Name: Un 3D Cultura Modelo sensibles a hormonas de la glándula mamaria humana epitelio (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2016-02-07T14:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 24 s
Description: Descubre un modelo de cultivo 3D del epitelio mamario humano sensible a hormonas para estudiar la morfogénesis epitelial. Este método estandarizado utiliza células T47D y replica condiciones in vivo para investigar terapias contra el cáncer de mama.

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Agradecemos enormemente las contribuciones de redacción por Cheryl Schaeberle. Esta investigación fue apoyada por subvenciones de Avon # 02-2009-093 y 02-2011-095, y NIEHS / NIH ES 08314 a AMS. El contenido es responsabilidad exclusiva de los autores y no representa necesariamente las opiniones oficiales del Instituto Nacional de Ciencias de Salud Ambiental o de los Institutos Nacionales de Salud.

1. Preparación de los reactivos <ol><li> Se disuelve el promegestona sintético progestágeno (R5020) y 17-β-estradiol (E2) en etanol para hacer 10 -3 soluciones madre M. Disolver la prolactina en agua desionizada destilada para hacer una solución stock 1 mg / ml. Disolver el antiestrógeno ICI 182780 en DMSO para preparar una solución de stock 10 -2 M. Almacenar estas soluciones a -20 ° C durante un máximo de 6 meses. </li><li> dextrano carbón (CD) despojado suero y medio CDFBS: <ol><li> Heat-inactivar suero fetal bovino (FBS) en un baño de agua a 57 ° durante 30 min. Nota: Utilice sólo material de vidrio lavado con ácido durante el resto de este protocolo. </li><li> Calcular la cantidad de carbón necesaria. El uso de 10% más de volumen que la cantidad de suero para compensar el desplazamiento causado por el carbón de leña, pesar 5% en peso / vol carbón activo en polvo. </li><li> Lavar carbón dos veces con agua destilada desionizada fría usando el mismo volumen que la cantidad de suero. Para cada lavado centrifuge a 50 xg durante 2 min para sedimentar el carbón vegetal. Eliminar el agua después de cada lavado. Añadir 0,5% peso / vol de dextrano T-70 a la última pastilla de carbón. Vuelva a suspender con agua destilada, desionizada y se centrifuga a 100 xg durante 5 min. Aspirar el agua. </li><li> Añadir el volumen apropiado de suero al sedimento y volver a suspender el sedimento de carbón dextrano en el suero. Incubar, mientras que rueda (6 rpm), a 37 ° C durante 60 minutos. Centrifugar a 2000 xg durante 20 min. Si sobrenadante aparece nublado, repetir la centrifugación; Sin embargo, el suero puede no ser del todo claro en este momento, pero será limpiado durante la filtración. </li><li> Filtrar a través de un filtro de 0,80 micras y luego de nuevo a través de un filtro de 0,45 micrómetros para eliminar las partículas más grandes. Finalmente, filtro de esterilizar con un filtro de 0,20 micras. Tienda filtra CDFBS en tubos de vidrio o T-25 frascos de cultivo a -20 ºC. </li><li> Carbón de leña con dextrano-fetal bovino que contiene los medios de comunicación (medios CDFBS): mezclar 375 ml de fenol DMEM libre de rojo y 125 ml de DMEM/ F-12. Retire 37,5 ml y reemplazarlo con el mismo volumen de suero fetal bovino de carbón dextrano. Añadir 10 6 U / ml de penicilina y L-glutamina a una concentración final de 2 mM. Los medios de comunicación resultante es 75% de DMEM, 25% de DMEM / F-12, 7,5% de dextrano con carbón vegetal-FBS, 2 mM de L-glutamina, y 10 6 U / ml de penicilina. </li></ol></li><li> Preparar 10X PBS, NaOH 1 N y agua desionizada destilada. Preparar suficiente volumen de cada uno de acuerdo con el volumen de solución de colágeno sea necesario. Esterilizar