Name: La investigación de la función de Coronin A en la temprana respuesta del hambre de Dictyostelium discoideum Los ensayos de agregación por (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2016-06-18T15:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 48 s
Description: Aprende ensayos de agregación para estudiar la función de Coronin A en la respuesta temprana al hambre de Dictyostelium discoideum. Este método permite identificar vías de señalización en el desarrollo multicelular.

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Agradecemos al Centro de Existencias de Dictyostelium por las cepas y los reactivos. Este estudio fue financiado por subvenciones de la Fundación Nacional Suiza para la Ciencia y el Cantón de Basilea.

<ol><li> Observar la respuesta del hambre a principios de Dictyostelium discoideum por microscopía de lapso de tiempo. <ol><li> Se cultivan las células o células DH1.10 Cora-deficiente en un erlenmeyer que contiene HL-5 medio (para 1 litro: 5 g de peptona proteosa, 5 g thiotone E peptona, 10 g de glucosa, 5 g de extracto de levadura, 0,35 g de Na 2 HPO 4 * 7H 2 O, 0,35 g KH 2 PO 4, 0,05 g dihidroestreptomicina-sulfato, pH 6.6) a 22 ° C en una incubadora de agitación con una rotación de 160 rpm. Mantener las células a una densidad entre 0,01 x 10 6 células / ml y 2 x 10 6 células / ml. </li><li> Examinar la agregación de células, las células DH1.10 recolección de registro en fase de crecimiento o 21 células con deficiencia de Cora 10 generada en el fondo DH1.10, que se cultiva en un cultivo agitado con HL-5 medio a 22 ° C. Para ello, tomar la cantidad adecuada de células (por lo general entre 10 y 50 ml), se centrifuga durante 3 minutos a 400 xg y se lavan las células dos veces en BSS (NaCl 10 mM, KCl 10, CaCl 2,5 mM 2, pH 6,5). </li><li> Recuento de células utilizando un hemocitómetro. Posteriormente, las células de la placa a una densidad de (5, 10, 20, o 40) x 10 4 células / cm 2 en una placa de 24 pocillos. Deje que se adhieran durante 1 hora a 22 ° C en BSS. </li><li> Visualizar la agregación mediante microscopía de lapso de tiempo como se describe antes de las 10, tomando imágenes cada 135 seg. utilizando una imagen de células vivas configurar equipado con el objetivo de 5X y una cámara de dispositivo de carga acoplada electrones multiplicando automatizado por el software apropiado (véase Tabla de Materiales). </li></ol></li><li> cAMP pulsante de las células de Dictyostelium discoideum durante la inanición. <ol><li> Examinar el efecto de los pulsos de cAMP aplicadas externamente en el desarrollo de las células o células DH1.10 21 10 DH1.10 Cora-deficiente, por la recolección de las células. Para ello, tomar la cantidad adecuada de células (por lo general entre 10 y 50 ml), se centrifuga durante 3 minutos a 400 xg y lavar dos veces en BSS. </li><li> Coucélulas nt utilizando un hemocitómetro y volver a suspender las células a una densidad de 1 x 10 7 células / ml en BSS. Agitar las culturas (160 rpm) a 22 ° C durante 2 horas antes de la aplicación de pulsos. Añadir pulsos de cAMP usando una bomba peristáltica controlada temporizador. Programar la bomba para entregar un impulso de 5 segundos cada 6,5 ​​min de 15 l de 50 nM de cAMP (concentración final) durante un período de 5 horas. </li><li> Recuento de células utilizando un hemocitómetro. Posteriormente, la placa de las células a una densidad de (5, 10, 20, o 40) x 10 4 células / cm 2 en una placa de 24 pocillos. Permitir que se adhieran durante 1 hora en BSS. </li><li> Visualizar la agregación después de 16 horas a 22 ° C por microscopía de campo brillante utilizando un objetivo de 5X. </li></ol></li><li> La inducción de Dictyostelium discoideum desarrollo a través de la exposición al medio condicionado. <ol><li> Preparar medio acondicionado fresco como se describe 22. Recoger las células en fase logarítmica DH1.10-21 o células 10 DH1.10 Cora-deficiente, el temblor de cultoUres con LH-5 medio a 22 ° C utilizando una pipeta, se centrifuga durante 3 minutos a 400 xg y lavar las células tres veces en PBM (0,02 M de fosfato de potasio, 10 mM de CaCl2 y MgCl2 1 mM, pH 6,1). </li><li> Recuento de células utilizando un hemocitómetro, volver a suspender estos en PBM a una densidad de 1 x 10 7 células / ml y agitar durante 20 horas a 110 rpm / 22 ° C. </li><li> Recoger el medio acondicionado después de centrifugación a 400 xg durante 3 min y clarificar por centrifugación a 8000 xg durante 15 min a 4 ° C. </li><li> Medio de filtro acondicionado a través de un filtro de 0,45 micras (ver Tabla de Materiales) y diluir triple en PBM. </li><li> Recuento de células utilizando un hemocitómetro y la placa a una densidad de (5, 10, 20, o 40) x 10 4 células / cm 2 en una placa de 24 pocillos. Deje que se adhieran durante 1 hora a 22 ° C. </li><li> Cambio de sobrenadante de las células con el medio acondicionado preparado previamente. </li><li> Visualizar la agregación de unaespués de 16 horas por microscopía de campo brillante utilizando un objetivo de 5X. </li></ol></li></ol>

