La disección y-montaje plana del esqueleto branquial de tres espinas Stickleback

El objetivo general de este procedimiento es diseccionar y montar el esqueleto branquial espinoso. Este método puede ayudar a responder preguntas clave en los campos del desarrollo, la genética y la evolución. Por ejemplo, cómo los animales se adaptan a nuevos entornos y cómo surge la variación en la morfología de los adultos durante el desarrollo.

La principal ventaja de esta técnica es que al diseccionar y montar el esqueleto branquial, se puede visualizar una variedad de rasgos tróficos que no se pueden estudiar en todo el esqueleto. En preparación, revise la morfología esquelética de la cabeza relevante de los tres espinosos espinosos. Después de preparar el pez para la disección, comience insertando pinzas afiladas del número cinco en el costado del ojo, en un ángulo de 45 grados para perforar la membrana que cubre el ojo.

Luego, retira la membrana del ojo, como la tapa de un recipiente de yogur. A continuación, inserte unas pinzas abiertas detrás del ojo, agarre el nervio óptico y retire el ojo. Tenga cuidado de evitar perforar el ojo, o perderá melanina.

Repite este proceso con el ojo en el lado opuesto. Luego, coloque la hoja de una tijera pequeña debajo de la parte posterior del colgajo del opérculo y corte el tejido blando dorsalmente por encima del opérculo, hacia la cuenca del ojo. A continuación, corte a través del hueso frontal, que es dorsal a la cuenca del ojo.

Luego, corta a través del hueso paraesfenoidal de la línea media, alrededor del centro de la cuenca del ojo. Repite el corte del opérculo en el lado opuesto. Para los siguientes pasos, las espinas pélvicas se pueden usar como asas.

Se despliegan tirando suavemente de ellos directamente lejos del cuerpo. Ahora, inserte las pinzas debajo del opérculo y retire lentamente la cara del cuerpo. Recortar cualquier tejido blando que aún esté adherido en el proceso.

Tenga cuidado alrededor de las branquiespinas y tenga cuidado de no interrumpirlas. Es fácil agarrar accidentalmente el primer hueso ceratobranquial, junto con el percoll al extraer el esqueleto facial. Mire debajo de su percoll mientras lo despega hacia adelante para asegurarse de que no tenga nada extra.

Ahora, con fórceps, separe los ceratohiales de ambos lados del basihyal de la línea media, mientras se despega y se retira el esqueleto facial craneal anterior. Repita en el lado opuesto. El esqueleto facial craneal anterior incluye toda la mandíbula, todo el esqueleto hioides, los elementos dorsales y endocondriales subyacentes y la parte anterior del cráneo.

A continuación, inserte pinzas cerradas justo debajo del tubo intestinal y arrástrelas hacia atrás. Separar los músculos y ligamentos restantes unidos al esqueleto branquial en el proceso. Luego, use la punta de las pinzas cerradas para raspar los músculos que unen el esqueleto branquial dorsal a la caja ventral del cerebro.

Raspe con un movimiento posterior a anterior. Repite el proceso de eliminación de músculo en el lado opuesto del espinoso. A continuación, retire el esqueleto branquial, agarrando la base del tubo intestinal y tirando hacia atrás.

Separe el tubo intestinal mediante un corte perpendicular, posterior al quinto ceratobranquial. Un error común es agarrar el tubo intestinal demasiado anterior, lo que deja el tubo frontal ventral muy atrás. Asegúrese de agarrar profundamente en la parte posterior de la cavidad torácica y siempre puede eliminar el tubo intestinal excesivo más tarde.

Después de eliminar cualquier fragmento de hueso restante del cráneo, case en el lado dorsal del esqueleto branquial. Inserte las tijeras en la canasta branquial y haga un corte dorsal entre los conjuntos bilaterales de placas dentales dorsales. Mantenga este corte centrado para evitar causar daños en las placas dorsales de los dientes.

A continuación, haga dos cortes laterales poco profundos en la luz intestinal gomosa en el extremo posterior del esqueleto branquial. En el extremo antieror del tubo intestinal. Para ayudar a abrir el esqueleto branquial.

Ahora, transfiera el esqueleto a un tubo de microsentrifuge cargado con 50 por ciento de glicerol, cero coma dos cinco por ciento de hidróxido de potasio para una limpieza suave. O en su lugar, transfiéralo a glicerol puro si no se requiere más limpieza. Si es necesario volver a teñir, los detalles se dan en el protocolo de texto.

Para prepararse para el montaje, cambie la solución a glicerol puro y agite el tubo durante al menos cinco minutos. Luego, retira el esqueleto branquial y colócalo cerca de la parte inferior de un cubreobjetos de vidrio de 22 por 60 milímetros con el lado dorsal hacia arriba. Ahora, transfiere unas gotas de glicerol al esqueleto.

A continuación, extienda dos bolas pequeñas de arcilla para modelar y juegue una en cada extremo de la cubreobjetos, funcionan como espaciadores. Luego, coloque sin apretar un segundo cubreobjetos sobre la preparación, con suficiente presión para aplanar el esqueleto branquial anterior. Ahora, abra la solapa dorsal izquierda, incluidas las placas dentales dorsales, y deslice la solapa entre los cubreobjetos.

A continuación, haz lo mismo con el colgajo dorsal derecho. Y empuje todo el esqueleto branquial lejos del borde del cubreobjetos. Para completar el procedimiento, presione ligeramente el cubreobjetos superior para aplanar las bolas de arcilla.

Lo suficiente para que mantengan el esqueleto branquial montado plano. Pero, no tanto como para que se aplaste. Si durante el proceso, una fila de rastrillos se oscurece, deslice las pinzas entre los cubreobjetos y reoriente el ceratobranquial o toda la preparación.

Cuando se monta plana en glicerol puro, la preparación se puede almacenar plana a temperatura ambiente durante al menos una década. Este protocolo da como resultado un esqueleto branquial disecado y montado en plano. Donde se pueden cronificar una variedad de rasgos tróficos importantes.

Desde una vista dorsal, todas las filas de branquiespinas, todas las placas dentales faríngeas y casi todos los huesos branquiales se pueden visualizar y cronificar fácilmente. La alizarina roja S, también se flouresa en un filtro rojo de rodamina o similar, lo que permite un doble etiquetado con otros marcadores y métodos alternativos para la visualización. En esta imagen, las branquiespinas están marcadas con quilates.

Los dientes están marcados con puntas de flecha y los huesos con asteriscos. Una vez dominada, la disección se puede realizar en pocos minutos y se puede realizar en cientos de animales con relativa rapidez. Y aunque hemos demostrado una disección del esqueleto branquial espinoso, esperamos que este procedimiento pueda usarse como guía para una variedad de especies de peces.

Al diseccionar el esqueleto branquial, podemos visualizar rápida y fácilmente una variedad de rasgos tróficos importantes, que no son visibles en monturas completas. Permitiendo una mejor comprensión del desarrollo y evolución del esqueleto facial craneal.