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Ensayo muy sensible para la medición del Adjunto de células arenavirus
Ensayo muy sensible para la medición del Adjunto de células arenavirus
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JoVE Journal Immunology and Infection
Highly Sensitive Assay for Measurement of Arenavirus-cell Attachment

Ensayo muy sensible para la medición del Adjunto de células arenavirus

Full Text
10,138 Views
08:34 min
March 2, 2016

DOI: 10.3791/53682-v

Joseph P. Klaus1, Jason Botten1,2

1Department of Medicine, Division of Immunobiology,University of Vermont, 2Department of Microbiology & Molecular Genetics,University of Vermont

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Please note that some of the translations on this page are AI generated. Click here for the English version.

El primer paso en el ciclo de vida del arenavirus es la unión de las partículas virales a las células huésped. Presentamos un ensayo cuantitativo basado en (q)RT-PCR para la detección y cuantificación ultrasensibles de eventos de adhesión de arenavirus.

El objetivo general de este protocolo es medir cuantitativamente la adhesión de partículas de arenavirus a las células huésped. La principal ventaja de esta técnica es su alta sensibilidad. También se puede adaptar para medir la endocitosis del virión, así como la liberación del genoma en el citoplasma después de la fusión.

Para empezar, para hacer DMEM completo, a un frasco de 500 mililitros de DMEM, agregue 50 mililitros de suero fetal bovino inactivado por calor y cinco mililitros de 100X penicilina-estreptomicina y 100X de tampón HEPES. Al final del día, sembrar 2,5 veces 10 a la 4ª células Vero E6 por pocillo, por triplicado para cada virus, en una placa de cultivo de tejidos de 48 pocillos en un volumen final de 500 microlitros de DMEM completo. Incubar la placa a 37 grados centígrados en una incubadora humidificada con 5% de dióxido de carbono durante 10 a 18 horas.

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Inmunología No. 109 arenavirus virus Junín el virus de la coriomeningitis linfocítica la unión virus-célula la unión virus-célula la unión del virión el apego partícula viral RT-PCR cuantitativa MOI baja alta sensibilidad la entrada del virus

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