Un protocolo de estrés leve crónico impredecible para los síntomas depresivos, instigar cambios de comportamiento y los resultados de salud negativos en los roedores

El objetivo general del siguiente experimento consiste en exponer una cepa de roedor a una serie de estresores crónicos e impredecibles que se determinan al azar, de modo que el animal no pueda compensar eficazmente la aparición de síntomas depresivos cada vez más graves. Esto se logra mediante la exposición diaria a uno de varios estímulos posibles, diseñados para provocar estrés sin causar daño ni lesiones al animal. Los animales se exponen a los estresores cinco o seis días por semana durante ocho semanas a intervalos regulares, y se monitorean para detectar el desarrollo de síntomas depresivos mediante la evaluación del estado de código y las respuestas de los animales a estímulos impuestos, como una prueba de rociado de sacarosa.

Los resultados muestran que la imposición de estresores crónicos aleatorios e irresolubles en el entorno del animal impide la capacidad del animal para adaptarse y provoca el desarrollo de síntomas depresivos durante varias semanas. Este método puede ayudar a responder preguntas clave en el campo de las enfermedades crónicas, como la forma en que los síntomas depresivos crónicos pueden provocar resultados negativos para la salud en otros tejidos o sistemas orgánicos. Tuvimos por primera vez la idea de utilizar este método cuando conocimos las profundas relaciones comórbidas entre enfermedades cardiovasculares avanzadas y el riesgo de enfermedad en nuestras poblaciones clínicas, así como la presentación simultánea de enfermedades depresivas severas.

El procedimiento será demostrado por el Sr. Steven Brooks y la Sra. Kayla Brannon, estudiantes de doctorado de nuestros laboratorios. Con el fin de inducir un estrés leve, mantenga a los ratones domésticos en jaulas separadas y expóngalos a uno o dos factores de estrés por día durante un mínimo de tres a cuatro horas para cada factor de estrés; la siguiente lista de factores de estrés debe realizarse según un horario aleatorizado. Para el estrés por cama empapada, humedezca la cama vertiendo de 10 a 20 onzas de agua limpia en una jaula estándar.

Mantenga al ratón en la jaula húmeda durante tres o cuatro horas. Retire el lecho de la jaula durante tres o cuatro horas, tras lo cual transfiera al ratón a otro estresor que requiera una jaula vacía, o colóquelo en una jaula limpia con lecho fresco. Incline las jaulas sin lecho aproximadamente 45 grados durante tres o cuatro horas utilizando un objeto resistente que permanezca en su lugar mientras el ratón se mueve dentro de la jaula. Para este estresor, modifique los ciclos normales de 12 horas de luz y 12 horas de oscuridad, convirtiéndolos en sucesiones de periodos de 30 minutos, con una duración total de ocho horas.

Transfiera el ratón desde su jaula de origen a la jaula de un ratón vecino que ha sido retirado para el período de estrés de tres horas. Retire el lecho de la jaula y agregue agua hasta una profundidad de aproximadamente 0,25 pulgadas para los ratones, y deje al ratón durante aproximadamente cuatro horas. Al final de la exposición al agua, séquelo brevemente con una toalla suave.

Someta a los ratones a olores o sonidos de depredadores agregando mechones distribuidos al azar o de 10 a 20 mililitros de orina de una especie de depredador natural en la jaula, y deje al ratón durante tres o cuatro horas. Alternativamente, reproduzca sonidos de gruñidos u otros ruidos depredadores de especies de depredadores naturales cerca de las jaulas durante tres horas al final de cada período diario de estrés. Coloque a los ratones en jaulas limpias y devuélvalos diariamente al centro de alojamiento.

Inspeccione cada animal una vez por semana en busca del desarrollo de heridas o llagas que puedan requerir tratamiento veterinario, y cuente con dos investigadores capacitados en la evaluación del aseo codificado. Inspeccione cada animal y asigne una puntuación semanal de código en una escala de cero a uno. Sume cada puntuación individual asignando puntuaciones individuales de cero, que significa limpio, o uno, que significa sucio, a cada una de las ocho regiones corporales.

La cabeza, el cuello, el pelaje dorsal, el pelaje ventral, la cola, las cuatro extremidades, las extremidades traseras y la región genital. Coloque al animal en una jaula limpia forrada con una almohadilla de algodón o una toalla para evitar que el material de enriquecimiento se adhiera a su pelaje. Luego, rocíe una solución de sacarosa al 10 % sobre la cabeza y el pelaje dorsal de cada animal y registre el comportamiento total de aseo durante cinco minutos.

Mida la latencia y la frecuencia de la actividad de aseo facial durante este período. La latencia es el tiempo transcurrido entre la primera pulverización y el inicio del aseo facial, y la frecuencia debe medirse como el número de veces que se realiza el aseo del rostro. Tras ocho semanas de estrés leve crónico impredecible, se observaron alteraciones significativas tanto en los resultados conductuales como fisiológicos en roedores sometidos a estrés crónico en comparación con sus cepas control no estresadas.

Los ratones desarrollaron síntomas similares a la depresión tras un estrés crónico leve impredecible y mostraron una disminución progresiva en las puntuaciones de aseo del pelaje. Esta marcada degradación en el estado físico del pelaje sugiere una actividad de aseo reducida y podría paralelarse con una falta de motivación. Evidencia reciente ha sugerido que existe una divergencia cuantitativa considerable en las respuestas al estrés crónico leve impredecible entre ratones macho y hembra.

En concreto, los datos indican que las ratones hembra expuestas al mismo protocolo de estrés que machos de edad comparable desarrollan respuestas conductuales más severas al protocolo que los machos. Tras este procedimiento, se pueden realizar fácilmente otros métodos adecuados para la función específica de un órgano con el fin de responder preguntas adicionales, como cómo la presencia de síntomas depresivos crónicos puede afectar el funcionamiento normal en el sistema orgánico de interés. Después de ver este video, debería tener una buena comprensión de cómo utilizar los diferentes pasos y procedimientos del protocolo UCMS para crear progresivamente las condiciones de síntomas depresivos crecientes en su modelo roedor.