<ol><li>Weijer, C. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Morphogenetic+cell+movement+in+Dictyostelium%5BTitle%5D)+AND+%22Semin+Cell+Dev+Biol%22%5BJournal%5D)">Morphogenetic cell movement in Dictyostelium.</a> Semin Cell Dev Biol. 10, 609-619 (1999).</li>
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<li>Jayachandran, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Coronin+1+Regulates+Cognition+and+Behavior+through+Modulation+of+cAMP%2FProtein+Kinase+A+Signaling%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+Biol%22%5BJournal%5D)">Coronin 1 Regulates Cognition and Behavior through Modulation of cAMP/Protein Kinase A Signaling.</a> PLoS Biol. 12, e1001820(2014).</li>
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<li>Mueller, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Regulation+of+T+cell+survival+through+coronin-1-mediated+generation+of+inositol-1%2C4%2C5-trisphosphate+and+calcium+mobilization+after+T+cell+receptor+triggering%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Immunol%22%5BJournal%5D)">Regulation of T cell survival through coronin-1-mediated generation of inositol-1,4,5-trisphosphate and calcium mobilization after T cell receptor triggering.</a> Nat Immunol. 9, 424-431 (2008).</li>
<li>de Hostos, E. L., Bradtke, B., Lottspeich, F., Guggenheim, R., Gerisch, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Coronin%2C+an+actin+binding+protein+of+Dictyostelium+discoideum+localized+to+cell+surface+projections%2C+has+sequence+similarities+to+G+protein+beta+subunits%5BTitle%5D)+AND+%22EMBO+J%22%5BJournal%5D)">Coronin, an actin binding protein of Dictyostelium discoideum localized to cell surface projections, has sequence similarities to G protein beta subunits.</a> EMBO J. 10, 4097-4104 (1991).</li>
<li>Shina, M. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Redundant+and+unique+roles+of+coronin+proteins+in+Dictyostelium%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Mol+Life+Sci%22%5BJournal%5D)">Redundant and unique roles of coronin proteins in Dictyostelium.</a> Cell Mol Life Sci. 68, 303-313 (2011).</li>
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<li>Gomer, R. H., Yuen, I. S., Firtel, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+secreted+80+x+10%283%29+Mr+protein+mediates+sensing+of+cell+density+and+the+onset+of+development+in+Dictyostelium%5BTitle%5D)+AND+%22Development%22%5BJournal%5D)">A secreted 80 x 10(3) Mr protein mediates sensing of cell density and the onset of development in Dictyostelium.</a> Development. (112), 269-278 (1991).</li>
<li>Iijima, N., Takagi, T., Maeda, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+proteinous+factor+mediating+intercellular+communication+during+the+transition+of+Dictyostelium+cells+from+growth+to+differentiation%5BTitle%5D)+AND+%22Zoological+science%22%5BJournal%5D)">A proteinous factor mediating intercellular communication during the transition of Dictyostelium cells from growth to differentiation.</a> Zoological science. 12, 61-69 (1995).</li>
<li>Mehdy, M. C., Firtel, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+secreted+factor+and+cyclic+AMP+jointly+regulate+cell-type-specific+gene+expression+in+Dictyostelium+discoideum%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">A secreted factor and cyclic AMP jointly regulate cell-type-specific gene expression in Dictyostelium discoideum.</a> Mol Cell Biol. 5, 705-713 (1985).</li>
<li>Jain, R., Yuen, I. S., Taphouse, C. R., Gomer, R. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+density-sensing+factor+controls+development+in+Dictyostelium%5BTitle%5D)+AND+%22Genes+Dev%22%5BJournal%5D)">A density-sensing factor controls development in Dictyostelium.</a> Genes Dev. 6, 390-400 (1992).</li>
<li>Loomis, W. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cell+signaling+during+development+of+Dictyostelium%5BTitle%5D)+AND+%22Dev+Biol%22%5BJournal%5D)">Cell signaling during development of Dictyostelium.</a> Dev Biol. 391, 1-16 (2014).</li>
</ol>