todas las soluciones de filtrado. Almacenar el 10x PBS y agua destilada desionizada estéril a 4 ° C por hasta 1 mes. No almacene la solución de NaOH 1N. </li><li> Preparar la solución de colágeno a una 1 mg / ml de concentración final de acuerdo con el protocolo para el &quot;Procedimiento de gelificación alternativo para el colágeno I, de cola de rata&quot; proporcionado por el fabricante. Cada gel se hace de 1,5 ml de solución de colágeno. Por ejemplo, preparar 18,5 ml (0,5 ml para dar cuenta de la pérdida durante el pipeteado) de solución de colágeno para preparar12 geles. Utilice la solución de colágeno inmediatamente o mantener en hielo durante un máximo de 2-3 horas. </li><li> Carmín alumbre tinte: <ol><li> Combinar 1 g Carmine y 2,5 g de sulfato de aluminio y potasio en 500 ml de agua destilada. Hervir mientras se agita durante 20 min. Observe cuidadosamente para evitar una ebullición más. Ajustar el volumen final de nuevo a 500 ml con agua destilada adicional. </li><li> Añadir un cristal de timol para la actividad antimicrobiana y cubrir botella con papel de aluminio para protegerlo de la luz. Filtrar a través de un filtro de papel de grado de laboratorio antes de cada uso. Reutilizar la solución de carmín para un máximo de tres meses. Almacenar a temperatura ambiente, protegido de la luz. </li></ol></li><li> solución de colagenasa: disolver la colagenasa en medio DMEM / F12 en una concentración de 0,125% w / v. No guarde esta solución. </li></ol> 2. Cultura 3D de T47D células en la cola de la rata colágeno tipo 1 Geles y Tratamiento Hormonal Nota: mantener las pipetas serológicas estériles y puntas de pipeta a 4 ° C. <ol><li> AEEre una suspensión de una sola célula y realizar un recuento de células. cultivos de células T47D de división antes de que alcancen el 70% de confluencia. Se centrifuga el volumen que contiene la cantidad de células necesarias. Tenga en cuenta que un gel debe contener aproximadamente 75.000 células T47D. </li><li> Usando una pipeta de frío, vuelva a suspender el sedimento celular en el volumen apropiado de colágeno. Tenga en cuenta que cada gel se compone de 1,5 ml de colágeno. Mezclar las células y el colágeno suavemente para evitar la introducción de burbujas. </li><li> Para evitar el efecto de la electricidad estática en la distribución de células, cepillo de la frontera, la parte superior e inferior de la placa de 12 pocillos con un cepillo de reducción estática después de abrir el plato. Para evitar la acumulación de carga estática durante el contacto con la superficie de trabajo de la campana, colocar esta placa en la parte superior de la otra placa de 12 pocillos (placa en blanco) que también ha sido aplicado con brocha con la brush.Gently reductores estática, verter 1,5 ml de la mezcla en cada pocillo de la placa de 12 pocillos. </li><li> Colocar la placa en una incubadora a 37 ° C durante 30 minutos. Retire THe placa de la incubadora y colocarlo de nuevo en la campana. </li><li> Utilizando una punta estéril p200, separar cuidadosamente el gel en un suave movimiento circular de la frontera del pozo. El gel también se debe separar de la parte inferior del pozo. </li><li> Diluir hormonas en los medios de comunicación CDFBS que se añaden a los pocillos. Use E2 y R5020 a una concentración final 10 -10 M y prolactina en un en 10 -7 M concentración final. Como control, utilizar medios CDFBS sin hormonas, pero que todavía contiene el mayor volumen de DMSO iguales a las reservas de hormonas utilizadas. Asegúrese de que cada pocillo contiene 1,5 ml de medio. Coloque las culturas 3D dentro de una 37 ° C, 5% de CO 2, el 100% tejido humedad cultura