Name: Imágenes de vídeo y mapas espacio-temporales para Analizar la motilidad gastrointestinal en ratones (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2016-02-03T15:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 41 s
Description: Aprenda a analizar la motilidad colónica en ratones mediante imágenes de vídeo y mapas espacio-temporales de alta resolución. Esta técnica permite detectar cambios sutiles en la regulación neural del sistema nervioso entérico.

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JCB y ELH-Y fueron apoyados por el Departamento de Programa de Investigación del Autismo CDMRP Defensa (AR11034). NHMRC (1047674) a ELH-Y.The mayo Stewart beca-Universidad de Melbourne confianza financiado becas para la EM. Agradecemos a Ali Taher, Fátima Ramalhosa y Gracia Seger para las contribuciones técnicas.

Manejo de animales y dislocación cervical de los animales antes de todos los experimentos se llevaron a cabo estrictamente de acuerdo con los protocolos aprobados por el Comité de Experimentación Animal de la Universidad de Melbourne (Ética ID: 1212494.7) 1. Tejido Recogida y disección <ol><li> La eutanasia a los ratones adultos por dislocación cervical. Si es posible evitar la anestesia para evitar influencias sobre la función intestinal a través de receptores situados en poblaciones neuronales de interés. </li><li> Registrar el peso total del cuerpo del animal, fijar el cuerpo (a través de las cuatro patas, cara ventral expuesta al experimentador) firmemente a una placa de disección usando agujas hipodérmicas (Tamaño: 20 G). </li><li> Con unas pinzas de disección y tijeras; hacer una incisión a través de la epidermis superposición de las capas musculares abdominales inferiores. Seguir utilizando las pinzas y tijeras para abrir la cavidad abdominal a lo largo de la línea media del abdomen hasta el esternón. </li><li> Para evitar la deshidratación del tejido, se vierte physisolución salina gico (solución de Krebs: 118 NaCl, 4,6 KCl, 2,5 CaCl2, 1,2 MgSO4, 1 NaH 2 PO 4, 25 NaHCO3, 11 D-glucosa en mM - burbujear a TA con gas Carbógeno; 95% de O2 y 5 % de CO 2 durante un mínimo de 20 min) sobre el contenido abdominal a intervalos regulares (es decir, cada 30 a 60 segundos) durante el proceso de disección. </li><li> Para aislar el colon mientras está conectada al intestino ciego y el recto, mantenga el ciego (que se encuentra adyacente al extremo proximal del colon) suavemente con fórceps de disección aproximadamente 4-5 cm por encima del cuerpo del animal, mientras que el recorte del mesenterio usando tijeras de disección finas. </li><li> Tenga cuidado de no manejar, estirar o cortar el tejido gastrointestinal mientras se quita el mesenterio contiguo. </li><li> Retire el exceso de tejido (es decir, la vejiga urinaria y los testículos). Con unas tijeras de disección gruesas, hacen dos incisiones verticales (es decir, aproximadamente 0,5 cm de la línea media) para cortar el hueso de la pelvis en each lado del colon. </li><li> Utilice unas tijeras finas para separar el recto de la contigua tejido pélvico y el asiento que rodea los músculos del colon. </li><li> Coloque el colon de longitud completa (desde el ciego hasta el recto) en un vaso de precipitados que contiene solución salina fisiológica (previamente oxigenada con carbógeno) y continuar para oxigenar a TA. Retire el ciego y el recto uso de las tijeras de disección finas y vuelva a colocar en el vaso de precipitados. </li><li> bolitas fecales vacío / contenido intestinal a partir de preparaciones de colon mediante la aplicación de presión positiva al final suave oral utilizando una jeringa de 5 ml unido a una punta de pipeta de 200 l lleno de solución salina fisiológica. Con el fin de orientar el tejido en el futuro, utilizar un pasador de insectos para marcar el extremo más proximal del colon, donde las estrías en la mucosa son visibles. <ol><li> Modificar la punta de pipeta de plástico para adaptarse a la jeringa 5 ml mediante la eliminación de aproximadamente 1 cm del extremo más ancho / proximal utilizando una hoja de afeitar. Para aumentar la velocidad de flujo, ensanchar el extremo distal / más pequeño por el corte en un angle (aproximadamente 45 ° C) usando una cuchilla de afeitar. </li></ol></li><li> Agarre el tejido del colon suavemente en su extremo proximal con pinza de disección, inserte la punta de la pipeta en el lumen del colon y solución salina fisiológica al ras a través del lumen. </li></ol> 2. Preparación de colon tejidos y montaje experimental para imágenes de vídeo <ol><li> Solución salina