Name: Un enfoque semi-automatizado de preparación de cócteles de anticuerpos para el Análisis Inmunofenotípicos de la sangre periférica humana (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2016-02-08T15:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 17 s
Description: Aprende un método semi-automatizado para preparar cócteles de anticuerpos destinados al análisis inmunofenotípico de sangre periférica humana. Esta técnica mejora la precisión de la pipeteación y reduce los errores de preparación manual.

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Agradecemos a Hannah Puzas por su ayuda con el diseño y la configuración del sistema, y a Kevin Khovananth por su asesoramiento técnico. Los fondos para este trabajo fueron proporcionados por The Hearst Foundations y Providence Portland Medical Foundation.

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YK, ILG, TLM, WLM, DPH, y KSB: intereses financieros en competencia. ANT es un empleado de Beckman Coulter, Inc. La publicación de este artículo de vídeo está patrocinado por Beckman Coulter, Inc.

Fenotipo inmune de sangre periférica es de importancia crítica para la promoción de conocimientos sobre las respuestas individuales a la inmunoterapia. El desafío consiste en la normalización de ensayo para el control de experimento a experimento 1,14 variabilidad. Una fuente principal de variabilidad reside en la manipulación humana de las muestras. Por lo tanto, es concebible que la automatización parcial o total de procesamiento de la muestra facilitará una dramática reducción en la variabilidad 1,14-experimento a experimento. En este protocolo, nos informan de nuestro esfuerzo exitoso para reducir al mínimo la variabilidad del ensayo mediante la introducción de un manipulador de líquidos automatizado equipado con lector de código de barras 2D para la tinción de muestras de sangre en todo el inmunofenotipo. En el diseño, la aplicación de este método es muy versátil y puede supervisar otros subconjuntos inmunes adicionales mediante la adición de &quot;cócteles Base&quot; para definirlos. Tales subconjuntos incluyen células T auxiliares, células reguladoras T, células B, células NK, células dendríticas, y monocitos (manuscrito enpreparación) 18. Hemos adaptado paneles de anticuerpos recomendados por el consorcio mediante la introducción de marcadores adicionales 1. Las poblaciones celulares se identificaron utilizando &quot;Cocktail Base&quot; conjugado con fluorocromos con emisiones mínima en el brillante violeta 421 (BV421), ficoeritrina (PE), y aloficocianina (APC) detectores, ya que queríamos reservar estos canales para la detección de antígenos inducibles. Esta característica no sólo asegura la más alta sensibilidad para monitorizar el estado de activación de las células inmunes sino que también permite un alojamiento flexible de nuevos marcadores de activación como estos tres fluorocromos están más frecuentemente conjugarse con anticuerpos contra marcadores inducibles. Por lo tanto, nuestro método no sólo es adecuado para la preparación de cócteles para toda inmunofenotipo de sangre, pero también es útil para la tinción de otras muestras, incluyendo las células mononucleares de sangre periférica y células recuperadas a partir de tejidos desglosados ​​(por ejemplo, tumor). introducción exitosaproducción de nuestro método requiere una atención especial a los pasos en la preparación de material de laboratorio, y la programación y la ejecución del método. Preparación de los tubos de códigos de barras 2D incluye etiquetado con etiquetas legible por humanos y la transferencia de los anticuerpos a los tubos designados. Para evitar la introducción de errores, se recomienda hacer esto con dos personas. Siempre que el cambio de hojas de cálculo, los investigadores deben verificar si el método funciona correctamente. La elección de los métodos de pipeteo adecuadas durante la programación asegura la transferencia de líquido éxito. LLS permite pipeteo sin que los desechos se precipitó desde el fondo de los tubos de anticuerpos, para los que usamos ya sea P50 o P200 puntas conductoras. LLS puede no ser una buena opción para las extremidades P1000 como LLS es más sensible con puntas P1000 y, a veces falsamente provocada por la presencia de burbujas. Heights en la definición de material de laboratorio deben ajustarse para cada instrumento podría ocurrir la transferencia de líquido como subóptima, por ejemplo, si no hay suficiente espacio entre el borde de las puntasy la parte inferior de los tubos. Como se muestra en la Figura 12, si el &quot;Cocktail Base&quot; y / o &quot;Cóctel de activación&quot; No se agitaron bien, esto puede resultar en manchas subóptima. Pensamos sobre el uso de los reactivos liofilizados para la tinción de células como un enfoque alternativo para reducir la variabilidad relacionada con la dispensación de reactivo 19. Sin embargo, se conocen conjugados poliméricos de tintes violetas brillantes para interactuar unas con otras señales no específicas que causan. Como tal, la adición de más de dos conjugados poliméricos (por ejemplo, BV421 y BV650, etc.) en los reactivos liofilizados pueden causar la señalización no específica (por ejemplo, aumento de la señal de fondo BV650 en BV421 + población) 20. Por otra parte, los reactivos liofilizados carecen de flexibilidad para la inclusión de nuevas manchas. Por lo general son más caros y requieren una orden a granel. Por estas razones, se optó por utilizar el manipulador de líquidos automatizado equipado con los tubos de códigos de barras 2D. A pesar de que tcopos de tiempo para configurar y conlleva una inversión inicial para comprar el instrumento, a la larga, serán compensados ​​por factores tales por el aumento de la productividad y la reproducibilidad de los ensayos. De hecho, algunos grupos se informó anteriormente la integración exitosa del manipulador de líquidos automatizado en su flujo de trabajo de immunophenotyping o aplicaciones similares 21,22. soluciones automatizadas para el análisis de citometría de flujo también están disponibles a partir de fuentes comerciales (FACS SPA III, Cóctel de preparación automática de estaciones de trabajo, y FlowStainer). Esto indica además que hay una gran necesidad para la preparación de cócteles automatizado para determinar el inmunofenotipo. Después de dominar esta técnica, prevemos que el desarrollo de totalmente automatizado immunophenotyping sangre entera reducirá aún más la variabilidad del experimento a experimento y podría hacer que toda la sangre immunophenotyping factible, incluso en un entorno de 23 ensayo clínico multicéntrico. Ya hemos comenzado a utilizar un Lyse erah asistente para automatizar los pasos de lisis y lavado. también Prevemos que la determinación automatizada del volumen de anticuerpo en los tubos de códigos de barras 2D y el seguimiento de dispensación de reactivo mejorará en gran medida el inventario de anticuerpos y el control de calidad de nuestro método, respectivamente.