incubadora. Mantener los cultivos durante 1 o 2 semanas, el cambio de los medios de comunicación cada 2 días. </li></ol> 3. Tratamiento Gel para toda Monturas <ol><li> Retire los medios de cultivo y añadir 1,5 ml de PBS a cada pocillo. </li><li> Transferir el gel a una diapositiva. Cortar el gel en un medio utilizando una curvacuchilla quirúrgica d. Continuar con el procesamiento con una mitad y guardar la otra mitad para el análisis histológico. </li><li> Transferir el gel de la mitad de todo el montaje a una diapositiva. Deje secar gel durante 5 minutos y luego transferir la diapositiva a una jarra de Coplin que contiene un 10% de formalina. Nota: todas las incubaciones deben realizarse a temperatura ambiente. </li><li> Fijar geles en una jarra Coplin en un agitador O / N. </li><li> Lavar los portaobjetos dos veces con PBS durante 10 min cada uno en agitador. Transferencia desliza a 70% EtOH; incubar durante 1 hr en un agitador. transferencia de diapositivas a Carmine Alum O / N. </li><li> El día siguiente, deshidratar diapositivas en un agitador en 70% de EtOH, 95% de EtOH y 100% de EtOH durante 1 hora cada uno. Transferencia desliza a xileno dos veces durante 1 hora cada uno y mantener en un agitador. Utilice medio de montaje a base de tolueno para montar los geles y 1,5 mm de espesor cubreobjetos. </li><li> Examine su conjunto se monta bajo luz normal (microscopio o estereoscopio). Para un análisis más detallado de la forma y el lumen utilizar microscopía confocal y visualizar colorante carmín con 633 nm láser de He-Ne. </li></ol>4. Tratamiento Gel para transformación para el análisis Histología <ol><li> Transferir el medio restante de la gel a un vial de vidrio de 20 ml que contiene 10% de formalina y fijar en un agitador O / N. </li><li> Lavar geles dos veces con PBS durante 10 min cada uno en agitador. Coloque los geles en casetes de procesamiento para la inclusión en parafina. </li><li> geles de transferencia de hasta 70% de EtOH, se incuban durante 1 hora y siguen con EtOH al 95% durante 1 hora, cambian al fresco EtOH al 95% durante 1 hora, EtOH al 100% durante 1 hora, y cambian a fresca EtOH al 100% durante 1 hora. En este punto, los geles se pueden almacenar en 100% de EtOH O / N a temperatura ambiente o se incubaron con xileno durante 1 hr y luego de nuevo en xileno fresco para 1 hr. </li><li> casetes de transferencia de parafina durante 1 hora a 60 ° C en una incubadora de vacío, repetir con parafina fresca dos veces más. </li><li> Rellenar los moldes de plástico con parafina limpia. Abra el casete, retire el gel y lo coloca en el molde que contiene parafina plástico. Llenar el depósito de parafina y añadir la parte superior de casete que contiene la etiqueta en la parte superior y dejar que el bloque frío. </li><li> Retire el plastic molde y la sección del bloque utilizando un microtomo. Obtener secciones de 5 um de espesor para la tinción HE e inmunocitoquímica. </li></ol> 5. La extracción de células a partir de células a partir de geles Uso de tratamiento con colagenasa <ol><li> Eliminar gel del pozo y la transfiere a una placa de Petri que contiene PBS. Enjuague el gel brevemente. </li><li> Transferir el gel a un tubo de 15 ml que contiene 2 ml de 0,125% de colagenasa. Pipetear arriba y abajo 4-5 veces con el fin de romper el gel en trozos pequeños. </li><li> Incubar a 37 ° C durante 25 min (hasta que el gel se haya disuelto y las células están en suspensión) </li><li> Añadir 2 ml de medio de cultivo suplementado con suero. Recoger las células por centrifugación (1.000 xg, 5 min), el sobrenadante de descarte, volver a suspender las células y contar. </li></ol>