fisiológica Flush a través de toda la tubería unida a un baño de dos órganos de cámara configurar (Figura 1 y la Figura 3), utilizando una jeringa conectada a una punta de pipeta 200 l. Esta etapa elimina cualquier residuo dentro de la tubería que pueda bloquear el flujo de solución. Para tubería de especificaciones se refieren a la tabla de materiales. </li><li> Asegúrese de que las cámaras de baño de órganos se superfused continuamente con solución salina fisiológica burbujear con Carbógeno (95% de O2 y 5% de CO 2, velocidad de 5 ml min -1 flujo). El uso de una sonda de temperatura a intervalos regulares, asegurarse de que la temperatUre del baño se mantiene entre 33 ° C -37 ° C. </li><li> Llenar el depósito de flujo de entrada conectado a través de una llave de paso de 3 vías para el tubo de entrada con aproximadamente 20 a 30 ml de solución salina fisiológica con una jeringa de 50 ml. </li><li> Durante el experimento, mantener la presión en el depósito de entrada utilizando arubber tapón con un tubo de vidrio (5 mm de diámetro interior) que se inserta a través de su centro. Asegúrese de que la abertura superior del depósito de entrada se sella de forma segura (con el tubo de vidrio interior permaneciendo sin sellar). </li><li> Coloque los dos puntos (5-7 cm de longitud) en la cámara de baño de órganos, asegurándose de que esté totalmente sumergido en solución salina fisiológica. </li><li> Canular cada extremo del segmento de colon a los dos tubos de entrada / salida sumergidas (entrada / tubos de salida de diferente diámetro se puede cambiar de acuerdo con el tamaño del lumen de tejido, por ejemplo. Tejido postnatal, los ratones adultos y conejillo de Indias) en el uso de baño ordinario hilo de coser de algodón. Una el extremo proximal del colon para el tubo de entrada y laextremo distal del colon para el tubo de salida (conectado a través de una llave de paso de 3 vías a un tubo de salida vertical; 6 cm de altura). Asegúrese de que el tejido no se estira demasiado o demasiado relajado después de la canalización para evitar interferencias con las mediciones y análisis futuros. </li><li> Registrar la longitud del colon mediante la medición de la distancia entre los extremos proximal y distal canulaciones utilizando una regla 15 cm. Esto es importante para la interpretación de los cambios en la contracción de la longitud, la velocidad de propagación y puntos de iniciación de la contracción. </li><li> Asegurar que se establezca antes de comenzar el experimento una presión luminal línea de base estable (cm H2O). Calcular la presión luminal por la medición de la distancia vertical desde el tejido al menisco de solución salina fisiológica en el tubo de vidrio de depósito de flujo de entrada (oral) y el tubo de salida vertical (anal). </li><li> Mantener preparaciones de tejidos a una presión intraluminal constante (por ejemplo, 1-2 cm H 2 O) asegurándose de que el sello del tapón de entrada pressure se mantiene constante y que no hay obstrucciones están presentes en la puesta en marcha. </li><li> Deje el colon para equilibrar en solución salina fisiológica durante 30 minutos antes de grabar los movimientos intestinales. Comprobar que no existen bloqueos que surgen en los tubos de entrada o salida y eliminarlos mediante la aplicación de presión a través del depósito de flujo de entrada o volviendo a cannulating los extremos oral y anal del colon. </li></ol> 3. Captura de Imagen y Protocolo Experimental <ol><li> Movimientos intestinales de registro como archivos de vídeo utilizando una cámara de vídeo (30 cuadros / seg, 640 x 840 píxeles) posicionados 10-15 cm por encima del baño de órganos en una retorta de laboratorio estándar de pie (Figura 1). </li><li> Abra Virtual Dub (software de captura de vídeo) desde el icono en el escritorio. En la ficha &quot;Archivo&quot;, seleccione &quot;AVI captura&quot; para ver la imagen de la cámara. En la &#39;Audio&#39; para deshacer la selección pestaña «permitir la captura de audio &#39;para desactivar el sonido. <ol><li> En la pestaña de vídeo, seleccione &quot;compresión&quot; y &quot;DivX6.9.2. Codec &amp; #39; para comprimir archivos de vídeo para minimizar el uso de espacio de almacenamiento. Esta función estará disponible tras la instalación del software de compresión &quot;DivX&quot;. </li></ol></li><li> Ajustar manualmente la ubicación de la cámara de manera que todo el segmento de colon canulado es visible (con regiones canulados inmediatamente adyacentes a los bordes verticales del marco de vídeo) a través de la ventana del software de captura de vídeo (véase la Figura 1). Con el fin de mejorar la calidad de la imagen y la mínima reflexión, adjuntar una protección de papel / cartón para el soporte de la cámara para bloquear la luz extraña en el baño de órganos. Optimizar la calidad de vídeo mediante el ajuste de los ajustes de brillo, contraste y la exposición utilizando la interfaz de software de la cámara. <ol><li> Antes de grabar, establecer un nombre de archivo específico; en la pestaña &quot;Archivo&quot;, seleccione &quot;archivo de captura Set &#39;y especificar un nombre único para el video. </li><li> Iniciar la captura de vídeo pulsando &#39;archivo de captura &quot;de la barra de herramientas&#39; captura &#39;. Para detener la grabaciong seleccionar el botón &quot;Detener captura&quot; o la tecla &quot;Esc&quot; en el teclado. </li></ol></li><li> Vuelva a colocar la solución salina fisiológica contenida dentro del depósito de entrada con solución salina fisiológica fresca cada 30 minutos. <ol><li> la presión luminal registro (véase 2.9) y usando una sonda de temperatura, toman nota de la temperatura del baño de órganos. Repita estos pasos durante todo el experimento (es decir, cada 30 min) para asegurar que estas variables son constantes. </li></ol></li><li> la actividad del colon récord en total de 3 horas (incluyendo la aplicación del fármaco y la duración de lavado). Para los propósitos de almacenamiento de datos, los datos de registro en los segmentos de vídeo 15 min. Un experimento completo normalmente se compone de grabaciones de vídeo de 12 x 15 min. <ol><li> registrar la actividad durante 1 hora bajo condiciones de control (solución salina fisiológica). </li><li> Aplicar el fármaco (ya sea superfused en el baño o administrada en el lumen a través del depósito de flujo de entrada) durante 30 min a 1 hr. Nota: Las diferentes vías de administración y puedenield diferentes efectos 23. </li><li> Aplicar solución salina fisiológica fresca para el baño o lumen durante un período de lavado de 1 hr. </li></ol></li></ol> Procesamiento de Datos y 4. Generación de mapas espacio-temporales <ol><li> Proceso de cada grabación de vídeo en línea usando software propio escrito en MATLAB (R2012a, versión 7.4, disponible bajo petición) con el fin de generar mapas espacio-temporales que ilustran la motilidad del colon. <ol><li> software de análisis abierto desde el icono en el escritorio. </li><li> En la ventana de comandos, escriba &quot;Analyse2&quot; con el fin de abrir el panel de control de análisis. </li></ol></li><li> Utilizar la función de detección de bordes para generar mapas espacio-temporales haciendo clic en &quot;Detección de bordes para los archivos .avi&quot; en la ventana del panel de control. Esta función permitirá al software de análisis para leer los vídeos recodificadas en formato de audio y vídeo (AVI). </li><li> Llevar a cabo los siguientes pasos secuencialmente para generar mapas espacio-temporales mediante un adaalgoritmo de detección de bordes ptive. <ol><li> Abrir archivos de vídeo grabados seleccionando la pestaña &quot;Añadir archivos&quot;, seleccionar &quot;Abrir video &#39;y seleccione la ubicación de los archivos de vídeo. </li><li> A partir de los archivos de vídeo que figuran en el software de análisis, seleccione el archivo de interés. </li><li> Seleccione una región rectangular de interés en el marco de la de vídeo, por ejemplo, toda la longitud del colon, desde el punto en el que se canula el colon por vía oral a la canulación anal. Asegúrese de que los puntos de canulación proximal y distal son adyacentes a los límites verticales de la región de interés. líneas de detección de borde (rojo y verde) serán automáticamente aparecen superpuesta a la imagen en tiempo real sobre. </li><li> Asegúrese de que las líneas de umbral de detección de bordes son inmediatamente adyacentes a los dos puntos en ambos de los límites superior e inferior del tejido de colon (esto puede ser optimizado para cada vídeo mediante la alteración de valores de umbral de detección en el panel de control). Asegúrese de que el borde de detección lines son continuas a lo largo de la longitud de la imagen del colon mediante el ajuste del contraste y el brillo usando el panel de control. </li><li> Introduzca toda la longitud del colon (mm) en el cuadro de diálogo de ancho (según consta en el paso 2.7). A continuación, seleccione &quot;Generar mapa de calor&quot;. </li><li> En la ventana emergente, seleccione una ubicación para el archivo que desea guardar y especificar un nombre de archivo para el mapa espacio-temporal. </li><li> Seleccione