Name: El Ensayo de fatiga rueda de ardilla: Un ensayo sencillo, de gran procesamiento de comportamiento a fatiga similar para el ratón (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2016-05-31T15:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 25 s
Description: Aprende a medir el comportamiento tipo fatiga en ratones mediante un ensayo en cinta rodante con inclinación de 10 grados. Este método permite evaluar intervenciones anti-fatiga de forma rápida y eficiente.

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Esta investigación fue apoyada por el Programa de Investigación Intramuros de los NIH, el Instituto Nacional de Diabetes y Enfermedades Digestivas y Renales (NIDDK), Subvención 1Z01 DK011006. Deseamos agradecer a Michele Allen por brindar asistencia técnica, a Eleni Solomos por su asistencia editorial y al personal veterinario y de cuidado animal de los NIH por brindar atención a los ratones utilizados en el desarrollo de este método.

Este procedimiento fue aprobado por el Instituto Nacional de Diabetes y Enfermedades Digestivas y Renales de Cuidado de Animales y el empleo. 1. Preparación <ol><li> Para permitir la rápida identificación de cada ratón antes de la prueba, tatuar las colas de todos los ratones para ser entrenados y evaluados con marcas de identificación. NOTA: Este paso es opcional. marcador permanente o otros métodos de identificación se pueden utilizar como una alternativa a los tatuajes. </li><li> Antes de la formación y los ratones de prueba, asegúrese de que la cinta esté en una superficie plana y se establece en la cinta de correr en el ángulo deseado de inclinación (ángulo recomendado de inclinación: 10 °, que se mantiene constante a través de la formación y las pruebas) y establecer la frecuencia de descarga eléctrica y la intensidad adecuada (recomendado: 2 Hz, 1,22 mA). NOTA: La descarga eléctrica utilizada debe producir no más de una sensación de hormigueo leve cuando es tocado por un dedo sin guante y debe ser entregado en un fash pulsátiliones (con cada descarga que dura 200 ms). </li><li> Coloque una hoja de papel en blanco de carnicero o una almohadilla absorbente debajo de la caminadora para recoger bolos fecales y la orina durante el entrenamiento y prueba. </li><li> Coloque una hoja de papel o una almohadilla absorbente sobre la tercera parte de la carcasa del tapiz rodante (es decir, la tapa de plástico transparente que cubre los carriles de caminadora) más alejado de la rejilla de choque. NOTA: Este paso es opcional, pero se creará un espacio más oscuro y puede proporcionar estímulo adicional para evitar la parte inferior de la cinta de correr. </li><li> Si planea utilizar un cepillo de alambre para proporcionar una motivación adicional durante el entrenamiento, asegurarse de que uno está fácilmente disponible antes de comenzar las sesiones de entrenamiento. </li><li> Asegúrese de que cualquier medicamento o método para inducir y / o aliviar la fatiga están disponibles y se pueden preparar o llevaron a cabo durante el paso de 2.14. </li></ol> 2. Los ratones entrenamiento para usar la rueda de ardilla NOTA: La formación es necesaria para asegurar que los ratonesestán familiarizados con la cinta y de la tarea y puede realizar adecuadamente cuando se prueba. Si la mayoría de los ratones siendo entrenado están recibiendo choques frecuentes o mal desempeño durante cualquier sesión de entrenamiento de otro modo, las sesiones de entrenamiento adicionales deben llevarse a cabo. En el primer día, la mayoría de los ratones se sorprendieron varias veces. Para el segundo día de entrenamiento, los ratones deben ser rara vez hacer contacto con la red. Si un ratón muestra consistentemente un rendimiento deficiente formación, deberá ser retirado del estudio. Para ratones hembra C57BL / 6NCr, esta es una ocurrencia rara (menos de 1% se han eliminado de los estudios debido a un bajo rendimiento de formación), pero debe tenerse en cuenta que otras cepas pueden realizar de manera diferente durante el entrenamiento. <ol><li> Con la cinta de correr fuera (y la velocidad se ajusta a 0 m / min), levante los ratones individualmente por los ratones de cola y colocar en filas separadas de una cinta de correr ratón. Prontitud activar la cuadrícula correspondiente después de colocar cada ratón en la cinta. Asegurar que los ratones se colocan directamente on la cinta sin fin. NOTA: La cantidad de tiempo y la distancia de cada ratón se mantiene por su cola debe reducirse al mínimo mediante la colocación de la jaula alrededor de la cinta de correr antes de transferir los ratones para la cinta y / o permitir que los ratones de pie sobre una plataforma sólida (por ejemplo, una tapa de jaula de alambre ) hasta que estén cerca de la cinta y el experimentador está listo para colocarlos en la cinta de correr. </li><li> Permitir a los ratones para explorar libremente la cinta de correr durante 1-3 minutos o hasta que cada ratón ha explorado su carril y / o recibido al menos un