Name: La medición de volumen de bucles de presión en el ratón (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2016-05-02T15:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 15 s
Description: Aprenda a medir bucles de presión-volumen en ratones para evaluar la función cardíaca. Este método permite caracterizar cambios fisiológicos causados por manipulaciones genéticas en modelos murinos.

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El autor no tiene nada que revelar.

Hay tres pasos críticos en este procedimiento: 1) la colocación del tubo endotraqueal y ventilación adecuada, 2) la colocación del catéter IV yugular, y 3) la colocación correcta del catéter PV en el ventrículo izquierdo. La determinación de la tasa respiratoria adecuada es una parte importante de proporcionar soporte ventilatorio. ratones conscientes generalmente mantienen la ventilación alveolar con respiraciones superficiales rápidas. En general, los ratones ventilados tendrán volúmenes corrientes mucho mayores. Por ...

La enfermedad cardiovascular sigue siendo una causa importante de mortalidad y morbilidad en el mundo entero 1. Enfermedades del corazón presentan retos particularmente difíciles en el desarrollo de nuevas terapias. Los avances en genética prevén la posibilidad de identificar una multitud de posibles contribuyentes genéticas para el desarrollo de enfermedades del corazón. La naturaleza integradora del sistema cardiovascular requiere que estas dianas genéticas ser validados en modelos animales intactos. La flexibilidad y bajos costos de vivienda genéticos del ratón han traído al primer plano para la evaluación de la función fisiológica de un determinado gen. El pequeño tamaño del ratón presenta algunos desafíos únicos para la evaluación de la función cardíaca. Existen varias modalidades que pueden proporcionar información sobre la función cardíaca, pero sólo la medición simultánea de la presión ventricular y el volumen permite a presión-volumen (PV) análisis de ciclos de la función ventricular. PV todos los loopsla función cardíaca ow a analizar independiente de su conexión a la vasculatura; un factor importante para determinar el papel funcional de un elemento genético particular. La evaluación de los bucles de presión-volumen se ha utilizado tanto experimental como clínicamente durante muchos años y existe una amplia literatura sobre el análisis de estos conjuntos de datos 2,3. La adaptación de la tecnología de bucle de PV para el ratón ha sido un avance importante para la comprensión de la fisiología cardiaca murino 4-6. Catéter tecnologías de bucle PV basado pareja un transductor de presión y el uso de conductancia para estimar el volumen ventricular. El volumen ventricular se determina mediante el examen de los cambios en un campo eléctrico generado por el catéter. Este modelos Método El ventrículo como un cilindro, la altura de los cuales se define por la distancia entre los electrodos en el catéter y el radio se calculan a partir de la conducción de un campo eléctrico a través de la sangre enel ventrículo 7-9. La señal de la conductancia medida por el catéter tiene dos componentes. La primera es la conducción a través de la sangre; esto varía con el volumen del ventrículo y constituye la señal principal que se utiliza para determinar el volumen ventricular. El segundo componente resulta de la conducción a través ya lo largo de la pared del ventrículo. Esto se conoce como la conductancia en paralelo y se debe quitar con el fin de determinar el volumen ventricular absoluta. Hay dos sistemas disponibles en el mercado para la recogida de los datos de presión-volumen en el laboratorio de investigación y el método utilizado para calcular y eliminar la conductancia en paralelo es la principal diferencia entre ellos 6,10,11. catéteres conductancia requieren la inyección de la solución salina hipertónica para el cálculo de la conductancia en paralelo. Esta inyección cambia transitoriamente la conductividad de la sangre en el ventrículo, mientras que la conductividad de la pared se mantiene constante. De estos datos es posible determinar lacomponente de la señal de conductancia que se origina a partir de la sangre y lo que viene de la pared ventricular. Este enfoque supone que la conductancia en paralelo no varía durante el ciclo cardíaco. El método de admisión se basa en cambios de fase en el campo eléctrico para evaluar la contribución de la pared ventricular a la señal de volumen general. Este método se basa en una variedad de constantes predeterminados para la conductividad de la sangre y el miocardio para determinar el volumen final, pero hace que las medidas continuas de la conductancia en paralelo durante el ciclo cardíaco. Ambos sistemas proporcionan buenas estimaciones del volumen del ventrículo izquierdo y las diferencias entre ellos no es probable que sean fisiológicamente significativa. El modelo cilíndrico del ventrículo y otros supuestos rinden estos enfoques basados ​​en catéter no es tan exacto como otras modalidades, pero no se proporciona esta información en una base de latido a latido que es esencial para la evaluación de la carga medidas independientes de la función cardíaca. El procedimiento que se describe aquí se usa en mi laboratorio y ha proporcionado datos para un gran número de estudios que examinan los mecanismos fisiopatológicos básicos de cardiomiopatía distrófica 12-18. El procedimiento descrito a continuación es uno de los dos que se puede utilizar para obtener datos de bucle PV. Mientras que muchos de los principios son aplicables para uno u otro enfoque, este protocolo se centrará en un enfoque apical abierta de tórax; un protocolo de tórax cerrado se ha detallado en otro lugar 19,20. Si bien se describirá el procedimiento en detalle, los principios generales son importantes para exponer el corazón con un daño mínimo o bien el corazón o los pulmones. A lo largo del protocolo es importante recordar que se trata de un procedimiento no la supervivencia y que tiene una buena exposición del corazón es de vital importancia para la correcta colocación del catéter.

