Leche Colección de la rata utilizando tubos capilares y Estimación del contenido de grasa de la leche por Creamatocrit

El objetivo general de este procedimiento es describir cómo recolectar manualmente la leche de una rata lactante para el análisis de laboratorio de la composición de la leche. Este método se puede utilizar para ayudar a responder preguntas clave en el campo de la salud materna e infantil, como la forma en que la dieta materna puede influir en la composición de la leche. La principal ventaja de esta técnica es que puede ser realizada por un solo investigador sin ningún equipo especializado de vacío o succión.

No.To comenzar, separe a la madre de sus crías durante un mínimo de cinco minutos antes del ordeño. A continuación, recoja todos los materiales necesarios para el procedimiento de ordeño como se muestra aquí. A continuación, coloque una almohadilla absorbente sobre una mesa quirúrgica con calefacción o utilice una almohadilla térmica separada para evitar la pérdida de calor de la presa durante el procedimiento de ordeño.

A continuación, revise el sistema anestésico para asegurarse de que el sistema tenga suficiente oxígeno e iso flúor antes del procedimiento. A continuación, coloque la mascarilla que se utilizará para la inducción inicial de la anestesia a la máquina y coloque la mascarilla de mantenimiento cerca. Abra el tanque de oxígeno y ajuste el flujo a un litro por minuto.

Luego encienda el flujo de isde flúor y ajuste su flujo al 5%Una vez anestesiado, cambie la presa a la máscara de mantenimiento. Confirme un nivel suficiente de anestesia comprobando la ausencia de un reflejo pedal. A continuación, coloque el dique en posición supina sobre la almohadilla absorbente del banco.

Reduzca el flujo de isof flúor a un dos a 3%Monitoree continuamente la presa durante todo el procedimiento y ajuste el flujo de isof flúor según sea necesario para evitar el dolor y la depresión respiratoria. A continuación, utilice una toallita estéril con alcohol o una almohadilla limpiadora para desinfectar un vial de oxitocina con una jeringa de un mililitro equipada con una aguja de calibre 25, extraiga 0,1 mililitros de oxitocina. A continuación, inserte la aguja en el cuadrante inferior derecho del abdomen de la madre con la aguja apuntando hacia la cabeza en un ángulo de 15 a 30 grados, unos 0,5 centímetros de profundidad.

Tire hacia atrás del émbolo para asegurar una presión negativa antes de la inyección. Si no se aspira líquido, inyecte la oxitocina y deseche la aguja y la jeringa inmediatamente en un recipiente de riesgo biológico. Espere aproximadamente de cinco a 15 minutos para que la oxitocina estimule la leche.

Baja durante este tiempo, elige los tets de los que se recogerá la leche. Utilice recortadores para eliminar suavemente el pelaje alrededor de los cordones seleccionados, ya que el pelaje puede causar dificultades en la recolección de muestras. A continuación, limpie los tets con agua tibia.

Prepare al menos dos sitios, ya que es posible que se requiera más de un sitio para la recolección de leche. Una vez que la leche haya bajado, exprima suavemente la base del Tet para expulsar la leche manualmente. Para su recolección, recoja las gotas de leche en un tubo capilar de 50 microlitros.

Una vez lleno, dispense la leche del tubo capilar a un tubo de microcentrífuga estéril tocando el extremo del tubo que se utilizó para extraer la leche del pezón al lado del tubo de microcentrífuga. Luego use una aguja de calibre 18 conectada a una jeringa de un mililitro para soplar cualquier leche que no haya entrado en el tubo. Repita la recolección de leche y transfiérala al tubo de microcentrífuga hasta que se haya recolectado suficiente leche.

Para el análisis elegido, trate de limitar el tiempo total que la presa está bajo anestesia a menos de una hora. Cuando finalice el ordeño, corte el flujo de flúor y oxígeno y retire la máscara de la presa. Continúe monitoreando la madre hasta que haya recuperado la conciencia suficiente para mantener la decúbito esternal.

Si no se requieren más análisis, agite la leche a menos 80 grados. Para prepararse para la medición de CCR, cargue de 15 a 20 microlitros de leche en un tubo de microhematocrito directamente desde el Tet. Luego selle el extremo del tubo con un sellador de arcilla.

Coloque el tubo capilar en el girador de hematocrito con la abolladura del sello apuntando hacia el exterior y asegúrese de que la centrífuga esté equilibrada. A continuación, gire la muestra a 13.700 veces G durante dos minutos. Una vez que la muestra termine de girar, retire el tubo de la centrífuga.

Observe la separación de la muestra en una capa de crema y una capa transparente. Mida y registre la longitud total del líquido en el tubo y la longitud de la capa de grasa o crema con una regla o calibradores. Utilice esta información para calcular el CCR como se describe en el protocolo de texto adjunto para determinar cómo la dieta durante el embarazo y la lactancia afecta la composición de la leche.

Las muestras de leche se recolectaron al destete de madres de Worcester que se alimentan con un alto contenido de proteínas, una alta fibra prebiótica o una dieta controlada. La leche recolectada de las madres con una dieta alta en fibra prebiótica tuvo el hematocrito de C numéricamente más alto, mala concentración y valor energético. Sin embargo, estas diferencias no fueron estadísticamente significativas cuando se trata de proteínas.

Sin embargo, la leche recolectada de las madres con una dieta alta en proteínas tuvo la mayor concentración de proteína. Aunque, de nuevo, esta diferencia no fue estadísticamente significativa. Una vez dominada, esta técnica se puede realizar en menos de una hora desde el punto inicial de anestesia de la presa si se hace correctamente.

Al intentar este procedimiento, es importante recordar monitorear continuamente el dique para asegurarse de que no se produzca una depresión de la respiración mientras se está bajo anestesia después de este procedimiento. Otros métodos, como la espectrometría de masas, pueden utilizarse para responder a preguntas adicionales, como la determinación de la composición de oligosacáridos de la leche. Después de ver este video, debe tener una buena comprensión de cómo realizar la recolección manual de leche de una rata lactante.