el formato de &#39;.su2 &quot;y seleccione&quot; Agregar a la cola &quot;. Nota: El formato .su2 comprime los datos a un varios archivos de vídeo tamaño de archivo más pequeño y se pueden añadir a la cola. </li><li> Seleccione &#39;Comenzar detección&#39; para generar mapas espacio-temporales. </li></ol></li></ol> 5. Análisis de Mapas espacio-temporales <ol><li> Utilizar mapas espacio-temporales para calcular los parámetros tales como la frecuencia, la velocidad de propagación, la longitud y duración de CMMCs, diámetro de la tripa y el punto de inicio y la dirección de las contracciones. <ol><li> Para iniciar el análisis espacio-temporalmapas, tipo &#39;analyse2&#39; en la ventana de comandos, como se describe en la sección anterior. En lugar de &quot;Detección de bordes&quot;, seleccione el botón de &quot;análisis del mapa de calor&quot;. </li><li> Abrir archivos de mapas espacio-temporales (archivos .su2) seleccionando la pestaña &#39;Añadir archivos&#39; y especificar la ubicación de archivos que hayan sido obtenidos .su2. </li><li> Una vez que el mapa espacio-temporal es visible en la pantalla, especifique un rango de color en el panel de control, asegurando que el mínimo se establece en 1. Tenga en cuenta que la máxima puede oscilar desde 5 hasta 10 según la contractilidad del tejido. </li><li> Seleccione &#39;gama de colores Lock&#39; para asegurar que todos los mapas de un solo experimento son analizadas en las mismas condiciones. </li><li> Asegúrese de que los ajustes de marcos de tiempo son constantes para todos los mapas espacio-temporales de un experimento dado. </li></ol></li><li> Con el fin de determinar la frecuencia CMMC, contar manualmente las contracciones que atraviesan más de 50% de la longitud del colon. Estas contracciones pueden ser visualizado como rayas de color rojo / naranja (índice de color estándar VHS) en el mapa espacio-temporal (véase la Figura 2 para un ejemplo). Otros contracciones que son más cortas o no se propagan también pueden ser identificados y cuantificados. </li><li> Si se desea, realizar un análisis más a fondo en una resolución más alta a partir de estos mapas. Por ejemplo, las propiedades detalladas, incluyendo la velocidad y la duración de cada contracción se pueden examinar. <ol><li> Con el fin de medir la velocidad y duración, seleccione el botón &quot;Anotar ondas de contracción&quot; en el mapa de calor panel de control de análisis. </li><li> A continuación, el zoom para cada CMMC haciendo clic en el botón &quot;Zoom&quot; y seleccionar el área de interés. A continuación, seleccione el botón &quot;anotar manualmente&quot; para anotar cada contracción usando el ratón para dibujar una línea desde la posición más inicial al final de cada contracción. Este método puede ser usado para medir la velocidad de propagación aparente y la duración de las dilataciones que aparecen para propagar (por ejemplo, ver unaal final de los mapas en la Figura 2A, 2B). Nota: Los datos para la velocidad y la duración aparecerá debajo de la ventana de resultados. Estos valores pueden ser transferidos a una hoja de cálculo de intereses seleccionando la pestaña &quot;Exportar datos&quot;. anotaciones no deseados se pueden eliminar haciendo clic en el botón &quot;Eliminar anotaciones seleccionadas&quot;. </li></ol></li><li> Si lo desea, utilice la coordenadas X e Y de los mapas espacio-temporales (tiempo y posición a lo largo de los dos puntos, respectivamente) para determinar la posición de inicio de pequeñas contracciones o CMMCs. </li><li> Del mismo modo, con el fin de determinar los intervalos entre las contracciones, utilice la función &quot;Anotar&quot; para medir la duración entre las contracciones. Como anteriormente, estos resultados se pueden exportar a una hoja de cálculo seleccionando la pestaña &quot;Exportar datos&quot;. </li><li> Con el fin de medir la anchura del intestino en reposo, seleccione el botón &quot;Tomar sección transversal&quot; en el panel de análisis del mapa de calor. <ol><li> Seleccione &#39;Agregar9; en el panel de secciones transversales temporal. Haga doble clic en cualquier lugar dentro del mapa para generar una línea horizontal superpuesto sobre el mapa de calor. datos del diámetro de la tripa se mostrarán ahora en una nueva ventana. </li><li> Para medir el diámetro del intestino, coloque el cursor sobre el pico y valle adyacente a obtener anchura media del intestino para una condición experimental específica. Los cambios en el diámetro de la tripa pueden ser comparados entre las condiciones experimentales. </li></ol></li></ol>