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<li>Martinson, H. A., Jindal, S., Durand-Rougely, C., Borges, V. F., Schedin, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Wound+healing-like+immune+program+facilitates+postpartum+mammary+gland+involution+and+tumor+progression%5BTitle%5D)+AND+%22Int.J.Cancer%22%5BJournal%5D)">Wound healing-like immune program facilitates postpartum mammary gland involution and tumor progression.</a> Int.J.Cancer. , (2014).</li>
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</ol>

Los autores no tienen nada que revelar.

Aquí, describimos un modelo de cultivo 3D sensible a las hormonas para probar la acción de las hormonas en el epitelio mamario. La respuesta a las hormonas se puede evaluar a nivel de morfología tisular, proliferación celular y expresión génica 12. Una limitación de esta técnica es que la visualización durante el período de cultivo está restringida a la microscopía óptica, ya que los cultivos se cultivan en una placa inferior de plástico. El sistema de cultivo 3D podría adaptarse a placas de fondo de vidrio pa...

A diferencia de los cultivos 2D estándar, modelos sustitutos de cultivo de células 3D permiten el estudio del comportamiento de las células epiteliales en un contexto fisiológicamente relevante, uno parecido a un tejido. culturas 3D de la glándula mamaria han ayudado a aclarar muchos aspectos del desarrollo de la glándula mamaria y la neoplasia. Sin embargo, la mayoría de los modelos de cultivo 3D disponibles actualmente no son adecuados para estudiar la acción hormonal porque las líneas de células epiteliales humanos utilizados para la tarea carecen de expresión del receptor de la hormona 6,7,9. En este documento, se describe un modelo de cultivo 3D del epitelio de mama humano que es adecuado para estudiar la acción hormonal 12. Este modelo usa la línea disponible en el mercado sensible a hormonas humana epiteliales de mama celular, T47D 3,11,13, que se deriva originalmente de un derrame pleural obtenida de un paciente femenino de 54 años con un carcinoma ductal infiltrante de la mama. Utilizamos rata colágeno de cola de tipo 1 como una matriz. Este culto 3Dmodelo ure es apropiado para el estudio de la acción de las tres hormonas mammotropic principales (estradiol, promegestona (un análogo de progesterona), y prolactina) en células epiteliales de mama humanos. La morfología del epitelio inducida por la hormona se puede evaluar cuantitativamente a través del tiempo mediante análisis morfométricos 12. Una densidad de siembra apropiada permite a estos cultivos en 3D que se le mantenga durante 2 semanas. Por este tiempo, el desarrollo de estructuras es suficiente para una evaluación cuantitativa robusta de la acción hormonal en la morfología epitelial. Los geles también se pueden cosechar en puntos de tiempo anteriores para la proliferación celular y los análisis de la expresión génica. Además, este modelo es adecuado para probar los efectos de un tratamiento hormonal secuencial; por ejemplo, después del tratamiento con estradiol durante la primera semana y el reemplazo con otra hormona / combinación de hormonas durante la siguiente semana. El efecto de los compuestos y antiestrógenos estrogénicos, tales como ICI 182780, también se puede Stumurió el uso de este modelo de cultivo 3D 12.