Fenotipo inmune de la sangre periférica humana determina los cambios cuantitativos y cualitativos en subconjuntos de células inmunes 1. Proporciona información sobre los mecanismos de acción y resistencia, el descubrimiento de biomarcadores predictivos ayudas, y facilita el desarrollo de inmunoterapias combinación. Por lo tanto, la validación y estandarización de immunophenotyping es un área de gran interés para los investigadores académicos, laboratorios clínicos, y las industrias. Aunque inmunofenotipo de sangre periférica mediante métodos de citometría de flujo se utiliza actualmente para la gestión clínica de los tumores malignos hematológicos 2,3 y virus de la inmunodeficiencia humana (VIH), 4,5 inmunofenotipo fiable de la sangre periférica para las demandas de inmunoterapia consideraciones específicas en la validación y estandarización porque requiere una cobertura más amplia sobre subconjuntos de células inmunes y / receptores inhibidores de activación 1,6-8. succeimmunophenotyping ssful requiere la estandarización cuidadosa para minimizar la variabilidad-experimento a experimento relacionado con la configuración del instrumento y el procedimiento de tinción de células 9,10. Mientras que la normalización de los ajustes del instrumento para citometría de flujo está bien establecido para hacer frente a la antigua preocupación 9,11,12, no queda claro cómo minimizar la variabilidad relacionada con la tinción de células sin restringir la cobertura de subconjuntos de células inmunes y su estado de activación. Como el número de antígenos a detectar aumenta, también lo hace la posibilidad de error y la variabilidad debido a la dispensación de reactivo subóptima y la contaminación cruzada. Métodos para el análisis phenoptypic de sangre entera anticoagulada se establecieron en la década de 1980 para su uso en ensayos de laboratorio clínico. Estos mismos métodos satisfacen las necesidades de los laboratorios de investigación para la preparación de la muestra. Es importante destacar que los cócteles de anticuerpos utilizados en el laboratorio clínico son típicamente menos complejo y available pre-tituló y se pre-mezclado del fabricante. Sólo se requiere una única transferencia de la mezcla de anticuerpos pre-mezclado. En el marco de la investigación, los cócteles de anticuerpos de 10-16 anticuerpos son típicos. Cada cóctel debe ser validado por la estabilidad por el laboratorio o preparado fresco antes de cada ensayo. Preparación de múltiples mezclas de anticuerpos para una muestra podría comportar el pipeteo de 50-80 anticuerpos individuales, una tarea que es tedioso y propenso a errores. La automatización de la preparación de cócteles tiene varias ventajas sobre la preparación de cócteles manual, tal como menos errores, mayor precisión de pipeteo, y posiblemente incluso la disminución del desperdicio de reactivo. Aquí, se presenta la introducción exitosa de un manipulador de líquidos automatizado equipado con un (2D) lector de código de barras de dos dimensiones en el proceso de tinción celular de immunophenotyping para minimizar la variabilidad relacionada con la preparación de la muestra.