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</ol>

Los autores no tienen nada que revelar

Usando esta técnica de formación de imágenes de vídeo, la frecuencia CMMC se midió como una indicación de la motilidad del colon en ratones de tipo salvaje y NL3 R451C, un modelo de ratón de trastorno del espectro autista 17. Nuestros resultados indican una reducción en el número de CMMCs en ratones NL3 R451C mutantes en comparación con ratones de tipo salvaje en presencia del antagonista del receptor 5HT 3/4 Tropisetron lo que sugiere que los ratones NL3 R451C exhi...

El sistema nervioso entérico (ENS) es la red neuronal intrínseca del tracto gastrointestinal y modula diversas funciones tales como la digestión del contenido intestinal, la absorción de nutrientes y la secreción y reabsorción del líquido. Las neuronas de la ENS están situados en los plexos mientérico y submucoso. El plexo mientérico juega un papel importante en la regulación de la motilidad gastrointestinal 1, mientras que el plexo submucoso es principalmente involucrado en el control de la secreción de 2,3. El plexo mientérico está situado entre las capas musculares longitudinales y circulares de la pared gastrointestinal. La actividad contráctil de las capas musculares lisas de la pared intestinal facilita las funciones primarias del tracto gastrointestinal mediante la mezcla y propulsando contenido intestinal a lo largo de la longitud del intestino 3. Aunque la inervación extrínseca al tracto gastrointestinal del CNS contribuye a la función gastrointestinal in vivo, El ENS es capaz de regular la función gastrointestinal de forma independiente. Esta característica única permite a la investigación funcional de los circuitos neuronales entéricas y su contribución a la motilidad gastrointestinal ex vivo. Colon migran complejos de motor (CMMCs) son eventos espontáneos, neurogénicos que son el patrón motor predominante observada en aislados de colon de ratón en ausencia de bolitas fecales 4-9. CMMCs se definen como contracciones rítmicas que se propagan a lo largo de una distancia horizontal que es al menos la mitad de la longitud total de los dos puntos (es decir, desde el ciego hasta el recto) 10. La relación entre CMMCs y los patrones contráctiles que impulsan bolitas fecales aún no se ha establecido claramente, sin embargo, algunas diferencias farmacológicas se han reportado 11. Sin embargo, la capacidad de la ENS de funcionar independientemente de la CNS y la existencia de patrones motores neural mediada en la SIde colon olated proporciona un sistema de ensayo ideal para examinar las perturbaciones en la motilidad resultantes de la disfunción ENS subyacente. La espontaneidad de los patrones motores gastrointestinales permite cambios funcionales en respuesta a estímulos farmacológicos que han de evaluarse. El uso de imágenes de vídeo y mapeo espacio-temporal se desarrolló primero en examinar cuantitativamente pequeña peristaltismo intestinal en cerdos de guinea 12. Aquí, una técnica ex vivo se describe que permite el estudio de los patrones de la motilidad del colon de ratón utilizando imágenes y el análisis de estas grabaciones de video para la construcción de alta resolución (~ 100 micras, 33 mseg) mapas de diámetro del colon como una función de posición a lo largo del colon y de tiempo (mapas espacio-temporales). El uso de software interno de detección de bordes (Analyse2; a petición), los datos de larga duración en segmentos colónicos contratantes en tiempo real son procesados ​​para generar mapas espacio-temporales para cada experimento. En este paso, los archivos de vídeo (AVI) son summatorizado y convertido en espacio-temporales mapas utilizando Analyse2. Mapas espacio-temporales (Figura 2) representan la contractilidad en el tiempo y permiten la medición de varios parámetros tales como la velocidad de propagación, la magnitud, la duración y la duración. diámetro Gut también se registra a lo largo de la duración del experimento como una medida de la contractilidad global del segmento de tejido. Este método se puede aplicar para identificar diferencias en el punto de inicio de complejos contráctiles lo que podría indicar la conectividad neuronal entérico alterado. Un protocolo de formación de imágenes de vídeo similar diseñado para evaluar la propulsión pellet en cobayas Se ha informado que 13 sin embargo aquí describimos la aplicación del enfoque de formación de imágenes de vídeo para la cuantificación de la motilidad colónica espontánea (es decir, en ausencia de gránulos). También proporcionamos información detallada para ayudar en la disección y preparación del tejido gastrointestinal para el enfoque de formación de imágenes de vídeo. Estaprotocolo proporciona a los investigadores una herramienta accesible y fácilmente replicado para el análisis de control neural entérico de la función gastrointestinal en modelos animales de enfermedad, incluyendo modelos genéticos de ratón. La técnica de imagen de vídeo permite el análisis de la motilidad del colon en respuesta a diversos agentes farmacológicos. Los medicamentos pueden ser administrados a través de la luz del intestino o el baño de órganos externos a la preparación del colon. Diferentes regiones del tracto gastrointestinal de ratón exhiben patrones de motilidad específicos, tales como pequeño segmentación intestinal y CMMCs en el colon. Esta técnica se ha utilizado para identificar las diferencias de deformación en función del intestino delgado; sensibilidad diferencial a 5-HT 3 y 5-HT 4 antagonistas se observaron en el yeyuno de ratones Balb / c y ratones C57 / Bl6 debido a la naturaleza polimórfica del gen TPH2 expresado en las dos cepas 6. El efecto de la inhibición de 5-HT en la motilidad se mantiene conpolémico, ya que los datos contradictorios se ha informado sobre la importancia de la 5-HT endógena en el peristaltismo del colon y CMMCs 14,15. Las alteraciones en la motilidad pre- y postnatal durante el desarrollo 7, y los efectos de las mutaciones del gen sobre la motilidad gastrointestinal en modelos animales de la enfermedad 10 también pueden ser examinados mediante la utilización de imágenes de vídeo. Aquí se ilustra el uso del método para un estudio de la motilidad del colon en el modelo de ratón NL3 R451C de autismo, que expresa una mutación sin sentido en el gen que codifica la proteína NLGN3 adhesión sináptica neuroligin-3 16. Esta mutación se identificó por primera vez en pacientes con diagnóstico de trastorno del espectro autista (TEA) 17, que está fuertemente asociada con la disfunción GI 18-22. Hemos investigado si la mutación R451C sináptica NL3 afecta a las salidas de los nervios en la ENS utilizando la técnica de imagen de vídeo. Se presentan los datos que caracterizan CMMCs al inicio y en respuesta a la 5H serotoninérgicaT 3/4 antagonista del receptor de tropisetrón en el modelo de ratón NL3 R451C del autismo.