<table><tbody><tr><td>Placas de cultivo de tejidos de 12 pocillos (Falcon)</td><td>Fisher Scientific</td><td>08-772-29</td><td></td></tr><tr><td>Tubos cónicos de poliestireno de 15 ml</td><td>Fisher Scientific</td><td>14-959-49D</td><td></td></tr><tr><td>Carbón activado</td><td>Sigma</td><td>C-5510</td><td></td></tr><tr><td>Carmín Alumbre</td><td>Sigma</td><td>C1022-100G</td><td></td></tr><tr><td>Colagenasa, Tipo 3</td><td>Worthington</td><td>S0C11784</td><td></td></tr><tr><td>Microscopio confocal</td><td>Zeiss</td><td>LSM510</td><td>Equipado con láser HeNe 633nm</td></tr><tr><td>Dextran T-70</td><td>Abersham/Pharmacia</td><td>17-0280-01</td><td></td></tr><tr><td>DMEM/F-12, HEPES, sin rojo fenol&nbsp;</td><td>Life Technologies</td><td>11339-021</td><td>Medios sin rojo de fenol para uso hormonal</td></tr><tr><td>DMEM, glucosa baja, piruvato, sin glutamina, sin rojo de fenol</td><td>Life Technologies</td><td>11054-020</td><td>Medios sin rojo de fenol para uso hormonal</td></tr><tr><td>17-&beta;-estradiol</td><td>EMD Millipore</td><td>3301</td><td>disuelto en etanol</td></tr><tr><td>etanol</td><td>Koptec</td><td>V1001</td><td></td></tr><tr><td>Hiclón</td> de<td>suero bovino fetal</td><td>SH30070.03</td><td>Para su uso con hormonas, debe ser Carbón Vegetal Dextrano despojado&nbsp;</td></tr><tr><td>Filtros (115 ml)</td><td>Nalgene</td><td>380-0080, 245-0045, 120-0020</td><td>0,88, 0,45, 0,20 micras, respectivamente&nbsp;</td></tr><tr><td>Formalina, 10%</td><td>Fisher Scientific</td><td>SF93-20</td><td></td></tr><tr><td>L-glutamina (200 mM)</td><td>Life Technologies</td><td>25030-081</td><td></td></tr><tr><td>ICI 182,780 (fulvestrant)</td><td>Sigma Aldrich</td><td>I4409-25MG</td><td>disuelto en DMSO</td></tr><tr><td>Microtomo&nbsp;</td><td>Leica</td><td>RM2155</td><td></td></tr><tr><td>Medios de inclusión de tejidos</td><td>McCormick Scientific</td><td>39502004</td><td></td></tr><tr><td>Penicilina</td><td>Sigma</td><td>7794-10MU</td><td>Disuelto en 10 ml de agua destilada desionizada</td></tr><tr><td>Permount</td><td>Fisher Scientific</td><td>SP15-500</td><td></td></tr><tr><td>Solución salina tamponada con fosfato pH 7.4</td><td>Sigma Aldrich</td><td>P3813-10PAK</td><td></td></tr><tr><td>Prolactina</td><td>Sigma Aldrich</td><td>L4021-50UG</td><td>Disuelto en agua destilada desionizada</td></tr><tr><td>Promegestone</td><td>Perkin Elmer</td><td>NLP004005MG</td><td>Disuelto en etanol</td></tr><tr><td>Colágeno de cola de rata&nbsp;</td><td>Corning&nbsp;</td><td>354236</td><td>Los lotes pueden contener diferentes concentraciones, tenga en cuenta en consecuencia</td></tr><tr><td>Bisturí</td><td>Miltex</td><td>4311</td><td></td></tr><tr><td>Procesador de tejidos de sobremesa</td><td>semicerrado Leica</td><td>TP1020</td><td></td></tr><tr><td>Hidróxido de sodio</td><td>Sigma Aldrich</td><td>S5881</td><td>Prepare 1N NaOH stock</td></tr><tr><td>StaticMaster Cepillo antiestático&nbsp;</td><td>Pipetas</td> serológicas Amstat <td>C3500</td><td></td></tr><tr><td>Stripette&nbsp;</td><td>Corning&nbsp;</td><td>4101</td><td></td></tr><tr><td>Frascos T-25</td><td>Corning&nbsp;</td><td></td><td></td>430168</tr><tr><td>Casetes de Pañuelos</td><td>Fisher Scientific</td><td>15-200-403E</td><td></td></tr><tr><td>Wheaton Viales, Vidrio, 20 ml</td><td>Fisher Scientific</td><td>03-341-25D&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>Xileno&nbsp;</td><td>VWR</td><td>95057-822</td><td></td></tr></tbody></table>