<table><tbody><tr><td>BD LSRFortessa</td><td>BD Biosciences</td><td>Citómetro</td>de <td></td> flujo</tr><tr><td>NXp Span-8 Estación de trabajo de automatización de laboratorio&nbsp;</td><td>Beckman Coulter</td><td>A31839</td><td>Estación de trabajo de automatización de laboratorio&nbsp;</td></tr><tr><td>Inserto, Tubo, 11 mm, Blanco, para Tubos de Microfuga de 1,5 ml (caja de 25)</td><td>Beckman Coulter</td><td>373696</td><td>Accesorio para Rack de Tubos de 24 Posiciones para alojar tubos de Microfuga.&nbsp;</td></tr><tr><td>Kit LLS</td><td>Beckman Coulter</td><td>719262</td><td>Fije la parte inferior de la plataforma en la estación de trabajo de automatización de laboratorio para permitir la detección del nivel de líquido</td></tr><tr><td>Rack de tubos de 24 posiciones</td><td>Beckman Coulter</td><td>373661</td><td>Rack de tubos para sujetar tubos de microfuga para cócteles de anticuerpos o sangre</td></tr><tr><td>BOLSAS DE AUTOCLAVE BIOHAZARD 12 x 24 PULGADAS RED</td><td>LabMart</td><td></td><td>M111416 Bolsas de autoclave desechables para la estación</td></tr> <tr><td>de trabajo de automatización de laboratorioVisionMate Lector de códigos de barras 2D de alta velocidad</td><td>Thermo Scientific</td><td>AB-1850</td><td>Lector de códigos de barras 2D</td></tr><tr><td>Taponador/destaponador de tapón de rosca de mano de 8 canales</td><td>Thermo Scientific</td><td>4105MAT</td><td>Para destapar y taponar tubos de códigos de barras 2D&nbsp;</td></tr><tr><td>Tubos de microcentrífuga</td><td>Fisher Scientific</td><td>02-681-335</td><td>Para la elaboración de cócteles o el suministro de muestras de sangre a la estación de trabajo de automatización de laboratorio</td></tr><tr><td>CoolRack XT CFT24</td><td>biocision</td><td>BCS-534</td><td>Para sujetar tubos de muestra.</td></tr><tr><td>Tubos de ámbar Matrix ScrewTop de 1,0 ml en bastidores de cierre</td><td>Thermo Scientific</td><td>3741AMB</td><td>Tubos de código de barras 2D para almacenar anticuerpos cojugados con colorante fluorescente</td></tr><tr><td>Biomek Span-8 P1000 Puntas, conductoras, preestériles con barrera, 1.025 y micro; l</td><td>Beckman Coulter</td><td>987925</td><td>consejos para la estación de trabajo de automatización de laboratorio&nbsp;</td></tr><tr><td>Biomek Span-8 P50 Puntas, Conductoras, Preestériles con Barrera, 50 &micro; l (Caja de 10 bastidores)</td><td>Beckman Coulter</td><td>B01091</td><td>Consejos para la estación de trabajo de automatización de laboratorio&nbsp;</td></tr><tr><td>Puntas Biomek Span-8 P250, conductoras, preestériles con barrera (caja de 10 racks)</td><td>Beckman Coulter</td><td>394627</td><td>Puntas para estación de trabajo de automatización de laboratorio&nbsp;</td></tr><tr><td>BD FACS Solución de lisis 10x concentrado</td><td>BD Biosciences</td><td>349202</td><td>lisis de RBC</td></tr><tr><td>Falcon Tubos de poliestireno de fondo redondo</td><td>Fisher