No se declaran conflictos de intereses.

Las proteínas Coronin se encuentran en la mayoría taxones del clado eucariota. Dictyostelium discoideum coronin A, el homólogo de coronin de mamíferos 1, está implicado en la respuesta del hambre temprano, ya Coronin A-deficiente células no son capaces de formar centros de agregación durante el temprano desarrollo ciclo de 10. Para poder evaluar cuantitativamente y con precisión el retraso en el desarrollo entre las cepas, un microscopio de imágenes de células vivas puesta a punto con el controlador ...

La familia de proteínas coronin está altamente conservada en todo eucariotas. Estas proteínas se caracterizan por la presencia de un triptófano-aspartato amino-terminal (WD) región seguido de una región única conectado a un dominio espiral de la bobina carboxi-terminal 13,14 repetir que contienen (Figura 1). Coronins han sido implicados en una variedad de funciones celulares, incluyendo la regulación del citoesqueleto y la transducción de señales 12. En los mamíferos, hasta seis moléculas cortas coronin (coronin 1-6), así como un &#39;tándem&#39; coronin 7, se pueden co-expresaron 12,15. Coronin 1 es el miembro de la familia más ampliamente estudiado y ha demostrado estar implicado en la destrucción de patógenos, la supervivencia de las células T y la señalización neuronal. ¿Cómo, exactamente, coronin 1 lleva a cabo estas actividades aún no está claro. Mientras coronin 1 se muestra para regular Ca2 + y cAMP-dependiente de señalización, así como F-actina del citoesqueleto de modulación 16-18, el potencial de co-expresión de hasta 7 miembros de la familia de los mamíferos ha hecho que sea difícil para el estudio de la función molecular de coronins en estos sistemas, debido a las posibles redundancias. A diferencia de los organismos mamíferos, la discoideum eucariota inferior Dictyostelium expresa sólo dos miembros de la familia (coronin coronin A, el ortólogo de mamífero coronin 1 y coronin B, el ortholog de ​​mamíferos coronin 7) con funciones aparentemente no redundantes 15,19,20. Este hecho hace que Dictyostelium discoideum un modelo potente para estudiar la función de coronins. Para estudiar el papel de coronin A en Dictyostelium discoideum, se indujo el ciclo de desarrollo por el hambre en placas de cultivo de tejidos que contienen tampón de equilibrado solución salina (BSS) utilizando ya sea células de tipo salvaje o células que carecen de Coronin A 10. Se encontró que las células que carecen coronin A no fueron capaces de formar agregados multicelulares a la inanición. Para una evaluación cuantitativa exacta de este fenotipo laimágenes de células vivas automatizado descrito en este protocolo es una herramienta vital. El defecto en la iniciación de la respuesta del hambre temprano en las células que carecen Coronin A puede ser rescatado por el suministro de pulsos de cAMP, lo que sugiere que Coronin A actúa aguas arriba de la cascada de AMPc. La aplicación exógena de pulsos de AMPc para simular el inicio del desarrollo ha sido utilizado por varios laboratorios en el pasado 8,9. Sin embargo, este procedimiento también es conocido por ser dependiente de las densidades de células y el tiempo altamente. Por lo tanto, el protocolo descrito aquí tiene como objetivo reducir estas variabilidades con el fin de garantizar un alto grado de reproducibilidad. En conjunto, las técnicas utilizadas en estos estudios proporcionan herramientas robustas para investigar funciones de las proteínas durante las primeras etapas del ciclo de desarrollo de Dictyostelium discoideum y tienen el potencial de identificar arriba, así como efectores aguas abajo de Coronin una función.