un 3d cultura modelo sensibles a hormonas de la glándula mamaria humana epitelio

A Hormone-responsive 3D Culture Model of the Human Mammary Gland Epithelium

El proceso de morfogénesis epitelial mamaria está influenciado por las hormonas. El estudio de la acción hormonal sobre el epitelio mamario mediante cultivos 2D se limita a la proliferación celular y a los criterios de valoración de la expresión génica. Sin embargo, en el organismo, la morfogénesis mamaria ocurre en un entorno 3D. Los sistemas de cultivo 3D ayudan a cerrar la brecha entre el cultivo celular monocapa (2D) y la complejidad del organismo. En este trabajo describimos un modelo de cultivo en 3D del epitelio mamario humano que es adecuado para estudiar la acción de las hormonas. Utiliza la línea celular epitelial de mama humana sensible a las hormonas disponible comercialmente, T47D, y colágeno de cola de rata tipo 1 como matriz. Este modelo de cultivo 3D responde a las principales hormonas mamotrópicas: estradiol, progestinas y prolactina. La influencia de estas hormonas en la morfogénesis epitelial se puede observar después de 1 o 2 semanas de tratamiento según el criterio de valoración. Los cultivos 3D se pueden recolectar para el análisis de la morfogénesis epitelial, la proliferación celular y la expresión génica.

La Figura 1 resume el procedimiento para la preparación de las culturas 3D sensibles a las hormonas. estructuras epiteliales se observan en preparaciones completas de los geles se cultivaron durante 2 semanas en presencia de E2 solo y en combinación con otras hormonas. Sólo las células individuales o grupos de 2-3 células están presentes cuando se añaden ninguna hormona al medio de cultivo (medio CDFBS) (Figura 2). Esta condición sirve como un control negativo. <p class="jove_conten...

Describimos un modelo de cultivo en 3D del epitelio mamario humano que es adecuado para estudiar la acción de las hormonas.

Un 3D Cultura Modelo sensibles a hormonas de la glándula mamaria humana epitelio

The process of mammary epithelial morphogenesis is influenced by hormones. The study of hormone action on the breast epithelium using 2D cultures is ...

El objetivo general de este método de cultivo 3D fisiológicamente relevante es evaluar la acción de las principales hormonas mammogénicas sobre la morfogénesis epitelial mamaria. Este método puede ayudar a responder preguntas clave en los campos de la endocrinología y la biología de la glándula mamaria, como por ejemplo cómo influyen el estrógeno, la progesterona y la prolactina en la morfogénesis epitelial mamaria. La principal ventaja de este método estandarizado es que las células epiteliales mamarias sensibles a las hormonas forman estructuras tridimensionales en respuesta a las hormonas, de manera similar a lo observado in vivo.Las implicaciones de esta técnica se extienden hacia las terapias contra el cáncer de mama, ya que es un sistema de cultivo fisiológicamente relevante del complejo epitelio mamario humano. Tuvimos por primera vez la idea de este método porque observamos la falta de modelos estandarizados in vitro para estudiar cómo las hormonas influyen en la morfogénesis mamaria humana. Comience contando el número de células en una suspensión de células individuales de células T47D.La forma en que se mantienen las células es fundamental para conservar los fenotipos res

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Un método simple se describe para analizar los efectos de los fibroblastos del tejido en las células epiteliales asociados. La combinación de este método y tridimensional cultivo de tejidos puede facilitar el análisis de las células después del aislamiento de 3D. La técnica es aplicable a las células de diferentes potencial maligno, permitiendo el estudio sistemático de los efectos de estroma asociado al tumor en las células tumorales.

Aislamiento de células epiteliales mamarias de tridimensional mixto de células Esferoide Co-cultura

En los métodos de cultivo estándar se toman células de su entorno fisiológico y se hicieron crecer en la superficie de plástico de un plato. Para estudiar el comportamiento de las células de médula ósea humana primaria hemos creado un sistema de cultivo de 3-D, donde las células se cultivan en condiciones que recapitulan el microambiente nativo del tejido.