Scientific</td><td>14-959-5 Tubos de</td><td>muestra</td></tr><tr><td>Anti-CD45 FITC BD</td><td>Biosciences</td><td>347463</td><td>Efector Panel de células T (base)</td></tr><tr><td>Anti-CD3 Alexa Fluor 700</td><td>eBioscience</td><td>56-0038-42</td><td>Panel de células T efectoras (base)</td></tr><tr><td>Anti-CD4 PerCPCy5.5</td><td>BD Biosciences</td><td>341654</td><td>Panel de células T efectoras (base)</td></tr><tr><td>Anti-TCRgd BV650</td><td>BD Biosciences</td><td>564156</td><td>Panel de células T efectoras (base)</td></tr><tr><td>Anti-TCRab BV786</td><td>BD Biosciences</td><td>563825</td><td>Panel de células T efectoras (base)</td></tr><tr><td>Anti-CD8 APC-H7</td><td>BD Biosciences</td><td>560179</td><td>Panel de células T efectoras (base)</td></tr><tr><td>Anti-CCR7 PE-CF594</td><td>BD Biosciences</td><td>562381</td><td>Panel de células T efectoras (base)</td></tr><tr><td>Anti-CD45RA PE-Cy7</td><td>BD Biosciences</td><td></td><td>337167 Panel de células T efectoras (base)</td></tr><tr><td>Anti-HLA-DR BV421</td><td>BD Biosciences</td><td>562804</td><td>Panel de células T efectoras (activación)</td></tr><tr><td>Anti-CD278(ICOS) PE</td><td>BD Biosciences</td><td>557802</td><td>Panel de células T efectoras (activación)</td></tr><tr><td>Anti-CD38 APC</td><td>BD Biosciences 340439</td><td></td><td>Panel de células T efectoras (activación)</td></tr><tr><td>Anti-CD279(PD1) BV421</td><td>BD Biosciences</td><td>562516</td><td>Panel de células T efectoras (activación)</td></tr><tr><td>Anti-CD357(GITR) PE</td><td>eBioscience</td><td>12-5875-42</td><td>Panel de células T efectoras (activación)</td></tr><tr><td>Anti-CD137(41BB) APC</td><td>BD Biosciences</td><td>550890</td><td>Panel de células T efectoras (activación)</td></tr><tr><td>Anti-CD69 BV421</td><td>BD Biosciences</td><td>562884</td><td>Panel de células T efectoras (activación)</td></tr><tr><td>Anti-CD314(NKG2D) PE</td><td>BD Biosciences</td><td>557940</td><td>Panel de células T efectoras (activación)</td></tr><tr><td>Anti-CD134(OX40) Panel de</td> células T efectoras 350008 <td>BioLegend</td><td>de</td> APC (<td>activación)</td></tr><tr><td>BD Vacutainer Tubos de extracción de sangre de plástico con heparina de sodio: tapón convencional</td><td>Fisher Scientific</td><td>02-689-6</td><td>Para la recolección de sangre</td></tr><tr><td>Albúmina, Suero bovino, Fracción V, RIA y ELISA Grado</td><td>EMD Millipore</td><td>126593</td><td>Para tampón de lavado</td></tr><tr><td>por flujo Azida de sodio</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>S8032</td><td>Para tampón de lavado</td></tr><tr><td>por flujo Heparina, sal de sodio</td><td>Affimetrix</td><td>16920</td><td>Para tampón de lavado</td></tr><tr><td>por flujo Hank' s Solución salina equilibrada (HBSS), 1x, con calcio, magnesio, sin fenol rojo</td><td>GE Healthcare Life Sciences</td><td>SH30588.02</td><td>Para tampón de lavado de flujo</td></tr></tbody></table>