<table><tbody><tr><td>Medios HL-5 (para 1 L: 5 g de peptona proteosa, 5 g de peptona E de tiotona, 10 g de glucosa, 5 g de extracto de levadura, 0,35 g de Na2HPO4*2H2O, 0,35 g de KH2PO4, 0,05 g dihidroestreptomicina-sulfato, pH 6,6)</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Proteosa peptona</td><td>BD Bioscience</td><td>211693</td><td></td></tr><tr><td>Puntona E BD</td><td>Bioscience</td><td>211684</td><td></td></tr><tr><td>Extracto de levadura</td><td>BD Bioscience</td><td>212750</td><td></td></tr><tr><td>Glucosa</td><td>AppliChem</td><td>A3666</td><td></td></tr><tr><td>Na2HPO4*2H2O</td><td>Fluka</td><td>71643</td><td></td></tr><tr><td>KH2PO4</td><td>AppliChem</td><td>A1043</td><td></td></tr><tr><td>dihidroestreptomicina-sulfato</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>D1954000</td><td></td></tr><tr><td>PBM (0,02 M fosfato de potasio, 10 &mu; M CaCl2, y l mM MgCl2, pH 6.1)</td><td></td><td></td><td>autofabricado</td></tr><tr><td>BSS (10 mM NaCl, 10 mM KCl, 2.5 mM CaCl2, pH 6.5)</td><td></td><td></td><td>autoproducido</td></tr><tr><td>0.45-&mu; m Filtropure S filtro</td><td>Sarstedt</td><td>83.1826</td><td></td></tr><tr><td>Falcon 24 pocillos Placa de cultivo de tejidos</td><td>Fisher Scientific</td><td>08-772-1H</td><td></td></tr><tr><td>Microscopio Cellobserver</td><td>Zeiss</td><td></td> hecho <td>a medida</td></tr><tr><td>Software AxioVision</td><td>Zeiss</td><td></td><td></td></tr><tr><td>IPC Microprocesador&ndash; bomba dosificadora controlada</td><td>ISMATEC</td><td>ISM 931</td><td></td></tr><tr><td>Microscopio Axiovert 135M</td><td>Zeiss</td><td>491237-0001-000</td><td></td></tr><tr><td>agitador de incubación</td><td>Inforst HT Minitron</td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

la investigación de la función de coronin a en la temprana respuesta del hambre de<em&gt; dictyostelium discoideum</em&gt; los ensayos de agregación por

Investigating the Function of Coronin A in the Early Starvation Response of Dictyostelium discoideum by Aggregation Assays