Un tejido tridimensional Cultura modelo para estudiar primaria médula ósea humana y sus malignidades

Cultivo tridimensional de células epiteliales mamarias sobre una membrana basal reconstituida es un método útil para recapitular la arquitectura in vivo de la benigna de la mama, y para diferenciar el fenotipo maligno de la fenotipo benigna de la mama. Es importante destacar que este sistema se puede aplicar para estudiar los carcinomas invasivos en otros tejidos.

Tres Culturas dimensionales: una herramienta para estudiar normal Acinar Arquitectura vs transformación maligna de las células de la mama

Hemos desarrollado un nuevo modelo ex vivo para estudiar la acción de la hormona en el pecho humano. Se basa en microestructuras de tejido aisladas a partir de muestras de tejido de mama quirúrgicos que conservan la arquitectura del tejido, las interacciones intercelulares, y la señalización paracrina.

Una<em&gt; Ex vivo</em&gt; Modelo para estudiar la acción hormonal en el pecho humano

El protocolo de inmunofluorescencia indirecta descrito en este artículo permite la detección y la localización de las proteínas en la glándula mamaria del ratón. Un método completo se da para preparar muestras de glándula mamaria, para llevar a cabo la inmunohistoquímica, a la imagen las secciones de tejido mediante microscopía de fluorescencia, y para reconstruir imágenes.

Inmunofluorescencia indirecta en secciones congeladas de ratón Glándula Mamaria

Este manuscrito describe una técnica basada en litografía suave para diseñar matrices uniformes de tres dimensiones (3D) los tejidos epiteliales de la geometría definida rodeadas por matriz extracelular. Este método es susceptible de una amplia variedad de tipos de células y contextos experimentales y permite la selección de alto rendimiento de repeticiones idénticas.

Ingeniería tridimensionales epiteliales tejidos embebidos dentro de la matriz extracelular

Describimos técnicas para la inducción de diferenciación de dos líneas epiteliales mamarias, HC11 y EpH4. Mientras que ambos requieren suero de ternero fetal, insulina y prolactina para producir proteínas de la leche, las células EpH4 pueden diferenciarse completamente en mamesferas en cultivo tridimensional. Estos modelos complementarios son útiles para estudios de transducción de señales de diferenciación y neoplasia.

Diferenciación de células epiteliales de mama de ratón HC11 y EpH4

La glándula mamaria es una estructura bicapa, que comprende células epiteliales mioepiteliales externas e internas. Presentado es un protocolo para preparar organoides utilizando la trippsinización diferencial. Este método eficiente permite a los investigadores manipular por separado estos dos tipos de células para explorar preguntas sobre sus funciones en la forma y función de la glándula mamaria.

Generación de organoides mamarios de mosaico por trippsinización diferencial

El presente protocolo describe la creación de cultivos 3D "en la parte superior " de una línea celular epitelial de mama no transformada, MCF10A, que se ha modificado para estudiar la transformación inducida por el factor activador plaquetario (PAF). La inmunofluorescencia se ha utilizado para evaluar la transformación y se discute en detalle.

Transformación inducida por mediadores fosfolípidos en cultivos tridimensionales

Este protocolo discute un enfoque para generar organoides epiteliales a partir de tejido mamario primario normal y tumoral a través de centrifugación diferencial. Además, se incluyen instrucciones para el cultivo tridimensional, así como imágenes inmunofluorescentes de organoides incrustados.

Generación y obtención de imágenes de organoides epiteliales humanos y de ratón a partir de tejido mamario normal y tumoral sin pasar

Este protocolo describe un método definido basado en hidrogel para generar organoides mamarios humanos que recapitulan características clave de la morfogénesis mamaria en un sistema de cultivo tridimensional controlado.

Un método definido basado en hidrogel para generar organoides mamarios humanos tridimensionales que recapitulan la morfogénesis mamaria

Descubre un modelo de cultivo 3D del epitelio mamario humano sensible a hormonas para estudiar la morfogénesis epitelial. Este método estandarizado utiliza células T47D y replica condiciones in vivo para investigar terapias contra el cáncer de mama.

Un 3D Cultura Modelo sensibles a hormonas de la glándula mamaria humana epitelio

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