un enfoque semi-automatizado de preparación de cócteles de anticuerpos para el análisis inmunofenotípicos de la sangre periférica humana

A Semi-automated Approach to Preparing Antibody Cocktails for Immunophenotypic Analysis of Human Peripheral Blood

El inmunofenotipo de sangre periférica por citometría de flujo determina los cambios en el estado de la frecuencia y la activación de los leucocitos periféricos durante enfermedad y el tratamiento. Tiene el potencial para predecir la eficacia terapéutica e identificar nuevas dianas terapéuticas. tinción de sangre entera utiliza la sangre no manipulada, lo que minimiza los artefactos que pueden ocurrir durante la preparación de la muestra. Sin embargo, toda la tinción de sangre también se debe realizar en la sangre recién recogida para asegurar la integridad de la muestra. Además, lo mejor es preparar los cócteles de anticuerpos en el mismo día para evitar la posible inestabilidad del tándem de colorantes y evitar la interacción entre el reactivo de tintes violetas brillantes. Por lo tanto, toda manchas de sangre requiere una cuidadosa estandarización para controlar la variabilidad intra e inter-experimental. Aquí, se presenta la implementación de un manipulador de líquidos automatizado equipado con un (2D) lector de código de barras de dos dimensiones en un proceso estándar de hacer antibodY cócteles para citometría de flujo. Los anticuerpos se transfirieron a tubos de código de barras 2D dispuestos en un formato de 96 pocillos y sus contenidos en una base de datos compilada. El manipulador de líquidos podría entonces localizar los viales de anticuerpos fuente haciendo referencia a nombres de anticuerpos dentro de la base de datos. Nuestro método elimina la coordinación tedioso para el posicionamiento de los tubos de anticuerpos de origen. Proporcionó versatilidad permite al usuario cambiar fácilmente cualquier número de detalles en el proceso de dispensación de anticuerpo tal como un anticuerpo específico de usar, el volumen, y de destino mediante la modificación de la base de datos sin volver a escribir las secuencias de comandos en el método de software para cada ensayo. Un experimento de prueba de concepto alcanza la precisión del análisis inter e intra excepcional, demostrado por la preparación de una réplica de 11 colores, flujo 17-anticuerpo ensayo de citometría. Estas metodologías se incrementaron el rendimiento global para citometría de flujo ensayos y facilitaron la preparación diaria de los cócteles de anticuerpos complejos requeridos para el fenotipo detalladaCaracterización typic de sangre periférica anticoagulada recién recogida.

El inmunofenotipado de sangre total es indispensable para monitorizar el sistema inmunitario humano. Sin embargo, el número de reactivos necesarios y la inestabilidad de fluorocromos específicos en los cócteles premezclados requieren la preparación diaria de reactivos. Aquí mostramos que la preparación semiautomatizada del cóctel de anticuerpos de tinción ayuda a establecer un inmunofenotipado confiable al minimizar la variabilidad en la dispensación de reactivos.

Un enfoque semi-automatizado de preparación de cócteles de anticuerpos para el Análisis Inmunofenotípicos de la sangre periférica humana

Immunophenotyping of peripheral blood by flow cytometry determines changes in the frequency and activation status of peripheral leukocytes during disease ...