Dictyostelium discoideum amebas se encuentra en el suelo, se alimentan de bacterias. Cuando las fuentes de alimentos se vuelven escasos, secretan factores de iniciar un programa de desarrollo pluricelular, durante el cual las células individuales chemotax hacia los centros de agregación 1-4. Este proceso es dependiente de la liberación de adenosina monofosfato cíclico (cAMP) 5. cAMP se produce en ondas a través de la acción concertada de la adenilato ciclasa y las fosfodiesterasas, y se une a receptores de cAMP acoplados a proteínas G 6,7. Un ensayo ampliamente utilizado para analizar los mecanismos implicados en el ciclo de desarrollo del menor eucariota Dictyostelium discoideum se basa en la observación de la agregación celular en condiciones sumergidas 8,9. Este protocolo describe el análisis de la función de coronin A en el ciclo de desarrollo por el hambre en placas de cultivo de tejidos sumergidos en solución salina equilibrada (BSS) 10. Coronin A es un miembro de la pr ampliamente conservadafamilia Otein de coronins que han sido implicados en una amplia variedad de actividades de 11,12. Dictyostelium células que carecen de Coronin A no son capaces de formar agregados multicelulares, y este defecto puede ser rescatado por el suministro de pulsos de cAMP, lo que sugiere que Coronin A actúa aguas arriba de la cAMP en cascada 10. Las técnicas descritas en estos estudios proporcionan herramientas robustas para investigar funciones de las proteínas durante las etapas iniciales del ciclo de desarrollo de Dictyostelium discoideum aguas arriba de la cascada de AMPc. Por lo tanto, la utilización de este ensayo de agregación puede permitir el estudio adicional de coronin una función y avanzar en nuestra comprensión de la biología coronin.

Las células deficientes en coronin Un espectáculo de un defecto en el desarrollo temprano (Figura 2). En ausencia de Coronin A las células no son capaces de formar agregados multicelulares, que es el paso inicial durante el ciclo de desarrollo de Dictyostelium discoideum. Por lo tanto, coronin A parece jugar un papel durante la respuesta del hambre temprano y / o la señalización de cAMP. De hecho, la falta de formación de agregados multicelulares en ausencia de ...

La ameba social Dictyostelium discoideum experimenta una transición de desarrollo hacia un organismo multicelular cuando se le priva de hambre. La proteína coronina A, conservada evolutivamente, desempeña un papel crucial en el inicio del desarrollo. Utilizando ensayos de agregación como método principal, nuestro objetivo es dilucidar el papel de la coronina A en el desarrollo temprano.

La investigación de la función de Coronin A en la temprana respuesta del hambre de<em&gt; Dictyostelium discoideum</em&gt; Los ensayos de agregación por

Dictyostelium discoideum amoeba are found in soil, feeding on bacteria. When food sources become scarce, they secrete factors to initiate a multicellular ...