choque de la red. </li><li> Encienda la cinta de correr y poco a poco aumentar la velocidad hasta que comienza a moverse (aproximadamente 1,5 a 3,0 m / min). Supervisión de todos los ratones para asegurar que comienzan a caminar. Si un ratón no comienza a pie o camina hacia la rejilla de choque, estar preparado para intervenir pulsando el ratón con un cepillo de alambre o cosquilleo cola. </li><li> Poco a poco aumentar la velocidad de la cinta 8 m / min. Iniciar un temporizador y seguir el comportamiento de vigilancia. </li><li> Aumentar la velocidad de la cinta de9 m / min a 5 min, 10 m / min a 7 min, y detener la cinta de correr en 10 min. </li><li> Permitir que los ratones para explorar brevemente la cinta de correr, a continuación, quitar y volver cada uno a su jaula. </li><li> Limpiar la cinta y rejilla con alcohol y vuelva a colocar el papel o almohadilla absorbente debajo de la cinta de correr. </li><li> Para capacitar a los ratones, repita los pasos 2.1 a 2.7. NOTA: Deje que el alcohol se seque antes de colocar nuevos ratones en la cinta. </li><li> En el segundo día de entrenamiento, repita el paso 2.1. Girar en la cinta y aumentar la velocidad de 10 m / min. Iniciar un temporizador. NOTA: Velocidad del tapete se puede aumentar más rápidamente que en el primer día de entrenamiento. </li><li> Aumentar la velocidad de la cinta de 11 m / min a 5 min, 12 m / min a 10 min, y parar la máquina para correr a los 15 min. </li><li> Retire los ratones y devolverlos a sus jaulas. </li><li> Limpiar la cinta y rejilla con alcohol y vuelva a colocar el papel o almohadilla absorbente debajo de la cinta de correr. Para capacitar a los ratones, repita los pasos 2.9 a través de 2.12. </li><li>Realizar días adicionales (3 días) de la formación en la misma manera que el segundo día. NOTA: Este paso es opcional, pero se recomienda encarecidamente si la mayoría o todos los ratones (del mismo sexo y la tensión) siendo entrenados dificultad de visualización con la tarea. Los ratones generalmente pueden funcionar bien en el paso 3 cuando han sido entrenados durante 3 días (es decir, con un día adicional de capacitación), aunque días más o menos de entrenamiento pueden ser apropiados en función de su rendimiento durante el segundo día de entrenamiento y la duración de paso 2.14. </li><li> Deje por lo menos un día completo para pasar en el que los ratones tienen ninguna exposición a la cinta de correr antes de continuar con el paso 3. NOTA: Cualquier medicamento (s) que se utiliza para inducir y / o aliviar la fatiga se debe administrar durante este paso. NOTA: Este período de tiempo se puede variar en longitud y se utiliza para inducir intervenciones para la fatiga y / o de prueba para reducir o eliminar la fatiga. Si la prueba de los ratones más de 7 días después de completar la formación, un estudio piloto se recomiendaverifique que los ratones utilizados llevará a cabo durante la prueba. </li></ol> 3. Ensayo de fatiga rueda de ardilla NOTA: En esta prueba, el comportamiento a fatiga similar se define como pasar 5 segundos consecutivos en la &quot;zona de la fatiga&quot;. La zona de la fatiga se define como la región que abarca la parte de la cinta sin fin dentro de aproximadamente 1 longitud de cuerpo de la rejilla de choque, así como la red, en sí. Antes de la prueba, asegúrese de que el punto de delimitación de esta zona es claro para el experimentador, por ejemplo, mediante la aplicación de una marca a la parte superior o lateral de los carriles de cinta rodante. <ol><li> Ajuste la velocidad de la cinta de 12 m / min. No inicie la cinta de correr. Asegúrese de que las rejillas de choque están apagados. </li><li> Individualmente colocar los ratones en carriles separados de la cinta de correr. Activar la cuadrícula correspondiente inmediatamente después de la colocación de cada ratón en la cinta. </li><li> Al mismo tiempo iniciar la cinta y un cronómetro. NOTA: No intervenir durante las pruebas, excepto para eliminar los ratonesque cumplen con el criterio para la eliminación (véase el paso 3.5). </li><li> Aumentar la velocidad de la cinta como se indica en la Tabla 1. Observe cuidadosamente todos los ratones durante toda la prueba. NOTA: La cinta de correr velocidades aparece en la Tabla 1 fueron seleccionados sobre la base de las observaciones de la hembra adulta ratones C57BL / 6NCr. Velocidades más altas de caminadora pueden ser apropiados para mayor (por ejemplo, outbred ratones CD-1) o más ratones atléticos. </li><li> Si un ratón permanece en la zona de fatiga continua durante 5 segundos, extraiga inmediatamente el ratón de la cinta de correr y registrar la duración y la distancia que corrió. </li><li> Cuando no hay ratones permanecen en la cinta, detener la cinta de correr. Limpiar la cinta y rejilla con alcohol y vuelva a colocar el papel o almohadilla absorbente debajo de la cinta de correr. </li><li> Para probar los ratones adicional, repita los pasos 3.1 a 3.6. NOTA: Este paso es opcional. </li></ol>