<table><tbody><tr><td><reactivos fuertes> < / ></td><td></td><td></td><td></td></tr> <tr><td>fuerte NaCl (MW: 58.44)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>S7653-250G</td><td></td></tr><tr><td>KCl (MW: 74.55)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>P9333-500G</td><td></td></tr><tr><td>NaH2PO4.2H2O (MW: 156.01)</td><td>Suministro químico</td><td>471-500G</td><td></td></tr><tr><td>MgSO4 .7H20 (MW: 246.48)</td><td>Suministro químico</td><td>MA048</td><td></td></tr><tr><td>CaCl2.2H2O (MW: 147.02)</td><td>Suministro químico</td><td>CA033</td><td></td></tr><tr><td>D-glucosa anhidra (MW: 180.16)</td><td>Suministro</td><td>químico GA018-500G</td><td></td></tr><tr><td>NaHCO3 (MW: 84.01)</td><td>Suministro químico</td><td>GA018-500G</td><td></td></tr><tr><td><fuerte>Nombre</ strong</td><td>>Company</td><td>Número de catálogo</td><td>Comentarios</td></tr><tr><td>MaterialesBaño de</td><td></td><td></td><td></td></tr> <tr><td>órgano de dos cámaras Dimensiones: 14 cm x 8 cm x 3 cm</td><td>Hecho a medida</td><td></td><td>Contactar directamente con el laboratorio&nbsp;</td></tr><tr><td>&nbsp; 732 SELLADOR MULTIUSOS TRANSPARENTE</td><td>Dow Corning Australia Pty Ltd</td><td>1890573</td><td></td></tr><tr><td>SYLGARD 184 KIT DE ELASTÓMERO DE SILICONA&nbsp;</td><td>Dow Corning Australia Pty Ltd</td><td>1064291</td><td></td></tr><tr><td>LLAVE DE PASO 3 VÍAS FEM-ML L/LOCK S</td><td>Terumo Medical Corporation</td><td>0912-2006</td><td></td></tr><tr><td>JERINGAS con puntas Luer Lock 50 ml, 20 ml, 10 ml</td><td>Terumo Medical Corporation</td><td>N/A</td><td></td></tr><tr><td>1,57 mm (ID) x 3,16 mm (OD) - Silastic Tubing</td><td>Masterflex</td><td>508-008</td><td></td></tr><tr><td>1,02 mm (ID) x 2,16 mm (OD) - Silastic Tubing</td><td>Masterflex</td><td>508-005</td><td></td></tr><tr><td>1,50 mm (ID) x 2,50 mm (OD) - Tubo Silastic</td><td>Masterflex</td><td>508-007</td><td></td></tr><tr><td>1,60 mm (ID) - Tubo de silicona curada con platino&nbsp;</td><td>Masterflex</td><td>96410 - 14</td><td></td></tr><tr><td>4.40 mm (ID) - Tubo de silicona curada con platino&nbsp;</td><td>Masterflex</td><td>96410 - 15&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>3,10 mm (ID) - Tubo de silicona curado con platino&nbsp;</td><td>Masterflex</td><td>96410 -16</td><td></td></tr><tr><td>Frascos de vidrio graduados de laboratorio - 500 ml&nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp;</td><td>Thermofisher Scientific&nbsp;</td><td>100-400</td><td></td></tr><tr><td>TAPÓN DE GOMA QUÍMICA 57 x 65 mm&nbsp;</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>TAPÓN DE GOMA QUÍMICA 29 mm x 32 mm</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Calentador de agua&nbsp; (termorregulador)&nbsp;</td><td>Ratek&nbsp;</td><td>TH7000&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>Logitech Webcam</td><td>Logitech</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Name</strong</td><td>>Company</td><td>Número de catálogo</td><td>Comentarios</strong</td></tr><tr><td>>Software</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Virtual Dub - 1.9 11</td><td>virtualdub.org</td><td></td><td></td></tr><tr><td>MATLAB R2012a&nbsp;</td><td>Teclado</td><td></td><td></td>gráfico</tr><tr><td>Logitech Webcam Software</td><td>Logitech</td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

