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DOI: 10.3791/53883-v
Gee-Way Lin1,2, Chun-che Chang1,2,3,4
1Department of Entomology,National Taiwan University, 2Institute of Biotechnology,National Taiwan University, 3Research Center for Developmental Biology and Regenerative Medicine,National Taiwan University, 4Genome and Systems Biology Degree Program,National Taiwan University and Academia Sinica
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Se presenta un protocolo de inmunotinción de montaje completo en embriones de pulgón, en el que se abordan las condiciones críticas para disminuir la tinción de fondo y aumentar la permeabilidad del tejido. Estas condiciones se han desarrollado específicamente para la detección eficaz de la expresión de proteínas en los tejidos embrionarios de los pulgones.
El objetivo general de este protocolo de inmunotinción es detectar la expresión de proteínas en los embriones de pulgón. Se identifican condiciones críticas que aumentan la permeabilidad de los tejidos y disminuyen la tinción de fondo, los cuales son problemas de larga data cuando se tiñen tejidos embrionarios de pulgones. La principal ventaja de esta técnica es que proporciona condiciones específicas para la penetración efectiva de los anticuerpos y la reducción de la tinción de fondo, que generalmente no se describen en un protocolo de inmunotinción estándar.
La primera vez que tuvimos esta idea de esta medida fue cuando estudiamos cómo se especifican las células germinales en un pulgón de guisante en una variedad de insectos, para estudios genómicos y ambientales. La cepa de laboratorio del pulgón del guisante, A. pisum, se recolectó originalmente en el centro de Taiwán y se ha criado en plantas hospederas durante más de 300 generaciones.
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