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</ol>

Los autores no tienen nada que revelar.

El actual protocolo se describe cómo utilizar una cinta de correr ratón para medir la resistencia a la fatiga similar. Este método tiene varias ventajas sobre VWRA, un ensayo preclínico común de comportamiento a fatiga-similares. VWRA requiere que los ratones eligen para interactuar con el aparato de ensayo. Como resultado, algunas cepas puras de ratones raramente interactúan con la rueda 16 y se ejecutan tan poco que puede ser difícil o imposible identificar una disminución fatiga inducida por la actividad. ...

La fatiga afecta a una amplia gama de personas,, pueden reducir notablemente la calidad de vida, y con frecuencia tiene una patogenia incierta o desconocida. La fatiga relacionada con el cáncer (CRF), por ejemplo, es experimentado por la mayoría de los pacientes con cáncer sometidos a tratamiento y puede persistir mucho tiempo después del tratamiento del cáncer se ha completado y en ausencia de cáncer detectable 1. Por otra parte, la fatiga es también un síntoma prominente en muchas otras enfermedades y trastornos, incluyendo el síndrome de fatiga crónica, depresión, diabetes, y la fibromialgia. Afortunadamente, existen intervenciones no farmacológicas que son capaces de ayudar a algunas personas que experimentan fatiga (por ejemplo, el ejercicio puede reducir CRF para algunos pacientes con cáncer de mama 2,3), pero muchas personas aún carecen de tratamiento efectivo. Además, no se han encontrado los tratamientos con fármacos existentes para la CRF a ser ampliamente, en todo caso, eficaz 4-7. A pesar de la necesidad terapéutica y la falta de Drug opciones de tratamiento, los ensayos preclínicos de fatiga para ayudar en el descubrimiento y desarrollo de nuevos tratamientos de fatiga se carece, especialmente en modelos animales. Uno de los únicos ensayos preclínicos de la fatiga de los estudios con roedores es la actividad voluntaria de la rueda de rodadura (VWRA) 9-15, en el que los ratones u otros roedores se les da acceso libre a una rueda para correr y se registra su actividad funcionamiento diario. En muchos estudios, VWRA es la única medida de comportamiento a fatiga similar, con el comportamiento a la fatiga como definido (en cualquier VWRA o el protocolo actual) como una disminución de la actividad física medida en el grupo experimental. Aunque VWRA puede proporcionar una medida longitudinal útil de la fatiga similar comportamiento, es un ensayo relativamente bajo rendimiento, funcionamiento varía considerablemente entre las cepas puras ratón 16, y se requiere que los sujetos a ser alojados por separado, lo que puede causar cambios en el rendimiento comportamiento y prueba 17-19. Otros ensayos, como la vigilancia del comportamiento jaula yanálisis, también puede proporcionar la recopilación de datos continua y algunos sistemas puede permitir a los sujetos que se encuentran en pares 20. Estos ensayos tienen utilidad, pero pueden ser menos sensible como medio de detección de comportamiento a fatiga similar y, como rueda de funcionamiento, también son de bajo rendimiento. En contraste con VWRA, pruebas de esfuerzo del ratón no dependen de la actividad voluntaria y se puede completar en un corto período de tiempo, lo que permite un mayor rendimiento. En comparación con VWRA, estas pruebas emplean motivadores externos. En concreto, por lo general hay una rejilla metálica electrificada situada en la parte trasera de la cinta en movimiento para proporcionar ratones con una descarga eléctrica en caso de que deje de funcionar. Además de esta rejilla de choque, los ratones pueden ser motivados para correr en la cinta a través de otros métodos, incluyendo el pinchar, empujando, o tocándolos con una mano, cepillo, u otra herramienta y dirigir bocanadas cortas de aire a ellos. En lugar de la fatiga, pruebas