El objetivo general de este protocolo de preparación de cócteles de anticuerpos con tinción semiautomatizada es establecer un método de inmunofenotipado fiable para minimizar la variabilidad de la dispensación de reactivos. Este método puede ayudar a abordar cuestiones clave en el campo de la inmunomonitorización, tales como: cómo controlar la variabilidad intra e interexperimental de la dispensación de reactivos. La principal ventaja de esta técnica es que la automatización de la preparación del cóctel aumenta la precisión del pipeteo, al tiempo que reduce los errores de la preparación manual del cóctel. La demostradora del procedimiento estará a cargo de Iliana González, técnica de mi laboratorio. Antes de comenzar el procedimiento, aplique etiquetas legibles por humanos a los tubos de códigos de barras 2D. A continuación, transfiera todo el contenido de cada vial de anticuerpo a los tubos de código de barras 2D correspondientes adecuados, teniendo cuidado de evitar burbujas. Cuando se hayan transferido los anticuerpos, utilice el lector de códigos de barras 2D para leer los tubos. A continuación, cree una hoja de cálculo que contenga los nombres de los anticuerpos y las lecturas del código de barras, y guarde la hoja de cálculo como un archivo de valores separados por comas. Ahora, inicie el lector de códigos de barras 2D y luego el manipulador de líquidos automatizado. Para cebar las jeringas del manipulador de líquidos automatizado, en Instrumento, seleccione Inicio de todos los ejes.Confirme que ninguna de las jeringas contenga burbujas de aire visibles. Cuando las jeringas estén cebadas, abra los métodos para hacer el cóctel base y el cóctel de activación en el software automatizado de manipulación de líquidos. A continuación, coloque los tubos de microfuga en la rejilla de tubos pequeña para los tubos de microfuga para el cóctel base y el cóctel de activación, de acuerdo con el número de cócteles base y de activación a realizar. Utilice el esquema de configuración del instrumento como referencia para colocar los bastidores de tubos en la plataforma. Coloque el depósito tampón en la sección apropiada de la plataforma y use un destaponador de tapón de rosca de ocho canales para destapar los tubos de códigos de barras 2D que contienen los anticuerpos. Para evitar la contaminación cruzada, coloque cada tapa en una bandeja de retención de tapas a medida que se retiran, para mantener las tapas en el orden adecuado. A continuación, coloque las puntas de filtro P50 LLS, las puntas de filtro P200 LLS, las puntas P1000 y la gradilla de tubos Matrix de 1 ml en la plataforma en sus posiciones adecuadas. Haga clic en el icono de inicio para iniciar el método. Cuando aparezca la ventana emergente, confirme que todos los elementos de la plataforma coincidan con el esquema de configuración del instrumento para el método. Si todo está en posición, haga clic en Aceptar. El manipulador de líquidos automatizado transferirá el tampón del depósito a los tubos de microfuga. El rack de tubos Matrix de 1 ml pasará al lector de códigos de barras 2D y se leerán los códigos de barras. Cuando se hayan leído todos los códigos de barras, haga clic en Aceptar en la ventana emergente para comenzar la transferencia de anticuerpos. Una vez finalizada la transferencia, use el destaponador de tapón de rosca de ocho canales para volver a tapar los tubos de código de barras 2D y devuelva los tubos a 4

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Research

Investigación

JoVE Journal

Immunology and Infection

Inmunología e Infección

Este video describe una técnica de inmunoensayo que utiliza perlas magnéticas fluorescentes o microesferas junto con diferentes antígenos para detectar simultáneamente varios isotipos de anticuerpos en una muestra de suero. El ensayo es útil para comprender la seroconversión durante una infección o después de la vacunación.

Ensayo de inmunoperlas multianalitos: una técnica de inmunoensayo basada en flujo para la detección simultánea de múltiples subtipos de anticuerpos en muestras de suero humano

Este vídeo demuestra el uso del ensayo ELISpot para evaluar la función de los linfocitos B secretores de anticuerpos, ASCs. Los anticuerpos secretados por las ASC interactúan con los fragmentos de anticuerpos policlonales unidos a la membrana, que son detectados por los anticuerpos IgG o IgM conjugados con enzimas. La mancha de color producida en cada pocillo indica la presencia del isotipo del anticuerpo específico, que se correlaciona con la actividad secretora de las células B.

