Cortina Columna de flujo: optimización de la eficiencia y sensibilidad

El objetivo general de este método es mejorar la eficiencia y la sensibilidad de una separación a través de la optimización de una columna de flujo de cortina. Este método puede ayudar a responder preguntas clave en el campo de las ciencias ambientales, la medicina forense y en áreas que requieren el análisis de muestras traza, donde se requiere una técnica de separación eficiente y altamente sensible. La principal ventaja de esta técnica es que aumenta la eficiencia de una separación y la sensibilidad del análisis en comparación con los métodos convencionales de separación por HPLC.

Este método puede proporcionar un medio para aumentar la potencia de separación y, por lo tanto, acelerar la capacidad, de una manera económica y eficiente en el tiempo. La columna de flujo de cortina es un concepto nuevo para los profesionales de HPLC, sin embargo, su uso no es complicado. Simplemente requiere la optimización de las relaciones de flujo adecuadas.

Primero, prepare botellas de agua 100 por ciento ultrapura y 100 de metanol para las fases móviles A y B del instrumento de HPLC. Purgue las bombas según los requisitos del fabricante. Después de la purga, desconecte la línea de la bomba de la válvula inyectora del muestreador automático.

Conecte una pieza en T a la línea desconectada. A cada puerto de la pieza T, fije un tubo de 0,13 milímetros de diámetro interno y 15 centímetros de largo. Conecte un tubo de la pieza T a la válvula inyectora del muestreador automático.

Finalmente, configure la bomba a un caudal de un mililitro por minuto. Tara dos recipientes de recolección vacíos y etiquétalos como centrales y periféricos. Durante 60 segundos, utilice el recipiente marcado centralmente para recoger la fase móvil saliente de la línea que sale del inyector.

Vuelva a pesar el recipiente central y determine la masa de la fase móvil recolectada. Repita este proceso recogiendo el flujo a través del puerto periférico con el recipiente etiquetado con periféricos. Determine el porcentaje de flujo, o mililitros por minuto, de cada línea utilizando las ecuaciones indicadas.

El puerto central debe ser de aproximadamente el 40 por ciento y el puerto periférico de aproximadamente el 60 por ciento. Si los valores difieren en más del dos por ciento, cambie la longitud o el diámetro de la tubería para ajustar la relación de flujo. A continuación, repita los pasos de recopilación y cálculo.

A continuación, apague el flujo de la bomba y conecte la línea del inyector al puerto central de la entrada de la columna. Conecte también la línea de la pieza T al puerto periférico de la entrada de la columna. Aumente lentamente el caudal a un mililitro por minuto de fase 100 por ciento móvil B.To termine de ajustar el sistema, fluya 100 por ciento de metanol a un mililitro por minuto durante 10 minutos para equilibrar la columna.

Para comenzar, use un tubo para conectar el puerto de salida central al detector UV-Vis. Conecte el mismo tipo y longitud de tubo al puerto de salida periférico de la columna CF. Luego, ajuste la bomba a un caudal de un mililitro por minuto.

Tara dos recipientes de recogida vacíos y de nuevo etiqueta, uno para la recogida central y otro para la periférica. Durante 60 segundos, utilice el recipiente etiquetado centralmente para recoger la fase móvil saliente del detector UV-Vis. Vuelva a pesar el recipiente de recolección para determinar la masa de solución exudada.

Repita este proceso con el puerto de salida periférico y el recipiente de recolección etiquetado. Ahora determine el caudal porcentual de cada línea como se realizó anteriormente con el caudal de entrada. La línea UV-Vis debe ser del 21 por ciento y el flujo de salida periférico debe ser del 79 por ciento.

Si la relación de flujo se desvía significativamente, ajuste el tamaño de la tubería conectada a la salida del detector UV-Vis para alterar el porcentaje de flujo central. Es importante que las relaciones de flujo entre el central y el periférico en la entrada y la salida de la columna sigan este protocolo para garantizar un rendimiento óptimo de la columna de flujo de cortina. Las columnas de tecnología de flujo activo se desarrollaron utilizando un diseño de frita especializado en los accesorios de extremo de columna multipuerto para superar la heterogeneidad del lecho de columna y mejorar el rendimiento de separación.

Se analizó una mezcla de prueba que contenía fenotol, butilbenceno y pentilbenceno en columnas convencionales de 4,6 y 2,1 milímetros de diámetro interno, y una columna de flujo de cortina de diámetro interno de 4,6 milímetros. La separación de la mezcla ilustra el rendimiento mejorado en términos de eficiencia y sensibilidad de una columna de flujo de cortina en relación con las columnas estándar. El uso de una columna de flujo de cortina aumentó la señal de butilbenceno a pesar de la reducción del volumen máximo.

Una vez dominada, esta técnica se puede configurar en menos de media hora si se realiza correctamente. La configuración de la columna de flujo de cortina se puede reutilizar una y otra vez, pero las relaciones de flujo deben verificarse de forma rutinaria. Al intentar este procedimiento, es importante recordar estar lo más cerca posible de las relaciones de flujo prescritas.

La columna de flujo de cortina ha allanado el camino para que los investigadores en el campo de la HPLC superen los límites de las columnas y los instrumentos UPLC para obtener un análisis de muestras más rápido sin comprometer el rendimiento de la separación. Después de ver este video, debe comprender la importancia de las columnas de flujo de cortina, ya que pueden proporcionar una mejor separación que las columnas de HPLC convencionales.