de esfuerzo de ratón se utilizan a menudo para medir aeróbico y / o anaerOBIC la capacidad de ejercicio 21-25. Los ratones son motivados a correr hasta que son incapaces de continuar o no quieren correr en la cinta como un medio de escapar a nuevos shocks eléctricos. Las pruebas a continuación, termina cuando los ratones se reúnen el criterio de agotamiento. En estos protocolos, para asegurar que los ratones alcanzan cierto agotamiento fisiológico, el criterio para el agotamiento se define a menudo como pasar cinco segundos continuos que pone en la parte superior de la rejilla de choque y de no continuar funcionando a pesar de los repetidos estímulos aversivos. Por lo tanto, el comportamiento a la fatiga como puede estar enmascarado en las pruebas típicas de cinta rodante debido a la fuerte repulsión de la motivación externa y el criterio para finalizar la prueba. Curiosamente, y en contraste con muchos otros estudios que utilizan cintas de correr de roedores, una publicación reciente describe otra versión de una prueba de fatiga cinta de correr, que fue utilizado como parte de un examen de los efectos de estrés social en ratones 26. Aunque el método utilizado por este grupo difería marcadamente de la current protocolo (es decir, que emplea una cinta de correr de un solo carril y requiere 10 segundos de descarga eléctrica como criterio para poner fin a su prueba), el estudio pone de manifiesto la utilidad y el interés en el desarrollo de una prueba de fatiga rápida, sencilla de usar la caminadora ratón. La fatiga es probable que sea detectable por medios distintos de rueda de rodadura y alteraciones en los comportamientos de rutina. CRF hace que los pacientes se sientan agotados por una cantidad menor de la fatiga muscular, tal como se determina por análisis electromiográfico, que las personas sin CRF 27. Además, motivación reducida se ha observado en y se mide por varias escalas de medición de la fatiga humana 28,29. Por lo tanto, un ensayo preclínico útil de comportamiento a la fatiga como debe distinguir entre ratones sanos y fatigado sobre la base de una medida distinta de la capacidad fisiológica y no debe disminuciones oscuros en la motivación. Para lograr este fin, evitando las limitaciones de VWRA y otros ensayos, los actuales wa métodos desarrollado mediante la adaptación de la prueba de esfuerzo ratón. Este método utiliza una rejilla de choque como el único factor de motivación externa para hacer los ratones correr en la caminadora. Los ratones aprenden rápidamente que la red proporciona un estímulo aversivo y se moverá rápidamente lejos de él cuando se coloca en la cinta y mantener una cierta distancia de él cuando se ejecuta. Cuando los ratones fatiga, que pasan cada vez más tiempo hacia la parte posterior de la cinta de correr en lugar de mantener la velocidad hacia el extremo frontal. Por lo tanto, el criterio para la finalización de la prueba en este protocolo está gastando cinco segundos continuos en la zona de la fatiga designado (es decir, la parte posterior de la cinta de correr, que van desde aproximadamente una longitud de cuerpo de la red de choque, e incluyendo, la rejilla de choque). Esto se aprovecha de la naturaleza aversiva de la red sin necesidad de ratones para recibir muchos o ningún choques reales después del entrenamiento. Al permitir que los ratones para completar las pruebas utilizando el criterio actual en lugar de agotamiento (como se define anteriormente),este método proporciona un medio de la utilización de la cinta para medir el comportamiento a la fatiga como en lugar de su capacidad fisiológica máxima (o casi máxima). Por lo tanto, este método puede proporcionar un ensayo simple, de alto rendimiento de comportamiento a la fatiga como en ratones y puede servir ya sea como una medida independiente o complementaria a otros ensayos de comportamiento a fatiga-similares.

