Un enfoque semi-automatizado de preparación de cócteles de anticuerpos para el Análisis Inmunofenotípicos de la sangre periférica humana

El objetivo general de este protocolo de preparación de cócteles de anticuerpos con tinción semiautomatizada es establecer un método de inmunofenotipado fiable para minimizar la variabilidad de la dispensación de reactivos. Este método puede ayudar a abordar cuestiones clave en el campo de la inmunomonitorización, tales como: cómo controlar la variabilidad intra e interexperimental de la dispensación de reactivos. La principal ventaja de esta técnica es que la automatización de la preparación del cóctel aumenta la precisión del pipeteo, al tiempo que reduce los errores de la preparación manual del cóctel. La demostradora del procedimiento estará a cargo de Iliana González, técnica de mi laboratorio. Antes de comenzar el procedimiento, aplique etiquetas legibles por humanos a los tubos de códigos de barras 2D. A continuación, transfiera todo el contenido de cada vial de anticuerpo a los tubos de código de barras 2D correspondientes adecuados, teniendo cuidado de evitar burbujas. Cuando se hayan transferido los anticuerpos, utilice el lector de códigos de barras 2D para leer los tubos. A continuación, cree una hoja de cálculo que contenga los nombres de los anticuerpos y las lecturas del código de barras, y guarde la hoja de cálculo como un archivo de valores separados por comas. Ahora, inicie el lector de códigos de barras 2D y luego el manipulador de líquidos automatizado. Para cebar las jeringas del manipulador de líquidos automatizado, en Instrumento, seleccione Inicio de todos los ejes.Confirme que ninguna de las jeringas contenga burbujas de aire visibles. Cuando las jeringas estén cebadas, abra los métodos para hacer el cóctel base y el cóctel de activación en el software automatizado de manipulación de líquidos. A continuación, coloque los tubos de microfuga en la rejilla de tubos pequeña para los tubos de microfuga para el cóctel base y el cóctel de activación, de acuerdo con el número de cócteles base y de activación a realizar. Utilice el esquema de configuración del instrumento como referencia para colocar los bastidores de tubos en la plataforma. Coloque el depósito tampón en la sección apropiada de la plataforma y use un destaponador de tapón de rosca de ocho canales para destapar los tubos de códigos de barras 2D que contienen los anticuerpos. Para evitar la contaminación cruzada, coloque cada tapa en una bandeja de retención de tapas a medida que se retiran, para mantener las tapas en el orden adecuado. A continuación, coloque las puntas de filtro P50 LLS, las puntas de filtro P200 LLS, las puntas P1000 y la gradilla de tubos Matrix de 1 ml en la plataforma en sus posiciones adecuadas. Haga clic en el icono de inicio para iniciar el método. Cuando aparezca la ventana emergente, confirme que todos los elementos de la plataforma coincidan con el esquema de configuración del instrumento para el método. Si todo está en posición, haga clic en Aceptar. El manipulador de líquidos automatizado transferirá el tampón del depósito a los tubos de microfuga. El rack de tubos Matrix de 1 ml pasará al lector de códigos de barras 2D y se leerán los códigos de barras. Cuando se hayan leído todos los códigos de barras, haga clic en Aceptar en la ventana emergente para comenzar la transferencia de anticuerpos. Una vez finalizada la transferencia, use el destaponador de tapón de rosca de ocho canales para volver a tapar los tubos de código de barras 2D y devuelva los tubos a 4