Un protocolo de estrés leve crónico impredecible para los síntomas depresivos, instigar cambios de comportamiento y los resultados de salud negativos en los roedores

El objetivo general del siguiente experimento es exponer una cepa de roedores a una serie de factores estresantes crónicos e impredecibles que se determinan aleatoriamente, de modo que el animal no puede compensar eficazmente la creciente gravedad de los síntomas depresivos que se desarrollan. Esto se logra mediante la exposición diaria a uno de una lista de posibles estímulos que están diseñados para ser estresantes pero no dañinos o perjudiciales para el animal. Los animales se exponen a los factores estresantes de cinco a seis días a la semana durante ocho semanas a intervalos regulares, los animales se monitorean para detectar el desarrollo de síntomas depresivos mediante la evaluación del estado del código y las respuestas de los animales para imponer estímulos, como una prueba de rociado de sacarosa.

Los resultados muestran que la imposición de factores estresantes crónicos, aleatorios e irresolubles al entorno del animal impide la capacidad de adaptación del animal y provoca el desarrollo de síntomas depresivos en el transcurso de varias semanas. Este método puede ayudar a responder preguntas clave en el campo de las enfermedades crónicas, como cómo los síntomas depresivos crónicos pueden provocar resultados negativos para la salud en otros sistemas de tejidos u órganos. La primera vez que tuvimos la idea de utilizar este método fue cuando nos enteramos de las profundas relaciones comórbidas entre la enfermedad cardiovascular avanzada y el riesgo de enfermedad en nuestras poblaciones clínicas, y también de la presentación concurrente de enfermedades depresivas profundas.

Los estudiantes de doctorado de nuestros laboratorios serán los Sres. Steven Brooks y Kayla Brannon, estudiantes de doctorado de nuestros laboratorios. Con el fin de producir ratones domésticos con estrés leve en jaulas separadas y exponer a los ratones a uno o dos factores estresantes por día durante un mínimo de tres a cuatro horas para cada factor estresante, la siguiente lista de factores estresantes debe realizarse en un horario aleatorio para el factor estresante de la cama húmeda. Humedece la ropa de cama vertiendo de 10 a 20 onzas de agua limpia en una jaula estándar.

Mantenga al ratón en la jaula húmeda durante tres o cuatro horas. Retire la ropa de cama de la jaula durante tres o cuatro horas, después de lo cual el ratón pasa a otro factor estresante que requiera una jaula vacía, o colóquelo en una jaula limpia con ropa de cama fresca. Incline las jaulas libres de ropa de cama a aproximadamente 45 grados durante tres o cuatro horas usando un objeto resistente que permanezca en su lugar mientras el ratón se mueve en la jaula. Para este factor estresante, altere los ciclos normales de luz de 12 horas y 12 horas de oscuridad en sucesiones de períodos de 30 minutos, que duren un total de ocho horas.

Transfiera al ratón de su jaula de origen a la jaula de un ratón vecino que haya sido retirado durante el período de estrés de tres horas. Retire la ropa de cama de la jaula y agregue agua a una profundidad de aproximadamente 0.25 pulgadas para ratones, y deje al ratón durante aproximadamente cuatro horas. Brevemente, seque el ratón con una toalla suave al final de la exposición al agua.

Exponga a los ratones a los depredadores, olores o sonidos agregando mechones distribuidos al azar o de 10 a 20 mililitros de orina de una especie de depredador natural en la jaula, y deje al ratón durante tres o cuatro horas. Alternativamente, reproduzca gruñidos o ruidos depredadores de las especies depredadoras naturales ENC cerca de las jaulas durante tres horas al final de cada período de estrés diario. Coloque a los ratones en jaulas limpias y devuélvalos al alojamiento todos los días.

Inspeccione cada animal para detectar el desarrollo de heridas o llagas que puedan requerir tratamiento veterinario una vez a la semana, tenga dos investigadores capacitados para evaluar el código de acicalamiento. Inspeccione a cada animal y asigne una puntuación de código semanal en una escala de cero a uno. Agregue una puntuación individual asignando puntuaciones individuales de cero que significan limpio o uno que significa sucio a cada una de las ocho regiones del cuerpo.

La cabeza, el cuello, el pelaje dorsal, el pelaje ventral, la cola, las cuatro extremidades, las extremidades posteriores y la región genital. Coloque al animal en una jaula limpia forrada con una almohadilla de algodón o una toalla para evitar que la ropa de cama se adhiera a su pelaje. A continuación, rocíe una solución de sacarosa al 10% en la cabeza y el pelaje dorsal de cada animal y registre el comportamiento total de acicalamiento durante cinco minutos.

Mida la latencia y la frecuencia de la actividad de aseo facial durante este tiempo. La latencia es la cantidad de tiempo entre la primera pulverización y el inicio del aseo facial, y la frecuencia debe medirse como el número de veces que se cepilla el rostro. Después de ocho semanas de estrés crónico leve impredecible, hubo alteraciones significativas en los resultados conductuales y fisiológicos en roedores con estrés crónico en relación con sus cepas de control no estresadas.

Los ratones desarrollaron síntomas depresivos después de un estrés crónico leve impredecible y mostraron una disminución progresiva en las puntuaciones de aseo del pelaje. Esta marcada degradación en el estado físico del pelaje sugiere una disminución de la actividad de aseo y puede ser paralela a una falta de motivación. La evidencia reciente ha sugerido que existe una divergencia cuantitativa sustancial en las respuestas al estrés crónico leve impredecible entre ratones machos y hembras.

Específicamente, los datos sugieren que los ratones hembra expuestos al mismo protocolo de estrés que los machos de la misma edad desarrollan respuestas conductuales más severas al protocolo que los machos. Después de este procedimiento, se pueden realizar fácilmente otros métodos que sean apropiados para la función específica del órgano con el fin de responder preguntas adicionales como cómo la presencia de síntomas depresivos crónicos puede afectar la función normal en el sistema de órganos de interés. Después de ver este video, debe tener una buena comprensión de cómo utilizar los diferentes pasos y procedimientos del protocolo UCMS para crear progresivamente las condiciones de crecimiento de los síntomas depresivos en su modelo de roedor.