Una alternativa sencilla para inyección estereotáctica para el Cerebro Derribo específico de miARN

Aquí demostramos el uso de un péptido penetrante celular con un oligonucleótido antisentido modificado para derribar específicamente el micro ARN en el cerebro de ratones. Esto se logró diseñando un antigo contra el 29 de mayo. En este estudio, hemos utilizado machos antigo para dirigirse a las modificaciones de los ácidos nucleicos que bloquean los microARN

Es decir, las modificaciones del LNA se incorporaron en cinco posiciones diferentes. En este sentido, la incorporación de modificaciones del LNA aumenta su afinidad de unión al micro ARN. Además, proporciona resistencia al núcleo y, por lo tanto, mejora la eficiencia de la orientación de los microARN.

Los complejos del ANTIGO MAR con el péptido se prepararon in vitro y se inyectaron en los ratones a través de la vena de la cola. La eliminación del microARN dio lugar a cambios de comportamiento que sugieren la participación de este microARN en la ataxia: tres inyecciones consecutivas fueron suficientes para inducir un cambio notable en la marcha después del tratamiento, se recolectó tejido cerebral y se confirmó la eliminación del microARN. Los CPPs o péptidos autopenetrantes han surgido recientemente como portadores atractivos para la administración de ácidos nucleicos.

Aquí hemos utilizado uno de estos péptidos neurotrópicos ricos en arginina que puede sufrir una complejación basada en la carga con el LNA, que al administrarse en la circulación sistémica, alcanzará su sitio objetivo designado, que en este caso son las células neuronales y asegurará la liberación adecuada del LNA en estas células. Las secuencias de los miembros de la familia ME 29 se recuperaron de la mease, y el antisentido 16 MER se sintetizó con modificaciones de ácido nucleico de bloqueo en cinco posiciones espaciadas uniformemente para preparar complejos. Las soluciones de péptido y antígono de concentraciones apropiadas se prepararon por separado en glucosa estéril al 10%.

En condiciones asépticas. La solución de Antigo se añadió lentamente gota a gota a la solución peptídica con una agitación suave. La adición lenta y la agitación suave son críticas para la formación de complejos monodispersos cuyo tamaño está en la escala tric

El antigo se añadió en tres partes iguales cada vez, permitiendo un minuto para mezclar, seguido de un minuto de incubación sin mezclar. La adición rápida puede conducir a la agregación de los complejos y a la precipitación. El complejo Antigo ya está listo para la inyección.

El complejo se administró a través de una inyección en la vena de la cola. Los ratones fueron devueltos a la misma jaula. Los ensayos conductuales para la ataxia se llevaron a cabo diariamente, tres horas después de la inyección.

El ratón estaba sujeto por la cola, lo que no le permitía tocar ningún objeto circundante. Fíjate en la forma en que las extremidades traseras se extienden durante 10 segundos. En la prueba de la cornisa, se requirió que los ratones caminaran a lo largo de la delgada repisa de la jaula.

Los ratones caminan por un canal delgado, dejando huellas con las patas entintadas en una tira de papel grueso y absorbente, tinta solo las patas traseras. Para evitar datos confusos De cuatro extremidades, veamos El efecto del tratamiento antigo. Aislamos el cerebro y otros tejidos de los ratones tratados y controlados.

Descubrimos que el péptido R VG entregaba un siRNA marcado con fluorescencia específicamente al cerebro, pero no a otros tejidos como el hígado. Un péptido de control no neurotrópico, RVM, entregó el siRNA al hígado. Los ratones tratados con ANTIER 29 mostraron defectos en las extremidades traseras.

Los ratones controlados tratados con un anme revuelto podían sortear la cornisa, pero después del tratamiento con anme contra MARE 29, los ratones mostraron defectos leves en este ensayo. En el ensayo de la huella, hubo un acortamiento sorprendente de la longitud del paso en los ratones tratados. Además, confirmamos a través de QR tpcr que los niveles de 29 A y 29 B se regularon a la baja para el desarrollo de terapias basadas en micro NNA.

La administración específica del cerebro de antimicroARN es un desafío debido a la barrera hematoencefálica. Usando la técnica presentada aquí, podemos evitar el método convencional de administración de anti microARN al cerebro. Este método hace que la eliminación de microARN sea técnicamente factible y aumenta la especificidad del tejido.