El objetivo general de este procedimiento experimental es investigar la respuesta temprana a la privación de nutrientes dependiente de Coronina-A en Dictyostelium discoideum. Este método puede ayudar a responder preguntas clave en el campo de la Biología del Desarrollo, como la identificación de vías de señalización y factores implicados en el desarrollo temprano de Dictyostelium discoideum. La principal ventaja de esta técnica es que tiene el potencial de proporcionar una herramienta para el cribado automatizado y de alto rendimiento de factores inductores del desarrollo y proteínas involucradas en la señalización del desarrollo temprano.Generalmente, las personas nuevas en este método tendrán dificultades debido a las múltiples variables inherentes al ensayo, como las densidades celulares, el tiempo de adherencia y el tiempo de desarrollo. Para comenzar este procedimiento, cultive células DH1.10 o células deficientes en corA en un matraz Erlenmeyer que contenga medio HL-5, a 22 grados Celsius, en un incubador con agitación a 160 rpm. Mantenga las células a una densidad entre uno por diez a la cuatro y dos por diez a la seis células por mililitro.Para examinar la agregación celular, recoger 10 a 50 mililitros de células DH1.10 en fase logarítmica o células deficientes en corA generadas en el fondo genético DH1.10. Centrifugarlas durante tres minutos a 400 ×g. Luego lavar las células dos veces en BSS.Posteriormente, cuente las células utilizando un hemocitómetro. A continuación, siembre las células en una placa de 24 pocillos. Deje que se adhieran durante una hora a 22 grados Celsuis en BSS.Luego, visualice la agregación celular mediante microscopía de lapso de tiempo y tome imágenes cada 135 segundos. Para examinar el efecto de los pulsos de AMP cíclico aplicados externamente sobre el desarrollo de las células DH1.10, o de las células deficientes en corA DH1.10, recolecte de 10 a 50 mililitros de las células y centrifúgelos durante tres minutos a 400 ×g. Después, lávelas dos veces en BSS.Cuente las células utilizando un hemocitómetro. Posteriormente, re-suspenda las células a una densidad de uno por diez a la siete células por mililitro en BSS. A continuación, agite los cultivos a 22 grados Celsius durante dos horas a 160 rpm antes de aplicar los pulsos.A continuación, aplique pulsos de AMP cíclico utilizando una bomba peristáltica controlada por un temporizador. Programe la bomba para que entregue un pulso de cinco segundos de AMP cíclico cada seis minutos y medio durante un período de cinco horas. Un paso crítico consiste en asegurar que la punta de inyección de AMP cíclico no permanezca continuamente sumergida en la solución, sino que solo se sumerja periódicamente en las ondas generadas por el agitador.Después de la aplicación de AMP cíclico, cuente nuevamente las células utilizando un hemocitómetro. Luego, siembre las células en una placa de 24 pocillos y permita que se adhieran durante una hora en BSS. Después de 16 horas, visualice la agregación celular a 22 grados Celsius, mediante microscopía de campo brillante utilizando un objetivo de cinco x.En este procedimiento, prepare medio condicionado fresco recolectando células en fase logarítmica de DH1.10 o células deficientes en corA de DH1.10 a partir de cultivos agitados en medio HL5, a 22 grados Celsius. Centrifugue las células durante tres minutos a 400 ×g. Posteriormente, lávelas tres veces en PBM.Posteriormente, cuente las células utilizando un hemocitómetro. Luego, re-suspenda las células en PBM a una densidad de uno por diez a la siete células por mililitro y agítelas durante 20 horas a 22 grados Celsius y 110 rpm. A continuación, centrifugue las células a 400 × g durante tres minutos, seguido de la recolección del medio acondicionado. Posteriormente, clarifique el medio mediante centrifugación a 8.000 × g durante 15 minutos a cuatro grados Celsius.Luego, filtre el medio condicionado a través de un filtro de 0,45 micrómetros y dilúyalo tres veces en PBM. Cuente las células utilizando un hemocitómetro, siémbrelas en una placa de 24 pocillos y déjelas adherir durante una hora a 22 grados Celsius. A continuación, cambie el sobrenadante de las células por medio condicionado previamente preparado.Después de 16 horas, visualice la agregación celular mediante microscopía de campo claro utilizando un objetivo de cinco aumentos. Aquí, las células deficientes en Coronina-A presentan un defecto en el desarrollo temprano y son incapaces de formar agregados multicelulares, que es la etapa inicial durante el ciclo de desarrollo de Dictyostelium discoideum. En esta figura, las células silvestres vegetativas y las células deficientes en corA se lavaron y se sometieron a ayuno durante dos horas antes de ser pulsadas, con o sin 15 animal o AMP cíclico, cada seis minutos y medio durante cinco horas en suspensión.La aplicación de pulsos exógenos de AMP cíclico restauró completamente el fenotipo de tipo salvaje. En esta figura, células de tipo salvaje y células deficientes en corA en crecimiento exponencial se lavaron en PBM, se sembraron en placas de múltiples pozos y se incubaron en medio acondicionado obtenido de células de tipo salvaje o células deficientes en corA en estado de ayuno. Las imágenes se tomaron 16 horas después de sembrar las células.Dictyostelium discoideum deficiente en corA fueron capaces de producir todos los factores necesarios para la inducción del desarrollo, pero no pudieron responder a ellos. Una vez dominada, esta técnica puede realizarse en 20 horas, incluido el tiempo de incubación, si se lleva a cabo correctamente. Al intentar este procedimiento, es importante recordar que, para diferentes cepas, será necesario ajustar múltiples variables del ensayo, como las densidades celulares, el tiempo de adherencia y el tiempo de desarrollo.Tras seguir este procedimiento, se puede realizar una fraccionamiento bioquímico y un análisis proteómico posterior para identificar factores implicados en la respuesta temprana al ayuno de Dictyostelium discoideum. Después de ver este video, se deberá tener una buena comprensión de cómo inducir el desarrollo temprano en Dictyostelium discoideum en condiciones sumergidas, utilizando medios acondicionados o pulsos de AMP cíclico.

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Biología

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