La determinación de Preferencias ultrasónico Vocalización en ratones utilizando una prueba de reproducción de dos elección

El objetivo general de este procedimiento es determinar la vocalización ultrasónica o las preferencias de USV en ratones mediante una prueba de reproducción de dos opciones. Esto se logra grabando primero U SVS de un individuo en vivo. El segundo paso es editar y recortar los archivos de sonido estereofónicos grabados en consecuencia.

A continuación, se calibran los emisores de ultrasonidos y se ajusta el volumen del USV. Usando el atenuador y los amplificadores, el paso final es introducir el mouse en cuestión en la caja de prueba y comenzar a reproducir los dos archivos de sonido simultáneamente. En última instancia, el monitoreo del comportamiento puede revelar si el mouse muestra preferencia por un sonido sobre el otro.

Los emisores USV que hemos desarrollado pueden ayudarnos a responder preguntas clave sobre mis comunicaciones radiales, como las partes, el significado biológico de los diferentes tipos de us frente a los dispositivos existentes como los transductores eléctricos Pazo es que la respuesta de frecuencia no tiene picos de resonancia. La inundación de banda ancha Mississippi en la visión ultrasónica sin distorsiones de armonía permite utilizar el emisor para reproducir un curso de comunicación acústica complicado.

A través de este método se puede proporcionar información sobre la respuesta de las hembras hacia los s bs o los machos. También se puede aplicar a otro tipo de interacción social, como entre la madre y el papá, entre los machos adultos y entre las hembras adultas. Para comenzar a obtener ratones machos con experiencia sexual y ratones hembra vírgenes, realice un seguimiento del ciclo de esra tomando frotis vaginales a diario.

Tiña los frotis con Giza y determina la cara del ciclo de esra de acuerdo con los procedimientos estándar. Para grabar vocalizaciones ultrasónicas o US vs. Conecte un micrófono de condensador ultrasónico a una PC mediante un convertidor de anuncios USB.

Establezca el nivel de ganancia en el convertidor de anuncios a siete datos acústicos de grabación en 16 bits. Formatee archivos con una frecuencia de muestreo de 400 kilohercios utilizando un software de captura de audio para la reproducción de sonido, conecte un convertidor DA a la PC y luego conecte dos amplificadores al convertidor DA a través de un atenuador, repare una pequeña jaula con un agujero en la pared lateral de seis centímetros de diámetro. Cubra el agujero con una malla de alambre de 0,5 centímetros.

Evite el uso de ropa de cama o cualquier otra cosa que pueda producir ruidos de crujido y contaminar la grabación. Coloque el micrófono de ultrasonido al lado del orificio cubierto con malla. Cuando esté listo.

Coloque un ratón macho y una hembra sexualmente madura en la jaula. Grábanos vs. Durante tres a cinco minutos.

La caja de pruebas está dividida en tres compartimentos, una zona neutral y las puertas de las habitaciones A y B. Separa la zona neutra de las demás habitaciones. Las habitaciones A y B tienen cada una un agujero de cuatro centímetros cubierto con una malla de alambre en el extremo.

Coloque el emisor de ultrasonidos contra la malla y rodéelo con placas de goma para evitar fugas de sonido. Coloque sellos de plomo a ambos lados de la pared entre las habitaciones A y B para aislar el sonido y crear los sonidos de reproducción. Capture un segmento 22 de USB del archivo grabado anteriormente.

Con un software de edición de audio digital, seleccione y capture el ruido de fondo de este segmento y cree un archivo de ruido de fondo número 22 repitiendo el segmento de ruido para reproducir los dos archivos de sonido. Expórtelos simultáneamente como un solo archivo de sonido estéreo con un archivo para el oído izquierdo y el otro archivo para el oído derecho. Filtre los archivos de sonido con un filtro de paso alto con un corte de 40 kilohercios.

Reduzca el ruido con la herramienta de reducción de ruido. En el software de posprocesamiento, seleccione y capture un segmento del archivo que no contenga US VS.As el perfil de reducción de ruido y ejecute la reducción de ruido con el nivel 40 para calibrar los niveles de sonido durante la reproducción. Primero coloque el micrófono a 10 centímetros de distancia de los emisores de ultrasonido.

Comience la reproducción y mida el nivel de presión sonora en decibelios. Utilice el atenuador y los amplificadores para ajustar el volumen de las V de EE. UU. Generado por los emisores de ultrasonidos al mismo nivel de presión sonora que el US masculino vs.

Grabado anteriormente. Confirme que los dos emisores de ultrasonidos exhiben el mismo nivel de presión sonora utilizando un sonido de calibración al reproducir un archivo de sonido compuesto por dos flujos de nosotros vs. Ajuste los dos niveles de presión sonora generados al mismo nivel.

Para comenzar la prueba de dos opciones, cierre las puertas de las habitaciones A y B y habitúe al sujeto femenino a la zona neutral. Durante 30 minutos, cubra la caja con una placa acrílica para evitar que se escape. Después de 30 minutos, grabe todo el procedimiento con una cámara de video montada encima de la caja.

Retire la puerta y permita que la hembra explore libremente el resto de la caja de prueba, incluidas las zonas de sonido. Una vez que la hembra haya investigado ambos círculos de malla y haya regresado a la zona neutral, comience a reproducir el archivo de sonido número 22 preparado anteriormente. Monitoree el comportamiento del animal durante cinco a 10 minutos mientras reproduce repetidamente el archivo de sonido.

Cambie la ubicación de los emisores de ultrasonido aleatoriamente para evitar crear un sesgo lateral entre las dos habitaciones. Los ratones hembra no mostraron preferencia entre las salas A y B cuando se les permitió explorar las cámaras antes de la reproducción del sonido. El número de entradas a la habitación fue similar entre las cámaras que contenían ruido de fondo o US vs masculinos.

Sin embargo, los sujetos pasaron una cantidad significativamente mayor de tiempo en la cámara en la que se regeneraron los us vs. Sobre todo en los primeros cinco minutos. La exploración de la zona media no se vio alterada por la reproducción de sonido.

Las hembras pasaron significativamente más tiempo dentro de la zona de sonido y buscando en la malla de alambre de la cámara jugando a los machos US vs. Especialmente en los primeros cinco minutos, tanto B six como bub. Las hembras pasaron más tiempo investigando el lado emparejado con los machos vs de otra cepa.

Después de ver este video, debe tener una buena comprensión de cómo determinar la preferencia de uso de rociado en ratones utilizando una prueba de sabor de dos opciones después de su desarrollo. Esta técnica allanó el camino para que los investigadores en el campo o la investigación de marcas exploraran la interacción humana sólida. El USV debe diferir según la edad, la condición sexual y los antecedentes genéticos.

Siguiendo este procedimiento, se pueden medir los perfiles USB de la masa transgénica para determinar si se alteran los USB de envío y de ahorro.