Estudios electrotaxis de pulmón células de cáncer utilizando un Multicanal Dual-campo eléctrico chip de microfluidos

El objetivo general de este experimento microfluídico es evaluar los efectos de los inhibidores de la quinasa en la migración de las células tumorales bajo un campo eléctrico directo. Por lo tanto, este método puede ayudar a responder preguntas clave en los estudios de electro Texas, como cuáles son las vías determinantes en la migración guiada por campo eléctrico de las células cancerosas. Por lo tanto, la principal ventaja de esta técnica es que es un estudio electro Texas altamente reproducible y que ahorra tiempo y se puede implementar fácilmente.

Las implicaciones de esta técnica se extienden hacia el diagnóstico de la potencia metastásica del cáncer. Como la movilidad de las células cancerosas magnéticas puede ser mejorada por un campo eléctrico. Por lo tanto, este método puede proporcionar la información privilegiada y electrotesticular de las células tumorales.

También se puede aplicar a los procesos de regeneración de la piel, como la cicatrización de heridas. Comience usando un programa de dibujo y diseño para dibujar un patrón de capa acrílica individual. Guarde el patrón y, a continuación, encienda el trazador láser.

Conecte el trazador a la computadora portátil controladora y haga clic en el archivo de patrón diseñado para abrir el patrón de capa acrílica. A continuación, coloque un trozo de lámina acrílica en blanco en la etapa x, Y, Z del trazador láser y utilice el palo de alineación automática del trazador láser correspondiente. Para establecer el enfoque del rayo láser en la superficie de la hoja.

Envíe el patrón diseñado al trazador láser para el mecanizado directo de la lámina acrílica. A continuación, utilice pinzas para retirar el papel protector de las láminas acrílicas y limpie las superficies con gas nitrógeno. Ahora apile las láminas y únalas bajo una presión de dos kilogramos por centímetro cuadrado en un adhesivo térmico durante 45 minutos a 110 grados Celsius para formar el conjunto del canal de estimulación eléctrica de flujo.

Después de preparar la cinta adhesiva de doble cara de la misma manera, pegue con cinta adhesiva el vidrio de cubierta limpio al conjunto del canal de estimulación eléctrica de flujo. Luego, use superpegamento para adherir 13 piezas de adaptadores acrílicos a las aberturas individuales en la capa uno del conjunto de chip de MDF o campo eléctrico dual multicanal para configurar la red de puente de sal de chip MDF. Comience conectando los tubos de plástico del piso al conjunto de chip MDF a través de los adaptadores de entrada y salida del medio.

A continuación, conecte el cono de señuelo de los tubos de plástico de entrada y salida del medio al tope de tres vías Cox Una jeringa de tres mililitros que contiene 2,5 mililitros de PBS equilibrado con dióxido de carbono a la llave de paso de tres vías del tubo de plástico de entrada y una jeringa vacía de tres mililitros a la llave de paso de tres vías del tubo de plástico de salida. Use tuercas blancas sólidas apretadas con los dedos para sellar las aberturas de los adaptadores azul y verde en la hoja acrílica de la capa uno. A continuación, llene los canales del puente salino y las cámaras de cultivo con el PBS equilibrado en dióxido de carbono, teniendo cuidado de evitar burbujas.

Transfiera el chip a una incubadora de cultivo celular de dióxido de carbono al 5% a 37 grados Celsius durante la noche para permitir que el aire disuelto en la cinta adhesiva de doble cara forme burbujas dentro de las cámaras a la mañana siguiente. Use las dos jeringas para generar un flujo rápido de PBS para eliminar las burbujas, bombeando el PBS de un lado a otro según sea necesario. Cuando se hayan eliminado todas las burbujas, use la llave de paso de tres vías conectada al tubo de salida medio para drenar el PBS de los canales.

A continuación, sustituya la jeringa conectada a la entrada por una jeringa de tres mililitros que contenga 2,5 mililitros de dióxido de carbono un DM EM equivalente y vuelva a llenar las cámaras con el medio cuando las cámaras estén llenas. Retire las tuercas sólidas de los adaptadores verdes e inyecte 3%aros calentados a al menos 70 grados centígrados en el canal del puente de sal. A través de las aberturas de los adaptadores, el A caliente prepara el puente de sal para la inyección, asegurando el bloqueo de la fila mediana entre las cámaras de cultivo.

Deje de inyectar los agros cuando el compuesto llene tres cuartas partes de la longitud del canal del puente salino y vuelva a sellar los poros con las nueces sólidas. Ahora reemplace las tuercas sólidas de los adaptadores azules con tuercas tubulares translúcidas apretadas con los dedos y cargue aros en las tuercas tubulares. A continuación, incruste electrodos de plata, cloruro de plata en las tuercas tubulares antes de que el aro se solidifique.

Para establecer un experimento electrotáctico, inyecte 0,3 mililitros de células en el chip MDF a través del tubo de salida y devuelva el chip a la incubadora de cultivo celular. Después de dos a cuatro horas, instale el sistema microfluídico MDF en un calentador de vidrio transparente de óxido de indio y estaño y conecte un termopar tipo K entre el chip MDF y el vidrio de óxido de indio y estaño. Para medir la temperatura del chip, utilice un controlador derivado integral proporcional para ajustar la temperatura de incubación del sistema microfluídico de MDF a 37 grados Celsius y monte el conjunto del chip MDF con control de temperatura en la platina motorizada XYZ controlada por computadora de un microscopio invertido.

Luego, usando una bomba de jeringa de cuatro canales, dispense el medio completo en las cámaras de cultivo a través de las entradas a un caudal de 20 microlitros por hora. Recogida de los residuos de cultivo de las salidas en tubos de espoleta microcéntricos. Incuba las células a 37 grados centígrados durante otras 16 a 18 horas.

Al día siguiente, reemplace el medio en cada cámara con medio fresco suplementado con la concentración adecuada de inhibidor de quinasas durante 60 minutos de tratamiento. A continuación, conecte una fuente de alimentación de CC al chip MDF a través de los electrodos de plata, cloruro de plata y en serie. Conecte un amperímetro al circuito eléctrico para monitorear la corriente eléctrica en el chip MDF.

Finalmente, encienda la fuente de alimentación y ajuste el voltaje entre 15 y 19 voltios. Para ajustar la corriente del amperímetro a 86,94 microamperios. En este experimento representativo del sistema microfluídico MDF, células de cáncer de pulmón tratadas con varias concentraciones del inhibidor de la quinasa.

Y 2 7 6 3 2 no mostraron cambios en la velocidad de migración celular con o sin estimulación eléctrica. Sin embargo, el tratamiento con Y 2 7 6 3 2 bajo la adición de un campo eléctrico redujo significativamente la migración náutica de las células cancerosas. De hecho, a una concentración de 50 micromolares, el inhibidor de rocas eliminó por completo el movimiento náutico de las células sin afectar su velocidad de migración.

Además, hubo una correlación dependiente de la dosis entre las concentraciones químicas aplicadas y el índice de dirección, lo que confirma la fiabilidad y eficiencia del sistema microfluídico MDF como método para estudiar el axxis. Una vez dominada, esta técnica puede completarse en siete u ocho horas si se realiza correctamente después de su desarrollo. Esta técnica lleva a los investigadores en el campo de la electro Texas a explotar con golpes en la piel.

No olvide que trabajar con un raspador láser puede ser extremadamente peligroso y que siempre se deben tomar precauciones al realizar este procedimiento.