 1,5 mililitros y guárdelo a menos 20 grados centígrados.

Para comenzar a habituar a los animales, coloque uno en una jaula limpia y déjelo explorar. Durante cinco minutos, el entorno de la jaula de prueba debe ser similar al de la jaula doméstica. Repita la fase de habituación una vez cada día de prueba, cuando finalice el período de habituación, inicie la grabación y pipetee 60 microlitros de un aroma agradable.

En este caso, coloque la mantequilla de maní en una pared en la pared opuesta, pipetee la misma cantidad de agua. Un aroma neutro, aplique las gotas a unos 10 centímetros de cada pared. Ahora deje que el animal explore durante dos minutos, y luego detenga la grabación y devuelva el ratón a su jaula de origen.

Repita el proceso con cada ratón que se vaya a probar. Siempre utilizando nuevas jaulas de prueba. De tres a cinco días Después de realizar todas las pruebas de preferencia, realice la prueba de evitación utilizando una nueva jaula de prueba.

Para cada ratón, realice la prueba de evitación. Al igual que la prueba de atracción, solo reemplace el aroma agradable con el aroma de evitación, que son los dos ácido metilbutírico. Para la prueba de sensibilidad, se puede reutilizar una jaula entre ensayos para el mismo ratón.

Por lo tanto, marque el lado del agua de la jaula y prepárese para limpiar las paredes cortas con papel empapado en etanol al 70% entre ensayos. El día del experimento, haga cuatro concentraciones de orina con la serie de dilución diez veces. El uso de agua destilada doble como la prueba de evitación, habitúe a cada animal a su jaula de prueba durante cinco minutos.

A continuación, exponga a cada ratón a la orina con la dilución más alta al principio, que es de uno a 10.000. Durante la grabación, aplique la dilución de orina a la jaula de prueba y aplique agua a la pared opuesta. Al igual que se hace con otras pruebas, deje que el animal explore.

Durante dos minutos. A partir de entonces, transfiera al animal a una jaula de ratón limpia. Después de que todos los animales hayan experimentado la concentración más baja, limpie todas las paredes de la jaula de prueba y repita la prueba en cada ratón usando la siguiente orina más concentrada.

Continúe este proceso hasta que se analice la orina pura. Después de recopilar todos los datos de un experimento, abra los vídeos de la imagen J para el ajuste y los detalles de procesamiento que se proporcionan en el protocolo de texto utilizando los protocolos descritos. Dos líneas de nocaut diferentes.

Los grupos B y C se compararon con los controles del grupo A. Una prueba T no direccional de Student con varianza igual o desigual compara el tiempo transcurrido entre el olor y el agua dentro de los genotipos. Comparar el comportamiento entre genotipos utilizando un inova de un factor. En la prueba de evitación, la respuesta hacia el olor repulsivo del ácido bimetil butírico fue la esperada para los grupos A y B, pero el grupo C no mostró ningún comportamiento de evitación a este olor.

En la prueba de sensibilidad, el umbral de atracción se obtuvo restando el tiempo pasado con orina del tiempo pasado con agua, prefiriendo la orina al agua en una dilución de uno a 1000. Mientras que ambos grupos experimentales, B y c, necesitaron una concentración 100 veces mayor para mostrar una preferencia. Una vez dominada, esta técnica se puede realizar en un par de horas si se realiza correctamente, luego, siguiendo este procedimiento, se pueden realizar otros métodos como el aprendizaje y la extinción olfativa para investigar la plasticidad y el aprendizaje olfativo.