<table><tbody><tr><td>Dumont 5/45 (2)</td><td>Fine Science Tools</td><td>11251-33</td><td></td></tr><tr><td>Pinza de dilatación para vasos</td><td>Fine Science Tools</td><td>18153-11</td><td></td></tr><tr><td>Castroviejo Micro Tijera de disección de resorte</td><td>Roboz Instruments</td><td>RS-5668</td><td></td></tr><tr><td>Pinzas Octogon - Dentadas/Curvadas</td><td>Fine Science Tools</td><td>11041-08</td><td></td></tr><tr><td>Pinzas Octogon - Dentadas/</td><td>Rectas Finas Herramientas de ciencia</td><td>11040-08</td><td></td></tr><tr><td>Tijeras de disector- Hoja pesada</td><td>Herramientas de ciencia fina</td><td>14082-09</td><td></td></tr><tr><td>Cinta quirúrgica Transpore</td><td>3M</td><td>1527-1</td><td></td></tr><tr><td>3-0 Sutura de seda</td><td>Herramientas de ciencia fina</td><td>18020-30</td><td></td></tr><tr><td>Ventilador TOPO</td><td>Kent Scientific</td><td>TOPO</td><td></td></tr><tr><td>Martin ME 102 Unidad electroquirúrgica</td><td>Aparato de Harvard</td><td>PY2 72-2484</td><td></td></tr><tr><td>Bomba de jeringa</td><td>Lucca Technologies</td><td>GenieTouch</td><td></td></tr><tr><td>Microscopio estereoscópico con soporte de brazo</td><td>Nikon</td><td>SMZ-800N</td><td></td></tr><tr><td>Termómetro de termopar</td><td>Cole Parmer</td><td>EW-91100-40</td><td></td></tr><tr><td>T/Bomba Recirculador de agua caliente</td><td>Kent Scientific</td><td>TP-700</td><td></td></tr><tr><td>ADVantage Sistema de presión-volumen</td><td>transónico</td><td>ADV500</td><td></td></tr><tr><td>Adquisición y análisis de datos</td><td>DSI</td><td>Ponemah ACQ-16</td><td></td></tr></tbody></table>

la medición de volumen de bucles de presión en el ratón

Measuring Pressure Volume Loops in the Mouse

La comprensión de las causas y la progresión de la enfermedad cardíaca presenta un reto importante para la comunidad biomédica. La flexibilidad genética del ratón ofrece un gran potencial para explorar la función cardíaca en el nivel molecular. El pequeño tamaño del ratón presenta algunos desafíos en lo que respecta a la realización de fenotipificación cardiaca detallada. Miniaturización y otros avances en la tecnología han hecho muchos métodos de evaluación cardíaca posible en el ratón. De éstas, la recolección simultánea de los datos de presión y volumen ofrece una visión detallada de la función cardiaca que no está disponible a través de cualquier otra modalidad. Aquí se describe un procedimiento detallado para la recogida de datos de bucle presión-volumen. Se incluye una discusión de los principios subyacentes a las medidas y las posibles fuentes de error. El manejo anestésico y un procedimiento quirúrgico se discuten en gran detalle ya que ambos son fundamentales para la obtención de mediciones hemodinámicas de alta calidads. También se abordan los principios del desarrollo del protocolo hemodinámico y aspectos relevantes de análisis de datos.

Por convención, el volumen se representa en el eje X y la presión en el eje Y como en la figura 1. Los bucles de presión-volumen resultante de una presión trazar contra volumen debe ser similar a un rectángulo, los bordes verticales que representan cambios isovolúmicos en la presión (es decir, cuando ambas válvulas mitral y aórtica están cerrados). La horizontal inferior representa ventricular llenado a través de la válvula mitral y la porción horizontal superio...

Este manuscrito describe un protocolo detallado para la recogida de los datos de presión-volumen del ratón.

La medición de volumen de bucles de presión en el ratón

Understanding the causes and progression of heart disease presents a significant challenge to the biomedical community. The genetic flexibility of the ...