imágenes de vídeo y mapas espacio-temporales para analizar la motilidad gastrointestinal en ratones

Video Imaging and Spatiotemporal Maps to Analyze Gastrointestinal Motility in Mice

El sistema nervioso entérico (ENS) juega un papel importante en la regulación de la motilidad gastrointestinal (GI) y puede funcionar independientemente del sistema nervioso central. Cambios en la función ENS son una causa importante de los síntomas GI y la enfermedad y pueden contribuir a los síntomas GI reportados en los trastornos neuropsiquiátricos, incluyendo el autismo. Está bien establecido que los segmentos de colon aisladas generan contracciones rítmicas espontáneas, conocidas como colónica Migración Motor Complejos (CMMCs). Un procedimiento para analizar la regulación neural entérica de CMMCs en la ex vivo de las preparaciones de colon de ratón se describe. El colon se disecciona del animal y lava para eliminar el contenido fecal antes de ser canulado en un baño de órganos. Los datos se adquieren a través de una cámara de vídeo situada por encima del baño de órganos y se convierte en mapas espacio-temporales de alta resolución a través de un paquete de software de la casa. Usando esta técnica, los patrones contráctiles de línea de base y los efectos farmacológicos sobre la función ENS en Colon segments se pueden comparar más de 3-4 horas. Además, la longitud de propagación y la velocidad de CMMCs se pueden grabar, así como cambios en el diámetro del intestino y frecuencia de las contracciones. Esta técnica es útil para la caracterización de los patrones de la motilidad gastrointestinal en modelos de ratones transgénicos (y en otras especies, incluyendo rata y cobaya). De esta manera, los cambios farmacológicamente inducidos en CMMCs se registran en ratones de tipo salvaje y en el modelo de ratón R451C neuroligin-3 del autismo. Además, esta técnica se puede aplicar a otras regiones del tracto GI, incluyendo el duodeno, el yeyuno y el íleon y a diferentes edades de desarrollo en ratones.

Hasta 90% de los pacientes con TEA experimentar una serie de trastornos gastrointestinales, incluyendo diarrea y estreñimiento 18,24,25. Sin embargo, las causas subyacentes de estos problemas gastrointestinales son desconocidos. Muchas mutaciones identificadas en pacientes con TEA se asocian con proteínas sinápticas contribuir a las alteraciones y perturbaciones en la transmisión o la función sináptica. Un tal mutación, en el gen que codifica la molécula de adhesión celular ne...

Este artículo describe una técnica de imagen de video y mapeo espacio-temporal de alta resolución para identificar cambios en la regulación neuronal de la motilidad colónica en ratones adultos. Los efectos sutiles sobre la función gastrointestinal (GI) se pueden detectar utilizando este enfoque en preparaciones de tejidos aislados para avanzar en nuestra comprensión de la enfermedad gastrointestinal.

Imágenes de vídeo y mapas espacio-temporales para Analizar la motilidad gastrointestinal en ratones

The enteric nervous system (ENS) plays an important role in regulating gastrointestinal (GI) motility and can function independently of the central ...

El objetivo general de esta técnica consiste en identificar cambios en la regulación neural de la motilidad colónica en ratones mediante el uso de imágenes de video. Esta técnica puede ayudar a responder preguntas clave relacionadas con el campo de la neurociencia entérica, como por ejemplo si mutaciones genéticas sutiles en genes neuronales afectan la motilidad colónica. La principal ventaja de este método es que el tejido se encuentra aislado sin la influencia del sistema nervioso central, lo que permite investigar la participación del sistema nervioso entérico en el control de la motilidad gastrointestinal.Esta técnica se extiende hacia la terapia de enfermedades neurodesarrolladas como el autismo, ya que mutaciones genéticas que alteran la función sináptica en el cerebro también podrían alterar la motilidad intestinal. Comience utilizando pinzas de disección y tijeras para realizar una incisión a través de la epidermis que recubre las capas musculares abdominales inferiores. Abra la cavidad abdominal a lo largo de la línea media hasta el esternón.Humedezca el tejido con solución salina fisiológica y use la pinza para levantar suavemente el ciego cuatro o cinco centímetros por e

video-imaging-spatiotemporal-maps-to-analyze-gastrointestinal

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Investigación

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Evaluación de la motilidad del colon en el colon distal conejillo de indias con el monitor de la motilidad gastrointestinal (GIMM) es un enfoque sencillo y fácil de aprender para evaluar cuantitativamente la movilidad de propulsión en el tracto gastrointestinal.

