Preparación y Caracterización de Individual y Multi-fármaco cargado físicamente atrapado poliméricos micelas

El objetivo general del siguiente experimento es esbozar un proceso paso a paso de preparación y caracterización de mis células cargadas de fármacos antes de evaluarlas en estados de interés de la enfermedad. Esto se logra mediante la preparación de las células My mediante el método de fundición con solvente para generar células my reproducibles para el estudio. Como segundo paso, se evalúa la estabilidad y el tamaño de la carga celular, lo que determina la capacidad de las células para cargar y retener concentraciones clínicamente relevantes.

A continuación, se determina la tasa de liberación del fármaco de las células My para garantizar que mis células tengan las características adecuadas de liberación in vitro antes de evaluar la estabilidad in vivo. Los resultados muestran que las células my estables generadas de forma reproducible pueden proporcionar una plataforma para perseguir la administración de fármacos en varios estados de enfermedad en función de las técnicas de evaluación presentadas aquí. La principal ventaja de esta técnica o de los métodos existentes, como la carga de equilibrio o los métodos de diálisis, es que las miosinas se pueden preparar mucho más rápido con una carga y un tamaño de fármaco reproducibles.

Las implicaciones de esta técnica se extienden hacia la terapia o el diagnóstico de diversos estados patológicos porque los medicamentos a nanoescala ofrecen oportunidades más allá de las formas convencionales, por lo general, las personas que recién comienzan pueden tener dificultades con estas técnicas a pesar de que son simples porque aún así se pueden hacer los estudios de liberación, no se puede evaluar realmente el efecto de explosión. Primero pesarán un miligramo de DTX, un miligramo de EVR y 15 miligramos de Peg 4, 000 bloque PLA 2200 para el fármaco dual my cells o DDM. Después de pesar, disuelva los medicamentos y el polímero en 0,5 mililitros de acetonitrilo, luego transfiera la solución a un matraz de fondo redondo de cinco mililitros para formar una película delgada de polímero distribuido por el medicamento evaporando la solución de aceto del polímero del medicamento a presión reducida utilizando un evaporador rotativo.

A continuación, rehidratar la película de polímero del fármaco con 0,5 mililitros de agua desionizada precalentada a 50 grados centígrados y agitar suavemente el matraz en un baño de agua a 50 grados centígrados para formar las células de los ratones. Agregue la solución a un tubo de centrífuga y centrifuga a 7, 200 veces G durante tres minutos. Extraiga la solución con una aguja y filtre la solución de micela resultante en un nuevo tubo de centrífuga de 1,5 mililitros utilizando un filtro de nailon de 0,2 micras para eliminar cualquier fármaco o contaminante no resuelto. En este punto, realice un análisis de HPLC de fase inversa con una columna C ocho equilibrada a 40 grados centígrados en un modo socrático con una fase móvil de ensayo de acetilo I y diluya con agua las mycells recién preparadas en un ensayo ocular a una proporción de uno a 100 antes del análisis por HPLC de fase inversa para determinar la carga inicial del fármaco.

Después de almacenar mis células sin diluir a temperatura ambiente durante 48 horas, prepare muestras diluidas frescas para volver a evaluarlas mediante HPLC de fase inversa y determinar la estabilidad del fármaco en mis células durante 48 horas. Monitoree los picos DTX y DVR a 227 y 279 nanómetros con tiempos de retención de 1,7 y 5,7 minutos respectivamente. Presentar los datos como la media más o menos la desviación estándar de la carga del fármaco.

A continuación, diluya las células recién preparadas y el agua desionizada en una proporción de uno a 20 para obtener una concentración final de polímero de 1,5 miligramos por mililitro. Transfiera la solución a un veterinario para la medición dinámica de la dispersión de la luz. Mida la intensidad del láser de helio y neón a 173 grados para determinar la dispersión.

Presente los datos como la media, el tamaño promedio Z más o menos la desviación estándar junto con el índice de polidispersidad o PDI de la distribución. Después de preparar el DDM como se ha descrito anteriormente, cargue 2,5 mililitros de las células my en un casete de diálisis de tres mililitros con un límite de peso molecular de 7.000 gramos por mol. Coloque el casete en 2,5 litros de tampón de fosfato de pH 7,4 milimolar durante los siguientes intervalos.

Retire 150 microlitros de la solución y reemplácelos con 150 microlitros de tampón fresco. Cambie el búfer cada tres horas para garantizar las condiciones de sincronización. Analice las muestras utilizando HPLC de fase inversa para determinar la curva de concentración del fármaco.

El ajuste de los datos de liberación del fármaco basado en un modelo de difusión simple con una asociación exponencial monofásica utilizando el software estadístico D-T-X-E-V-R y el DDM mostró una estabilidad similar en el bloque PEG 2000 PLA 1800 o PEG 2000 bloque PLA 2200 durante 48 horas. Todas mis celdas retuvieron el 97% o más de la carga inicial a las 48 horas a temperatura ambiente. Sobre la base de los resultados de dispersión dinámica de la luz, todas mis células mostraron una distribución unimodal con valores de PDI inferiores a 0,2.

Sobre la base de los datos, la liberación de DTX de las mycells individuales y el DDM fue de aproximadamente el 60% durante 48 horas. La liberación de EVR de las células individuales my y DDM fue del 60% y 50% respectivamente. Aquí se presenta el tiempo necesario para la liberación del 50% del fármaco de las células individuales y DDM y los datos de bondad de ajuste.

La bondad del ajuste de la curva para todas mis células, excepto EVR individual, mis células está por encima de 0,950, lo que significa que la suposición de liberación de primer orden es una buena aproximación para explicar la liberación de fármacos de mis células individuales y DDM Una vez dominadas, estas técnicas se pueden realizar de forma rutinaria en una biblioteca de fármacos y polímeros como mis células en cuestión de horas a la semana. Al asistir a este procedimiento, es importante recordar caracterizar completamente las células my antes de acceder al cultivo celular o a los modelos animales que siguen estos procedimientos. Otros sistemas de administración, como el sistema de administración liposomal, también se pueden evaluar o caracterizar para responder a la pregunta sobre el papel del sistema de administración de medicamentos en la eficacia del tratamiento.

Después de ver este video, debería tener una buena comprensión de cómo preparar y caracterizar las células de carga de fármacos antes de evaluarlas en la enfermedad. Estado de interés.