<table><tbody><tr><td>Exer 3/6 Cinta de correr para animales</td><td>Columbus Instruments</td><td>1050-RM Exer-3/6</td><td></td></tr><tr><td>Cronómetro</td><td>Daigger EF24490M</td><td>&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>Cepillo de alambre</td><td>Fisher Scientific</td><td>03-572-5</td><td></td></tr><tr><td>Aire comprimido</td><td>Dust-Off</td><td>FALDSXLPW</td><td></td></tr><tr><td>Almohadillas absorbentes</td><td>Daigger EF2175CX</td><td>&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>Papel de carnicero</td><td>Newell Paper Company</td><td>4620510</td><td></td></tr><tr><td>Alcohol (70%)</td><td>Fisher Scientific</td><td>BP82011</td><td></td></tr></tbody></table>

el ensayo de fatiga rueda de ardilla: un ensayo sencillo, de gran procesamiento de comportamiento a fatiga similar para el ratón

The Treadmill Fatigue Test: A Simple, High-throughput Assay of Fatigue-like Behavior for the Mouse

La fatiga es un síntoma importante en muchas enfermedades y trastornos y reduce la calidad de vida de muchas personas. La falta de patogénesis claro y el fracaso de las intervenciones actuales para tratar adecuadamente la fatiga en todos los pacientes deja una necesidad de nuevas opciones de tratamiento. A pesar de la necesidad terapéutica y la importancia de la investigación preclínica para ayudar a identificar nuevos tratamientos prometedores, algunos ensayos preclínicos de la fatiga están disponibles. Por otra parte, el ensayo preclínico más común usado para evaluar el comportamiento de fatiga similares a, la rueda de carrera voluntaria, no es adecuado para el uso con algunas cepas de ratones, puede no ser sensible a los fármacos que reducen la fatiga, y tiene un rendimiento relativamente bajo. El actual protocolo describe una novela, ensayo preclínico no voluntaria del comportamiento a fatiga similar, el ensayo de fatiga cinta de correr, y proporciona evidencia de su eficacia en la detección de resistencia a la fatiga, al igual que en los ratones tratados con un fármaco de quimioterapia conocidos por causar fatiga en los seres humanos y la fatiga comportamiento -como en el ánimals. Este ensayo puede ser una alternativa beneficiosa para rueda para correr, como un comportamiento a la fatiga y al igual que las posibles intervenciones pueden ser evaluadas en un mayor número de ratones durante un período de tiempo más corto, lo que permite el descubrimiento más rápido de nuevas opciones terapéuticas.

Este protocolo permite comportamiento a fatiga similar a medirse en ratones utilizando una cinta de correr. Los datos presentados en esta sección se obtuvo mediante formación y las pruebas 3 grupos separados de ratones usando el protocolo actual (excluyendo la Figura 1A y 1C). Para inducir la fatiga, 5-fluorouracilo (5-FU), un fármaco de quimioterapia citotóxica se sabe que causa fatiga en los seres humanos 30 y comportamiento a la fatiga como...

La fatiga es un síntoma común, poco tratado y frecuentemente poco comprendido en muchas enfermedades y trastornos. Los nuevos ensayos preclínicos de la fatiga pueden ayudar a mejorar la comprensión actual y el tratamiento futuro de la fatiga. Con ese fin, el protocolo actual proporciona un medio novedoso para medir el comportamiento similar a la fatiga en el ratón.