Monitor de la motilidad gastrointestinal (GIMM)

Las células intersticiales de Cajal (ICC) son las células marcapasos del tracto gastrointestinal (GI). Se forman redes complejas entre las células del músculo liso y fibras post-ganglionares neuronal para regular la contractilidad del GI. A continuación, presentamos los métodos de inmunofluorescencia transversal y todo el montaje de visualización de redes murino de la CPI.

La visualización de las células intersticiales de Cajal (ICC) de red en ratones

La medición in vivo de las contracciones del músculo liso a lo largo del tracto gastrointestinal de animales de laboratorio sigue siendo una técnica poderosa, aunque infrautilizada. Las galgas extensométricas flexibles de doble elemento no están disponibles comercialmente y requieren fabricación. Este protocolo describe la construcción de galgas extensiométricas fiables y económicas para la implantación aguda o crónica en roedores.

Fabricación e Implantación de miniatura Galgas Extensiométricas Dual-elemento de medición<em&gt; En Vivo</em&gt; Gastrointestinal contracciones en los roedores.

Mediante el uso de ratones reporteros transgénicos y marcadores fluorescentes inyectables, la microscopía confocal de disco giratorio intravital a largo plazo permite la visualización directa del comportamiento de las células mieloides en el adenoma intestinal en el modelo de cáncer colorrectal ApcMin/+.

Imágenes en tiempo real de las células mieloides en Dinámica Apc Min / + Intestinal Tumores de Spinning disco microscopía confocal

Describimos métodos para la monitorización longitudinal de la eficacia de terapias para el tratamiento de patologías colónicas en ratones utilizando un endoscopio rígido. Este protocolo se puede utilizar fácilmente para la caracterización de la respuesta terapéutica de un tumor individual en ratones vivos y también para el seguimiento de una posible recaída de la enfermedad.

Evaluación no invasiva de la eficacia de nuevas terapias para Intestinal Patologías recurriendo a imágenes de Endoscópica serie de ratones vivos

Las técnicas de grabación de vídeo y mapeo espacio-temporal (STmap) recientemente disponibles permiten visualizar y cuantificar los patrones de propagación y mezcla de la motilidad intestinal. El objetivo de este protocolo es explicar la generación y el análisis de STmaps utilizando el sistema de Monitorización de la Motilidad GastroIntestinal (GIMM).

Mapeo espacio-temporal de la motilidad en<em&gt; Ex Vivo</em&gt; Preparaciones de los intestinos

Describimos un método para visualizar los IEL con la etiqueta GFP utilizando imágenes intravitales del intestino delgado murina mediante microscopía confocal de disco giratorio invertido. Esta técnica permite el seguimiento de células vivas dentro de la mucosa hasta 4 h y se puede utilizar para investigar una variedad de interacciones inmunoepiteliales intestinales.

Imágenes intravitales de linfocitos intraepiteliales en el intestino pequeño murino

Para estudiar cómo el intestino delgado maneja partículas de diferentes tamaños, hemos modificado un método in vivo establecido para determinar el tránsito del intestino delgado.

Estudio de la mecanodetección murina del intestino delgado de partículas luminales

Este protocolo describe un método de inmunotinción de estómago completo modificado a partir de la técnica "Swiss roll" desarrollada originalmente para el intestino murino.

Mapeo espacial mejorado de capas musculares gástricas de ratón utilizando una técnica modificada de Swiss Roll

Un método de transferencia de genes en el cerebro del ratón en desarrollo se describe mediante el uso de un método único quirúrgica y la forma especial de los electrodos. Esta técnica única permite la transfección de ADN de plásmido temporal y espacialmente, lo que ayudará a muchos neurocientíficos en el estudio de desarrollo del cerebro.

Del ratón en el útero de electroporación: Transefection controlada Gene espacio-temporal

Aprenda a analizar la motilidad colónica en ratones mediante imágenes de vídeo y mapas espacio-temporales de alta resolución. Esta técnica permite detectar cambios sutiles en la regulación neural del sistema nervioso entérico.

Imágenes de vídeo y mapas espacio-temporales para Analizar la motilidad gastrointestinal en ratones

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