Evaluación funcional de linfocitos B secretores de anticuerpos mediante el ensayo ELISpot

Este video muestra una técnica basada en citometría de flujo que utiliza dos fluorocromos para identificar linfocitos T CD4+ y CD8+, linfocitos T γδ, linfocitos B, linfocitos citolíticos naturales (NK) y monocitos en linfocitos mononucleares de sangre periférica humana (PBMCs). Al incubar las células con anticuerpos conjugados con fluorocromo contra los marcadores de superficie, los subconjuntos de células se identifican utilizando una estrategia óptima de activación por citometría de flujo.

Ensayo de citometría de flujo para identificar subconjuntos de células inmunitarias en células mononucleares de sangre periférica

Aquí se describe un protocolo para aislar los subconjuntos de precursor de células B de sangre del cordón umbilical. Una cantidad suficiente y calidad de los ácidos nucleicos se pueden extraer de las células y utilizarse en ensayos subsiguientes utilizando ADN o ARN.

Aislamiento de los precursores de células B subconjuntos de Sangre del Cordón Umbilical

La sangre periférica humana se utiliza habitualmente para la evaluación de la respuesta inmunitaria humoral. En este trabajo, se describen los métodos para aislar las células B humanas de la sangre periférica, diferenciar las células B humanas en células B secretoras de anticuerpos (Ab) en cultivo y enumerar el total de IgM- e IgG-ASC mediante un ensayo ELISpot.

El aislamiento, diferenciación y cuantificación de Human secretoras de anticuerpos células B de sangre: ELISpot como una lectura funcional de la inmunidad humoral

Un método simple y efectivo que emplea nanopartículas magnéticas para detectar y enriquecer células B reactivas al antígeno para el análisis funcional y fenotípica se describe.

Detección y enriquecimiento de Rare células B específicas de antígeno para el análisis del fenotipo y la función

Se describe un método para la producción de anticuerpos humanos específicos para un antígeno de interés, a partir de células B circulantes en la sangre humana. Generación de estos anticuerpos naturales es eficiente y rápido, y los anticuerpos obtenidos pueden discriminar entre antígenos muy similares.

Generación de anticuerpos monoclonales humanos discriminativo de células B antígeno específicas raras circulan en sangre

Aquí describimos un enfoque proteómico unicelular para evaluar inmunológico fenotípico y funcional (inducción de citocinas intracelulares) alteraciones en las muestras de sangre periférica, analizadas mediante citometría de masas.

Análisis unicelular de Immunophenotype y producción de citoquinas en sangre periférica por citometría de masas

El método BSelex para identificar y recuperar anticuerpos específicos de antígenos individuales de células mononucleares de sangre periférica humana combina citometría de flujo con PCR de una sola célula y clonación.

Método de cribado de una sola célula para la selección y recuperación de anticuerpos con especificidades deseadas de poblaciones de células B de memoria humana enriquecidas

Aquí, presentamos una estrategia de inmunofenotipificación para la caracterización de la diferenciación de megacariocitos, y mostrar cómo esa estrategia permite la clasificación de megacariocitos en diferentes etapas con un clasificador de células activado por fluorescencia. La metodología se puede aplicar a tejidos primarios humanos, pero también a megacariocitos generados en cultivo in vitro.

Inmunofenotipado Y Clasificación Celular De MKs Humanos De Fuentes Primarias Humanas O Diferenciados In Vitro De Progenitores Hematopoyéticos

Aprende un método semi-automatizado para preparar cócteles de anticuerpos destinados al análisis inmunofenotípico de sangre periférica humana. Esta técnica mejora la precisión de la pipeteación y reduce los errores de preparación manual.

Un enfoque semi-automatizado de preparación de cócteles de anticuerpos para el Análisis Inmunofenotípicos de la sangre periférica humana (Video) | JoVE Journal

Un enfoque semi-automatizado de preparación de cócteles de anticuerpos para el Análisis Inmunofenotípicos de la sangre periférica humana

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