El Ensayo de fatiga rueda de ardilla: Un ensayo sencillo, de gran procesamiento de comportamiento a fatiga similar para el ratón

Fatigue is a prominent symptom in many diseases and disorders and reduces quality of life for many people. The lack of clear pathogenesis and failure of ...

El objetivo general de este procedimiento es medir el comportamiento similar a la fatiga en ratones para establecer un modelo de fatiga y comprobar si una intervención puede revertir dicha fatiga. Este método puede ayudar a responder preguntas clave relacionadas con la fatiga, como qué intervenciones pueden ayudar a reducirla o revertir los modelos de fatiga. La principal ventaja de esta técnica es que puede evaluar rápidamente el comportamiento similar a la fatiga o las intervenciones anti-fatiga utilizando un solo dispositivo de hardware.La demostración visual de este método es fundamental. Es importante observar y comprender cómo se comportan los ratones para poder realizar esta tarea con éxito. Antes de entrenar y probar a los ratones, asegúrese de que la cinta de correr esté sobre una superficie plana y ajústela al ángulo de inclinación deseado, que generalmente es de 10 grados.A continuación, asegúrese de que la frecuencia e intensidad del choque eléctrico estén ajustadas adecuadamente, lo cual generalmente corresponde a dos hercios y 1,22 miliamperios. Coloque debajo de la cinta rodante una hoja de papel o una almohadilla absorbente para recoger heces y orina. Luego, coloque una almohadilla sobre un tercio del alojamiento de la cinta rodante, en el extremo más alejado de la rejilla de choque, para crear un espacio oscuro y así incentivar a los ratones a permanecer en esa zona.Ahora, proceda con el entrenamiento de los ratones. Con la cinta de correr apagada y la velocidad ajustada a cero, cargue rápidamente los ratones, sosteniéndolos por la cola, directamente sobre la banda de la cinta. Después de colocar cada ratón, encienda de inmediato su rejilla de choque correspondiente.Primero, permita que los ratones exploren libremente. Detenga el tiempo de exploración una vez que cada ratón haya recibido al menos una descarga, o después de aproximadamente tres minutos. Luego, encienda la cinta rodante y aumente lentamente la velocidad hasta que comience a moverse a aproximadamente 1,5 a 3,0 metros por minuto.Asegúrese de que todos los ratones comiencen a caminar. Si un ratón no comienza a caminar o camina hacia la rejilla de choque, golpee suavemente al ratón con el cepillo de alambre o use la estimulación de la cola para animarlo a caminar sobre la cinta rodante. Ahora, con todos los ratones caminando, aumente lentamente la velocidad de la cinta rodante a ocho metros por minuto.Intente asegurarse de que los ratones caminen hacia adelante en la cinta mientras aumenta la velocidad durante esta primera sesión de entrenamiento. Si los ratones exploran o giran para enfrentar la rejilla de choque, deje de aumentar la velocidad de la cinta hasta que reanuden la marcha. Luego, inicie un cronómetro y continúe monitoreando el comportamiento.Después de cinco minutos, aumente la velocidad a nueve metros por minuto. Después de siete minutos, aumente la velocidad a 10 metros por minuto. Después de 10 minutos, finalice la sesión de entrenamiento deteniendo la cinta de correr.Permita que los ratones exploren brevemente la cinta rodante un poco más tiempo y devuélvalos a su jaula de alojamiento. No es necesario que todos los ratones de una misma jaula corran al mismo tiempo, pero intente minimizar el número de veces que los ratones son retirados de una jaula determinada. Entre sesiones, limpie la cinta rodante y las rejillas de choque con toallitas de alcohol.Además, reemplace el papel o la almohadilla absorbente debajo de la cinta transportadora. En el segundo día de entrenamiento, repita el procedimiento utilizado el primer día, pero aumente la velocidad de la cinta transportadora a 10 metros por minuto antes de iniciar el cronómetro. Después de cinco minutos, aumente la velocidad de la cinta transportadora a 11 metros por minuto.Después de 10 minutos, aumente la velocidad a 12 metros por minuto y deje que la cinta andadora funcione hasta que hayan transcurrido 15 minutos. Luego, finalice la sesión de entrenamiento. Se pueden realizar días adicionales de entrenamiento si los ratones tienen dificultades con la tarea.Una vez entrenado, permita al menos un día completo de descanso antes de la prueba de fatiga. Es posible dejar un intervalo de