El objetivo general de la medición de los bucles de presión-volumen en el ratón consiste en obtener una evaluación detallada de la función cardíaca. Este método resulta útil para la caracterización fisiológica de ratones que portan manipulaciones genéticas específicas, lo cual a su vez puede proporcionar información sobre el papel de proteínas específicas en la función cardíaca. La principal ventaja de esta técnica es que ofrece una evaluación detallada de la función contráctil que no está disponible mediante otras metodologías.Una vez que el ratón esté preparado para la cirugía, comience haciendo una incisión en la escotadura esternal que se extienda desde aproximadamente cinco milímetros a la derecha de la línea media hasta unos cinco milímetros a la izquierda de la línea media. Haga una segunda incisión que se extienda a lo largo del borde derecho de la primera en dirección rostral hasta unos dos milímetros por debajo del extremo de la mandíbula. A continuación, realice una tercera incisión que se extienda desde el extremo rostral de la segunda incisión hasta unos cinco milímetros a la derecha de la línea media.Y retraja el colgajo de piel resultante hacia la derecha para expone

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Biología

El CODA de 8 canales de alto rendimiento sistema no invasivo de presión arterial mide la presión arterial hasta en 8 ratones o ratas de forma simultánea. Este sistema utiliza la cola del manguito de registro del volumen de presión (VPR) para medir la presión arterial mediante la determinación del volumen de sangre cola.

Medición de la presión arterial en ratones con registro del volumen de presión, un método de la cola del manguito

Medición de la presión del ventrículo izquierdo (VI) en embriones de ratones y neonatal se describe. La presión se mide mediante la inserción de una aguja conectada a un transductor lleno de líquido en el ventrículo izquierdo bajo la guía del ultrasonido. Se debe tener cuidado para mantener la función cardiaca normal durante el protocolo experimental.

Medición de la presión del ventrículo izquierdo a finales de embriones de ratones y Neonatal

Un protocolo específico y rápido para investigar simultáneamente la función del corazón derecho, inflamación pulmonar, y la respuesta inmune que se describe como una herramienta de aprendizaje. Vídeo y figuras describen la fisiología y técnicas de microdisección en un equipo organizado-enfoque que es adaptable para ser utilizado para pequeñas y grandes estudios de tamaño.

Ventricular derecha sistólica mediciones de presión en combinación con la cosecha de pulmón y muestras de tejido inmune en ratones

La evaluación de la fisiología respiratoria se ha basado tradicionalmente en las técnicas, que requieran inmovilización o sedación de los animales. Unrestrained pletismografía de cuerpo entero, sin embargo, proporciona un análisis cuantitativo preciso, no invasivo, de la fisiología respiratoria en modelos animales. Además, la técnica permite repitió evaluación respiratorio de los ratones que permiten estudios longitudinales.

Medición de la función respiratoria en ratones usando irrestricta pletismografía corporal total

Aquí presentamos un protocolo para medir de forma sencilla y fiable la curva presión-volumen pulmonar en ratones, demostrando que es lo suficientemente sensible como para detectar cambios fenotípicos en el parénquima en dos patologías pulmonares comunes, la fibrosis pulmonar y el enfisema. Esta métrica proporciona un medio para cuantificar los cambios estructurales del pulmón con la patología en desarrollo.

Medición de la curva de presión-volumen en mouse Pulmones

Este artículo describe la medición de la función ventricular izquierda murina mediante el análisis de presión/volumen a diferentes frecuencias cardíacas.

Cateterismo cardíaco en ratones para medir la relación de volumen Presión: Investigar el efecto Bowditch

El análisis del bucle de presión-volumen cardíaco es la forma más completa de medir la función cardíaca en el corazón intacto. Describimos una técnica para realizar y analizar los bucles de volumen de presión cardíaca, utilizando catéteres de conductancia.

Cardiaca Presión-Volumen Análisis Loop Utilizando conductancia catéteres en ratones

Se presenta un protocolo para evaluar la función cardíaca biventricular en ratones mediante la generación de asas de presión-volumen (VP) desde el ventrículo derecho e izquierdo en el mismo animal mediante cateterismo torácico cerrado. La atención se centra en el aspecto técnico de la cirugía y la adquisición de datos.

Evaluación biventricular de la función cardíaca y de los asas presión-volumen mediante cateterismo torácico cerrado en ratones

Aquí describimos un análisis de asa presión-volumen cardíaco bajo dosis crecientes de isoproterenol infundido por vía intravenosa para determinar la función cardíaca intrínseca y la reserva β-adrenérgica en ratones. Utilizamos un enfoque de pecho abierto modificado para las mediciones de bucle presión-volumen, en el que incluimos ventilación con presión positiva al final de la espiración.

Respuesta cardíaca a la estimulación β-adrenérgica determinada por análisis de asa presión-volumen

Este protocolo proporciona un procedimiento paso a paso para la administración de múltiples dosis de bolo intravenoso y la monitorización hemodinámica invasiva en ratones. Los investigadores pueden utilizar este protocolo para futuras pruebas de detección de compuestos terapéuticos para la hipertensión de la arteria pulmonar.

Dosificación múltiple en bolo intravenoso y evaluación hemodinámica invasiva en un modelo de hipertensión de la arteria pulmonar de ratón inducida por hipoxia

Aprenda a medir bucles de presión-volumen en ratones para evaluar la función cardíaca. Este método permite caracterizar cambios fisiológicos causados por manipulaciones genéticas en modelos murinos.

La medición de volumen de bucles de presión en el ratón

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