A High Resolution Method to Monitor Phosphorylation-dependent Activation of IRF3

Alexa C. Robitaille; M&#233;lissa K. Mariani; Audray Fortin; Nathalie Grandvaux

doi:10.3791/53723

Una alta resolución Método de Seguimiento activación fosforilación dependiente de IRF3

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A High Resolution Method to Monitor Phosphorylation-dependent Activation of IRF3

Una alta resolución Método de Seguimiento activación fosforilación dependiente de IRF3

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11:44 min

January 24, 2016

DOI: 10.3791/53723-v

Alexa C. Robitaille*^1,2,3, Mélissa K. Mariani*^1,3, Audray Fortin¹, Nathalie Grandvaux^1,2,3

¹CRCHUM - Research center, Centre Hospitalier de l'Université de Montréal,Université de Montréal, ²Department of Biochemistry and Molecular Medicine,Université de Montréal, ³Faculty of Medicine,Université de Montréal

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Aquí describimos un procedimiento que permite un análisis detallado de la activación dependiente de la fosforilación del factor de transcripción IRF3. Esto se logra mediante la combinación de un SDS-PAGE de alta resolución y un PAGE nativo acoplado a inmunoblots utilizando múltiples anticuerpos fosfoespecíficos.

El objetivo general de este procedimiento es permitir un análisis detallado de la activación dependiente de la fosforilación del factor de transcripción IRF3. Por lo tanto, este método puede ayudar a responder preguntas clave sobre la respuesta inmunitaria innata mediada por el interferón. Por ejemplo, un patógeno activa o invade la expresión beta de interferón dependiente de IRF3.

La principal ventaja de esta técnica es que constituye un enfoque asequible y sensible para distinguir las diferentes formas activadas por IRF3 que pueden surgir después de diferentes estimulaciones. Aunque este método proporciona información sobre la infección viral de células humanas, también se puede aplicar a tejidos de ratón o humanos sometidos a otros patógenos o patrones moleculares asociados a patógenos. Alexa Robitaille y Melissa Mariani, dos expertas en Simulink celular de mi laboratorio, harán una demostración del procedimiento.

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