hasta siete días sin necesidad de volver a entrenar. En esta prueba, el comportamiento similar a la fatiga se define como pasar cinco segundos consecutivos en la zona de fatiga.La técnica adecuada para retirar a los ratones consiste en sujetarlos cerca de la base de la cola y levantarlos inmediatamente fuera de la cinta de correr. La zona de fatiga es la región de la banda de la cinta que se encuentra a una distancia equivalente a la longitud del cuerpo desde la rejilla de choque, así como la propia rejilla. Antes de la prueba, coloque marcas en la parte superior o lateral de los carriles de la cinta para delimitar la zona de fatiga.A continuación, ajuste la velocidad de la cinta rodante a 12 metros por minuto, pero no encienda la cinta rodante. Asimismo, asegúrese de que las rejillas de choque estén apagadas. Ahora, coloque individualmente los ratones en sus carriles separados y encienda inmediatamente la rejilla de choque correspondiente después de cargar cada ratón.Para comenzar la prueba, active simultáneamente la cinta de correr y un cronómetro. Aumente la velocidad de la cinta de correr según se indica. Este programa se basa en pruebas realizadas con ratones hembras C57 Black 6 y puede necesitar modificaciones para adaptarse a ratones con diferentes capacidades.Observe cuidadosamente a todos los ratones durante toda la prueba, pero no intervenga para ayudar ni motivar a los ratones que entren en la zona de fatiga. No utilice la técnica del cepillo de alambre ni la estimulación de la cola. Solo intervenga cuando un ratón permanezca en la zona de fatiga durante cinco segundos continuos.Cuando esto ocurre, retire inmediatamente al ratón de la cinta rodante y registre la duración y la distancia que corrió. Es fundamental que el experimentador observe cuidadosamente a todos los ratones en la cinta rodante y retire rápidamente aquellos que hayan pasado cinco segundos continuos en la zona de fatiga. Una vez que no queden ratones en la cinta rodante, prepárese para la siguiente prueba.Los ratones fueron entrenados durante cinco días y, posteriormente, para inducir fatiga, se administró 5-fluorouracilo durante cinco días. Se sabe que este fármaco provoca fatiga en humanos y comportamientos similares a la fatiga en ratones. En la prueba de capacidad de ejercicio, que utiliza cosquillas en la cola y ráfagas de aire para motivar a los ratones durante la evaluación, no se observó ninguna diferencia entre los grupos.Al día siguiente, sin embargo, los ratones fueron evaluados utilizando la prueba de fatiga en cinta rodante. Esta prueba reveló una diferencia significativa en la distancia recorrida durante la evaluación entre los ratones tratados con quimioterapia y los ratones control. Para validar que la prueba de fatiga en cinta rodante estaba midiendo un comportamiento similar a la fatiga, se midió la actividad voluntaria de los ratones en una rueda giratoria en un experimento independiente durante los cinco días de tratamiento con 5-fluorouracilo, y durante una noche adicional posterior al último día de tratamiento.Se obtuvieron resultados similares. En un experimento diferente, la prueba de fatiga en cinta rodante también fue capaz de detectar un comportamiento similar a la fatiga en ratones que habían sido tratados con una dosis diferente de 5-fluorouracilo, una vez por semana, durante dos semanas. Cuando se evaluaron regularmente ratones no tratados, mostraron menor disposición a correr tras evaluaciones repetidas.Estos datos sugieren que la prueba con este protocolo debería limitarse a un solo ensayo para evitar una alta tasa de ratones no conformes. Al realizar este procedimiento, es importante observar cuidadosamente a los ratones durante el entrenamiento y las pruebas. No intervenga hasta que se cumpla el criterio de fatiga.Después de ver este video, debería tener una buena comprensión de cómo medir el comportamiento similar a la fatiga en ratones utilizando este protocolo, cómo se comportan los ratones en la cinta rodante y cómo retirar rápidamente a los ratones de la cinta rodante.

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Research

Investigación

JoVE Journal

Behavior

Comportamiento

Aquí descritos son protocolos que se utilizan para visualizar el proceso dinámico de la MG53 mediada por reparación de la membrana celular en todo el animal y en el nivel celular. Estos métodos se pueden aplicar para investigar la biología celular de volver a sellar la membrana plasmática y la medicina regenerativa.

Visualización de MG53 mediada por reparación de la membrana celular mediante In vivo Y In vitro Sistemas de

La prueba de la cola de suspensión se valida como un procedimiento experimental para evaluar la eficacia de los tratamientos farmacológicos antidepresivos en ratones. Los ratones son suspendidos por la cola durante seis minutos y escapar de conductas relacionadas con la evaluación son. Se describen los procedimientos utilizados en la realización de la prueba de suspensión de la cola.

La prueba de la suspensión trasera

Dos paradigmas de ejercicio se pusieron a prueba en un modelo inducido químicamente menopáusica ratón de nuevo desarrollo para examinar el impacto de la menopausia en la capacidad de ejercicio y la adaptación cardiaca al ejercicio.

Un método para estudiar el impacto de la falla ovárica inducida químicamente en la capacidad de ejercicio y la adaptación cardiaca en ratones

La medida de resultado primaria en los ensayos clínicos de trastornos neuromusculares en general se mejoró la función muscular. Por lo tanto, la evaluación del efecto de los compuestos terapéuticos potenciales sobre el rendimiento muscular pre clínica en modelos de ratón es de gran importancia. Se describen varias pruebas funcionales para abordar esta cuestión.

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Se demuestra un método para evaluar la resistencia al ejercicio en ratones de laboratorio sin el uso de una rejilla de choque. Este método es un refinamiento humano que puede disminuir los efectos de confusión del estrés en los parámetros experimentales.

Evaluación de murino ejercicio de resistencia sin el uso de una rejilla de choque: Una Alternativa para el ejercicio forzado

Se describe un método que usa irradiación periférica dirigida a inducir un comportamiento a la fatiga como en ratones. La dosis de irradiación no letal seleccionado conduce a una reducción de una semana de duración de la actividad voluntaria rueda de funcionamiento.

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Pruebas de comportamiento se utilizan en ensayos pre-clínicos para evaluar los efectos fenotípicos de una enfermedad o tratamiento sobre el bienestar de los animales. Para evaluar globalmente el funcionamiento motor, seleccionamos pruebas de locomoción general, fuerza muscular y coordinación: prueba de campo abierto, la malla y la prueba del rotarod, respectivamente.

Batería de comportamiento pruebas evaluación General locomoción, fuerza Muscular y la coordinación en ratones

Este protocolo describe un sistema flexible y de bajo costo para la medición de ambulación de ratón en un ensayo de actividad de campo abierto. Mostramos que un paseo de 6 minutos el análisis basado en este sistema detecta una disminución del movimiento voluntario en ratones mdx y distingue con precisión mejora en un rescate de músculo-específica de estos animales.

Un análisis Simple y de bajo costo para la medición de actividad en modelos de ratón de la Distrofia Muscular

Aquí, presentamos un protocolo para introducir un modelo de rata de la fatiga central mediante la modificación del método de plataforma múltiples (MMPM).

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Una batería de pruebas de comportamiento integral de las habilidades motoras, estado de ánimo, incluyendo la interacción social, depresión y ansiedad — y cognición está diseñada para la evaluación repetida de cambios de comportamiento relacionados con la neurodegeneración en ratones.

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Corto período de sesiones (≤10 min) alto entrenamiento de intensidad intervalo (HIIT) surge como una alternativa a las modalidades de ejercicio más largo, sin embargo, las variantes más raramente están modeladas en estudios con animales. Aquí, describimos un 10 min, 3 días a la semana, protocolo HIIT de cinta de correr cuesta arriba mejora el rendimiento físico en el hombre y mujer entre ratones.

Sesión corta de alta intensidad intervalo formación y evaluación de caminadora en ratones envejecidos

Aprende a medir el comportamiento tipo fatiga en ratones mediante un ensayo en cinta rodante con inclinación de 10 grados. Este método permite evaluar intervenciones anti-fatiga de forma rápida y eficiente.

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El Ensayo de fatiga rueda de ardilla: Un ensayo sencillo, de gran procesamiento de comportamiento a fatiga similar para el ratón

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